山东济宁骚扰库蚊对常用杀虫剂的抗性研究

目的 对山东济宁发现的骚扰库蚊进行鉴定,研究其对5种常用杀虫剂的抗性水平。方法 在某小区半地下车库积水中采集库蚊幼虫,对收集到的库蚊进行初步形态学和分子生物学鉴定,确定库蚊的种类。采用幼虫浸渍法研究其对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯、苏云金杆菌以色列变种(Bti)5种杀虫剂的抗性。结果 采集到的库蚊幼虫是骚扰库蚊,为山东省首次报道,其对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯、Bti的抗性倍数分别为117.34、53.47、113.50、140.00、2.71。结论 骚扰库蚊作为山东省新出现的蚊种,有必要对其生物学行为和流行病学意义进行深入研究。     

淡色库蚊对苏云金杆菌及化学杀虫剂的抗性研究

目的探讨苏云金杆菌以色列亚种(Bti)与常用化学杀虫剂联合使用对东平湖地区淡色库蚊幼虫的杀灭效果。方法采用幼虫浸渍法测试现场淡色库蚊幼虫对Bti及5种化学杀虫剂的抗性,采用简单复配法检测Bti分别与5种化学杀虫剂混用的增效效果,增效明显的2组再次进行复配验证。结果现场淡色库蚊幼虫对Bti、溴氰菊酯、氯氰菊酯、敌敌畏、残杀威、三氯杀虫酯的抗性倍数分别为1. 04、106. 00、83. 00、5. 03、3. 51、1. 01。Bti分别与5种化学杀虫剂简单复配时均有增效效果,Bti+残杀威增效效果最佳(19. 63),其次为Bti+氯氰菊酯(11. 59)。进一步复配结果显示,残杀威与Bti以不同比例复配时都具有增效作用,其中以1∶3比例复配时共毒系数最高(189);当氯氰菊酯与Bti以1∶1及1∶3比例复配时,表现出增效作用(共毒系数:114、135)。结论将Bti与化学杀虫剂联合应用(尤其是残杀威)对山东省东平湖地区淡色库蚊有较好的灭杀效果,可延缓抗药性的发展,是蚊虫抗性治理中较为重要的防治策略。     

鲁西南地区淡色库蚊抗药性评价

目的　掌握鲁西南地区现场淡色库蚊对常用化学杀虫剂的抗药性,为制定合理有效的蚊虫防治措施提供参考。方法　采用WHO生物测试法与药物复配法,2018年6-9月测试山东省西南地区济宁市、菏泽市、枣庄市淡色库蚊幼虫对氯氰菊酯、溴氰菊酯、敌敌畏（DDVP）、残杀威、三氯杀虫酯5种化学杀虫剂的抗性,以及杀虫剂混合后的共毒系数。结果　3个地区淡色库蚊对氯氰菊酯、溴氰菊酯、DDVP、残杀威、三氯杀虫酯的抗性倍数分别为144.43～557.54、118.17～445.33、6.44～19.00、2.37～8.10、0.88～2.98,除济宁与菏泽地区淡色库蚊对DDVP的抗性差异无统计学意义（P > 0.05）外, 其他差异均有统计学意义（P均 < 0.05）。氯氰菊酯 + DDVP、氯氰菊酯 + 残杀威、DDVP + 三氯杀虫酯、残杀威 + 三氯杀虫酯复配后共毒系数分别为199.58～456.95、190.56～292.37、123.32～319.24、192.31～367.32,DDVP + 残杀威复配效果不佳（共毒系数：99.87～108.36）。结论　经过几十年的化学防治,鲁西南地区淡色库蚊对常用化学杀虫剂均表现出不同程度的抗性;应采取综合防治措施控制蚊虫孳生,以延缓抗药性的发展。     

济宁市太白湖新区越冬成蚊现状监测分析

目的 调查济宁市太白湖新区越冬蚊的种类、密度及分布情况。 方法 于2015年12月至2016年3月,在济宁市太白湖新区选取成蚊监测点采用目测法观察蚊虫数量并记录结果,同时捕捉成蚊在解剖镜下分类鉴定并观察吸血情况。随机选取50%进行解剖,观察蚊虫体内脂肪体累积和卵巢发育情况。 结果 共捕获成蚊1 677只,均为淡色库蚊。蚊虫越冬以地瓜窖、花房较多,成蚊阳性率分别为98.25%（56/57）和81.36%（48/59）。雌蚊2月下旬体内脂肪体骤减,3月上旬开始出现吸血和卵巢发育,3月中旬体内脂肪开始消失。 结论 济宁市太白湖新区淡色库蚊以成蚊越冬,主要越冬场所为地瓜窖、花房,应在越冬期加强成蚊的控制工作。     

山东省淡色库蚊越冬情况调查

目的 了解山东省淡色库蚊冬季生态习性。方法 于2015年12月至2016年1月,在山东省选取调查点进行淡色库蚊越冬情况的调查。结果 淡色库蚊在山东省以成蚊越冬,越冬场所在农村主要为地窖、水井、山洞等;在城市则以防空洞、城墙洞、下水道、花窖等处为主,在人房内和牲畜房内均较少。结论 山东省淡色库蚊越冬处所多为高温高湿且避光的地窖和坑洞为主,且其幼虫不能越冬。     

中华按蚊吸血趋性和吸血前后活动情况的观察

目的观察中华按蚊吸血趋性和吸血前后活动情况,为改进灭蚊措施,提高防制效果提供依据。方法利用室外人、牛饵帐诱捕法进行中华按蚊吸血趋性观察,采用实验小屋法观察蚊虫吸血前后活动情况。结果室内人饵帐捕获中华按蚊约是室外捕蚊数的2.99倍,差异有统计学意义(χ2=15.12,P<0.01);室内外牛饵帐诱捕蚊数相近,差异无统计学意义(χ2=0.69,P>0.05)。牛房傍晚3h的捕蚊数为白天栖息该室内蚊虫数的12.59倍,在室内吸血前后停息1~10min者约占50%,停息30min以内者占80%以上,差异均有统计学意义(P<0.05);停息60min以上者仅占10%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论中华按蚊具有偏外栖性,这是滞留喷洒杀灭效果不理想的重要原因。基于其吸血前后室内短暂停留的行为习性,应选用无驱避性且具有熏杀作用的速效高效杀虫剂杀灭室内中华按蚊。     

利用蛋白组学解析淡色库蚊对氯氰菊酯的抗性机制

目的　比较氯氰菊酯选育后抗性淡色库蚊与敏感淡色库蚊蛋白差异表达情况,揭示淡色库蚊抗氯氰菊酯杀虫剂的机制。方法　利用同位素相对和绝对定量（iTRAQ）技术,结合液相色谱/串联质谱（LC?MS/MS）分析技术,对氯氰菊酯敏感与抗性淡色库蚊进行蛋白组定量分析。结果　共鉴定出164种蛋白在氯氰菊酯抗性选育前后差异表达,其中上调蛋白54种、下调蛋白110种,大量细胞骨架结构与组成相关的表皮蛋白、幼虫表皮蛋白、蛹表皮蛋白及表皮结构成分蛋白在淡色库蚊氯氰菊酯抗性选育前后差异表达。通过平行反应监测验证了能量产生与转换、翻译、核糖体结构与生物发生、脂质转运与代谢、翻译后修饰、蛋白质周转、分子伴侣、细胞骨架、细胞内运输等13种类型的蛋白在淡色库蚊氯氰菊酯选育后差异表达,可作为潜在抗性发生标记物。结论　氯氰菊酯抗性淡色库蚊中同时存在表皮抗性及代谢抗性等多种杀虫剂抗性机制,与抗氯氰菊酯杀虫剂相关的表皮基因及细胞色素P450蛋白酶可能在淡色库蚊氯氰菊酯抗性中发挥了重要作用。     

微山湖区放养子代钉螺生殖腺透射电镜观察

目的观察在微山湖区螺笼放养12个冬季、繁殖12代的成年钉螺睾丸、卵巢形态变化。方法以亲代来源于长江扬州段的微山湖子代成年钉螺为实验组,以长江扬州段江滩阴性成年钉螺为对照组,解剖两组钉螺获得完整的睾丸和卵巢标本。以常规方法固定、脱水、包埋标本,烘箱内聚合,用超薄切片机常规切片,取切片在透射电子显微镜下拍照和观察,比较两组钉螺生殖腺超微结构。结果对照组钉螺精子细胞尾部横切面可见"9+2"微管结构,头端可见三角形顶体和呈螺旋形且致密的核质;实验组钉螺精子细胞尾部横切面"9+2"微管结构消失,头端染色质密度稀疏。对照组钉螺卵巢卵细胞核仁、核膜清晰,细胞质内可见卵黄体、脂质体、内质网,核膜为双层曲折,核仁均匀;实验组钉螺卵巢卵细胞核膜光滑,核仁不明显,细胞内含物更加稀疏。结论经过12个冬季放养,钉螺不能完全适应中国北方的自然环境,其生殖腺超微结构发生了明显变化,这可能是微山湖区放养钉螺逐步减少甚至趋于消亡的原因之一。     

基于iTRAQ的定量蛋白质组学技术探索 淡色库蚊越冬机制

目的　比较淡色库蚊越冬后与滞育准备阶段蛋白表达差异,探索淡色库蚊越冬休眠（滞育）的机制。方法　采用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术,对越冬滞育及准备阶段淡色库蚊进行定量蛋白质组学分析。结果　淡色库蚊越冬滞育前后共鉴定出244种差异表达蛋白,其中上调蛋白126种、下调蛋白118种。生物信息学分析表明,这些差异表达蛋白与能量产生及转化、脂代谢、细胞骨架重塑、糖代谢、蛋白质转运、分子伴侣、应激耐受以及各种代谢酶等有关。结论　本研究首次采用现代蛋白质组学工具鉴定淡色库蚊越冬滞育相关蛋白,初步揭示了与淡色库蚊越冬滞育相关的KEGG通路及蛋白,进一步扩展了对蚊媒越冬滞育机制的理解。     

淡色库蚊氨肽酶N基因的克隆及生物信息学分析

目的 克隆淡色库蚊Bt毒素受体氨肽酶N(Aminopeptidase N,APN)基因,并对基因及编码蛋白进行生物信息学分析.方法 提取淡色库蚊RNA,通过RT-PCR扩增氨肽酶N基因的全长cDNA序列,纯化PCR产物连接至pMD19-T载体,阳性重组质粒经PCR鉴定后进行基因测序.生物信息学分析APN基因的序列同源性及编码蛋白的结构特征.结果 该基因cDNA序列全长为1 383 bp(含终止密码子),编码460个氨基酸,与致倦库蚊XM_001862270.1序列的同源性为100%.预测蛋白质分子量为52.9 kDa,等电点为4.98.前21个氨基酸为N-末端的信号肽,存在2个N-糖基化位点( 93NLT95和¹⁶⁹NVS¹⁷¹).具有肽酶家族M1的序列特征,锌结合位点HEXXH和谷氨酸锌化氨肽酶的保守结构GAMEN.结论 成功克隆了淡色库蚊氨肽酶N基因并对APN蛋白进行生物信息学分析,为进一步探讨淡色库蚊APN的功能及Bt毒素作用机制奠定了基础.