丙型肝炎病毒非结构蛋白5A对干扰素α-2b诱导的信号传导和转录激活因子1磷酸化及核转移的影响

目的探讨丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白5A（NS5A）对干扰素α-2b诱导的Janus激酶-信号传导和转录激活子（JAK—STAT）信号传导途径中STAT1磷酸化及核转移的影响。方法用表达HCVNS5A的质粒（pCNS5A）转染Huh7细胞，应用免疫细胞化学技术检测HCVNS5A的表达，用免疫荧光和Western blot方法检测HCVNS5A对干扰素α-2b诱导的STAT1磷酸化和核转移的影响。结果转染了pCNS5A的Huh7细胞质可见HCVNS5A蛋白的表达；以干扰素α-2b诱导30min后，STAT1磷酸化及核转移在转染了表达HCVNS5A的质粒组比转染空白载体pRC／CMV组及未转染组减少，而未转染组及转染空白载体pRC／CMV组间无明显差别。结论表达HCVNS5A的质粒pCNS5A成功转染至Huh7细胞；HCV NS5A减弱干扰素α-2b诱导的STAT1的磷酸化及核转移，提示NS5A影响干扰素α-2b的JAKSTAT信号传导途径可能是HCV干扰素抵抗的机制之一。     

在头戴式放大镜直视下小鼠气管插管方法的建立

目的建立并评价一种新的小鼠气管插管方法。方法30只NIH小鼠分设A、B、C组(n=10),麻醉后特殊体位固定,在头戴式放大镜直视下施行气管插管。A组小鼠经套管注射美蓝,死后解剖判断插管成功与否;B组插管后即拔管,隔天1次,连续2周。C组仅麻醉但不插管,方法同B组。在实验的最后1天,B、C组小鼠的处理同A组。结果所有小鼠死后解剖可见气管下端至肺部均有蓝色物质浸染,插管成功率为100%,B组小鼠经多次插管操作仍能健康存活,与C组比较未发现生长迟缓、体重明显减低等情况。结论我们建立的小鼠气管插管方法操作简单、易学、可重复性强,值得推广。     

青蒿琥酯对Con A诱导小鼠自身免疫性肝损伤的保护作用研究

免疫性肝病是临床上难治性疾病,目前没有特效性药物,因此,研发新的有效干预药物,对防治免疫性肝病有重要的临床价值。为探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对免疫性肝损伤的保护作用,该研究采用不同质量浓度(27,54,108 mg·kg~(-1))Art灌胃小鼠连续7 d,然后尾静脉注射伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导小鼠肝损伤模型。于造模后8 h采血液和肝组织进行血清转氨酶(ALT,AST)、组织病变、炎性细胞因子以及NF-κB关键蛋白表达水平的检测。结果表明,与模型组相比,Art高浓度组显著降低了模型小鼠的肝指数、ALT和AST水平(P0.01),组织病变也明显减轻,同时降低了促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-6,IL-17的水平而增加了炎性抑制因子IL-10的表达(P0.05),并呈现明显的剂量-效应关系。Western blot法检测结果显示108 mg·kg~(-1)Art可显著抑制NF-κB关键蛋白p-p65和p-IκBα的表达(P0.01)。NF-κB特异阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)也可显著抑制p-p65和p-IκBα表达并减轻肝损伤。以上结果说明Art主要通过抑制NF-κB信号通路而对Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤发挥保护作用。该研究为青蒿琥酯用于自身免疫性肝损伤的防治提供了参考。     

糖尿病对口腔种植的影响

糖尿病患者发生牙周炎的几率增加,继而导致失牙的频率增加,使咀嚼功能受损、饮食受限[1].口腔种植术可将无机的异体材料(种植体)锚固在颌骨内,为缺失牙的修复提供支持和固定.然而糖尿病引起的血管变性、创伤愈合缓慢、容易感染等病理变化,可能影响骨结合界面的形成和保持[2],导致种植失败和种植体丧失.     

肝组织HBV总DNA和cccDNA阴性参考值的探讨

目的探讨肝组织乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）总DNA（total DNA,tDNA）和共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA）的阴性参考值,为进一步研究实时定量PCR检测肝组织HBV tDNA和cccDNA的应用价值奠定基础。方法分别有88例HBsAg阳性/抗-HBc阳性、20例HBsAg阴性/抗-HBc阳性和19例HBsAg阴性/抗-HBc阴性慢性肝炎患者入选本研究。肝组织β-globin DNA、HBV tDNA和cccDNA采用实时荧光定量PCR检测,单个肝细胞HBV tDNA和cccDNA含量（copies/cell）=HBV tDNA实测值（copies）/β-globin DNA实测值（copies）和HBV cccDNA实测值（copies）/β-globin DNA实测值（copies）。肝组织HBVtDNA和cccDNA含量的计算单位定义为log_（10）copies/10~6cell。统计分析采用SPSS 13.0软件。结果肝组织HBVtDNA和cccDNA鉴别HBsAg阳性/抗-HBc阳性与HBsAg阴性/抗-HBc阴性慢性肝炎的ROC曲线下面积分别为0.909和0.891（P=0.000和0.000）,最佳截断值分别为5.772和4.883 log_（10） copies/10~6cells;鉴别HBsAg阳性/抗-HBc阳性与HBsAg阴性/抗-HBc阳性慢性肝炎的ROC曲线下面积分别为0.893和0.857（P=0.000和0.000.）,最佳截断值分别为5.559和4.630 log_（10） copies/10~6cells。就HBsAg阳性/抗-HBc阳性慢性肝炎而言,当肝组织HBV tDNA和cccDNA≥5.699和cccDNA≥4.699 log_（10） copies/10~6cells时,肝组织HBV tDNA与cccDNA含量之间均呈显著正相关（P=0.000和0.000）;当肝组织HBV tDNA〈5.699和cccDNA〈4.699 log_（10） copies/10~6cells时,肝组织HBV tDNA与cccDNA含量之间均无显著相关性（P=0.065和0.880）。结论肝组织HBV tDNA〈5.699和cccDNA〈4.699 log_（10） copies/10~6cells可能是合适的阴性参考值。     

结核性脑膜炎患者恢复期异常行为探讨及对策

目的分析恢复期结核性脑膜炎患者异常行为出现的原因及对策。方法分析我院自2011年1月~2014年1月收治的42例结核性脑膜炎恢复期患者,按照恢复期是否出现形为异常分为两组。对照组16例为没有出现行为异常的患者;治疗组26例为出现行为异常的患者。分析形成结核性脑膜炎患者恢复期行为异常的原因,同时分析出现异常行为的处理方法。结果恢复期出现行为异常的患者,与疾病知识掌握不足,心理恐惧、担心因素,长期卧床,护理措施不到位有关,两组比较在统计学上具有显著性意义(χ2=4.116,4.273,4.116,4.099;P0.05)。与没有按医嘱服药无关,两组比较在统计学上不具有显著性意义(χ2=0.294;P0.05)。结论患者疾病知识掌握不足,存在恐惧、担心等不良情绪,长期卧床,护理措施不到位,均能影响患者出现结核性脑膜炎恢复后的异常行为。因此关注患者的健康教育、改善患者的不良情绪,改善患者生活质量,加强护理,可以减少结核性脑膜炎恢复后的异常行为发病率。     

江油市农村结核病患者主动发现效果分析

目的评价在四川省江油市实施的主动发现结核病患者研究效果,探索西部农村地区开展结核患者主动发现对策与措施。方法通过对研究现场居住、工作和学习6个月以上的全部常住人口进行结核病可疑症状筛查,15岁及以下人群进行结核菌素(PPD)试验,对具有肺结核可疑症状者、PPD试验强阳性者及研究重点人群进行胸部X线摄片检查和痰涂片、痰培养检查并确诊,采用χ~2检验、Fisher确切概率法,非参数检验等方法比较主动发现和被动发现方式效果,分析患者特征。结果研究期间共调查32 071人,发现结核病可疑症状者497人、活动性结核病患者117人,期间患病率为363. 15/10万,显著高于当地前3年报告发病率,男性、65岁及以上、外来人口、农民的结核病可疑症状出现风险分别是其他人群的3. 44倍、4. 69倍、3. 85倍和3. 03倍;患病风险分别是其他人群的3. 39倍、9. 36倍、1. 72倍和2. 78倍。检出的活动性患者中有52例(44. 44%)没有咳嗽、咳痰超过2周等结核病可疑症状,菌阳患者中也有7例(28. 00%)无结核病可疑症状。对6 074名肺结核患者的密切接触者、≥65岁老年人、糖尿病患者及HIV/AIDS患者、既往结核病患者进行了胸部X线检查,确诊活动性结核病患者87人,占全人群活动性结核病患者的74. 36%,人群患病率为1 401/10万。其中既往肺结核患者患病率最高,是全人群患病率的30. 18倍。结论仅开展结核病可疑症状筛查不能发现近一半活动性患者,而开展结核病主动筛查能显著提高结核病发现水平,在既往结核病患者和65岁以上老年人中开展主动筛查效率较高。     

几种梅毒血清学检测方法的比较与分析

目的:通过比较梅毒的四种检测方法的敏感性和特异性,建立适合实验室的梅毒检测流程和报告体系。方法:经TP-ELISA筛选出的198例血清标本分别用TPPA、RPR、和金标法进行检测,以TPPA检测结果作为确认,经TPPA确认有96例阳性标本和102例阴性标本。根据检测结果可得出TP-ELISA、RPR、金标法三种方法的敏感性和特异性。结果:以TPPA为标准可得TP-ELISA、RPR、金标法的敏感性分别为98.97%、73.96%、92.70%;特异性分别为97.06%、95.09%、98.04%。TP-ELISA、金标法的敏感性较高,而RPR的敏感性较低,前两者与RPR比较差异有统计学意义(P<0.05)。三种方法的特异性均较高,无明显差异。结论:RPR敏感性较低不适用于大批量筛查,TP-ELISA适用于批量筛查,金标法适用于急诊检测,而三者都存在一定的假阳性和假阴性,为提高梅毒的检出率和准确性建议用TPPA复检。     

白斑、扁平苔藓及口腔癌中人类乳头瘤病毒的检测

目的：比较口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）发展过程中各阶段病损的人类乳头瘤病毒（human papilloma virus, HPV）感染率，以探讨将HPV感染作为癌变预测信号的可能性，同时比较两种方法在检测口腔内HPV感染方面的灵敏度差异。方法：使用第二代杂交捕获（hybrid capture，HC-Ⅱ）法检测255例口腔黏膜上皮细胞样本中的HPV感染情况，样本取自12例健康口腔黏膜、211例病理诊断的病例和32例临床诊断的病例，具有病理诊断和临床诊断的病例包括口腔黏膜良性病变8例、癌前病变口腔黏膜白斑（oral leukoplakia，OLK）伴上皮单纯增生74例、OLK伴上皮异常增生（oral epithelial dysplasia, OED）42例、癌前状态扁平苔癣（oral lichen planus，OLP）91例以及OSCC 28例。使用原位杂交（in situ hybridization，ISH）法检测109例石蜡包埋组织中的HPV感染情况，包括33例OSCC 和76例OLK，76例OLK中有30例上皮单纯增生、15例轻度OED、15例中度OED、16例重度OED。结果：OLP样本的HPV阳性率为12.12%（8／66），高于OLK （2.59%， 3／116， χ2=4.666，P =0.031）及OSCC（7.14%， 2／28， χ2=0.513，P=0.474）；OSCC样本的HPV阳性率（7.14%，2/28）高于OLK（2.59%， 3/116），但差异无统计学意义;烟斑样本只有1例，没有参与统计学分析。ISH法检测109例口腔黏膜病损石蜡切片中16/18型及31/33型HPV DNA，仅1例OSCC样本为阳性；同时经HC Ⅱ和ISH法检测的样本中有94.6%（35/37）的检测结果一致，均为阴性；另2例分别为OSCC早期浸润和OLK伴上皮单纯增生，经HC-Ⅱ检测为HPV阳性，但ISH检测结果为阴性。随访66例参与HPV检测的OLP患者，平均随访期为（36.2±10.5）个月，发现其中3人发生了癌变，HPV阳性患者癌变率为12.50％（1／8）,高于HPV阴性患者癌变率3.45％（2／58），通过卡方检验差异无统计学意义，P＝0.249。结论：没有足够证据证明HPV感染或检测阳性可作为预测OLK癌变的信号；患OLP的患者处于癌前状态，OLP中HPV检出率高于OLK及OSCC，提示OLP患者由于某种原因对HPV易感，可考虑为OLP 患者常规做HPV检测，推荐使用HC-Ⅱ法，同时应对HPV阳性的OLP患者加强随访。     

恩替卡韦与拉米夫定治疗乙型肝炎失代偿性肝硬化临床观察

目的探讨恩替卡韦治疗乙型肝炎失代偿性肝硬化(DLC)患者的临床疗效和安全性。方法 63例Child-PughB级乙型肝炎DLC患者在综合治疗的基础上,分为恩替卡韦治疗组30例(给予恩替卡韦0.5 mg口服,1次/d)和拉米夫定对照组33例(给予拉米夫定100 mg口服,1次/d),疗程均在48周以上。在治疗开始前、开始后1、12、24、48周分别检测血清乙肝病毒定量(HBV DNA)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、肝肾功能、凝血功能、血清肌酐(SCr)、血常规和Child-Turcotte-Pugh分级(CPT评分)等指标。结果恩替卡韦组有24例、拉米夫定组30例已完成48周治疗。恩替卡韦组治疗失代偿性乙型肝炎肝硬化与拉米夫定组疗效相似。拉米夫定组有7例出现耐药加用阿德福韦酯联合治疗,恩替卡韦组无1例发生耐药。恩替卡韦组2例、拉米夫定组3例发生原发性肝癌。结论恩替卡韦治疗乙型肝炎DLC1年临床疗效较明显,无耐药发生,是乙型肝炎DLC抗病毒治疗的有效药物。