纳米粒子包载反义雷帕霉素靶蛋白基因转染对移植静脉内膜增生的影响

目的观察纳米粒子包载的反义雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）和聚乙烯醇（PVA）包载mTOR基因。建立自体静脉移植模型，随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染纳米粒子包载的反义mTOR基因，空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体，对照组不予特殊处理。分别于移植3、7、14、28d取材，常规苏木素．伊红（HE）、Verhoeff染色，检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达的变化，TUNEL法观察血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的动态变化。结果转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达明显减少（P〈0．01）；转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少（P〈0．01）；转基因组凋亡细胞明显增多（P〈0．01）。结论纳米粒子可以作为基因载体，反义mTOR基因的表达能够抑制移植静脉内膜的增生，促进VSMC凋亡。     

局部注射IGF对大鼠正畸牙齿移动的影响

目的：观察局部注射重组鼠的胰岛素样生长因子-1（rrIGF-1）对大鼠正畸牙齿移动的影响,探讨IGF在正畸牙齿移动中的作用机制。方法：建立大鼠牙齿移动模型．实验中分别将rrIGF及生理盐水注射入实验组及对照组大鼠右侧上颌第一磨牙腭侧的骨黏膜下,分别在加力1、3、7、14、21d后记录上颌第一磨牙移动距离。用HE染色观察牙周组织变化情况并采用免疫组织化学方法对组织中表达的IGF进行分析。结果：实验组大鼠压力侧破骨细胞数和成骨细胞数在实验全过程中均多于对照组,实验组大鼠牙齿移动距离明显大于对照组。结论：证实IGF参与了牙齿移动过程中的牙周组织改建,内源性IGF和注射IGF都使牙齿移动量显著增加。     

Egr 1,PDGF B,TGF β1在自体移植静脉中的实验研究

目的研究移植静脉中早期生长反应基因(Egr)-1、血小板源性生长因子(PDGF)-B、转化生长因子(TGF)-β1的表达,探讨它们之间的关系及其在内膜增生(IH)中的作用.方法Wistar大鼠90只,建立自体静脉移植模型.术后随机分为1,2,6,24h,3,7,14,28,42d组,分别在相应时点取材,并设正常对照组.应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1、PDGF-B、TGF-β1的mRNA表达,联合应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测两组静脉中Egr-1,PDGF-B,TGF-β1蛋白表达情况,同时进行组织形态学研究.结果正常静脉中未检测到Egr-1,PDGF-B,TGF-β1 mRNA和蛋白的表达.移植静脉组Egr-1 mRNA在移植28d达高峰(45%±6%);PDGF-B mRNA在14d达高峰(48%±6%);TGF-β1 mRNA在7d达高峰(46%±9%).Egr-1蛋白表达在移植28d达高峰(40%±9%);PDGF-B蛋白在28d达高峰(45%±4%);TGF-β1蛋白在14d达高峰(41%±7%).结论移植静脉内膜增生与Egr-1,PDGF-B,TGF-β 1的表达关系密切;PDGF-B和TGF-β1的激活及表达可能受Egr-1的调节,同时也可能通过反馈机制促进Egr-1的高表达.     

脾次全切除术治疗门脉高压症的实验研究

目的:检测门脉高压症脾次全切除术后细胞免疫、体液免疫和组织学的变化,初步评价脾次全切除术在门脉高压症中的作用。方法:建立肝硬化门脉高压症大鼠模型,大鼠腹部皮下注射60%四氯化碳(CCl4)0.3ml/100g油溶液,同时10%乙醇溶液代替饮水,测量门静脉压≥12mmHg及病理学证实模型成功。对各组进行血常规、免疫球蛋白、T淋巴细胞亚群的测定及HE染色组织学观察。结果:保留约正常脾脏大小的脾部分切除组与正常对照组术后血常规、免疫球蛋白和T淋巴细胞亚群的水平无显著性差异。保留约正常脾脏大小的脾部分切除组肝纤维化程度减轻;脾包膜变薄,脾实质轻度充血。结论:门脉高压症的残余脾脏具有一定的生理功能;保留约正常脾脏大小的脾部分切除术在一定程度上能够维持机体的体液免疫和细胞免疫。     

纳米粒子介导Egr-1 DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生

背景：应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题。目的：观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法：构建Egr-1DNA酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA酶,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型210只,随机分成3组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。结果与结论：转基因组内膜中Egr-1基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少（P〈0.05）;在术后7,14,28d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少（P〈0.01）;转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高（P〈0.05）。结果表明Egr-1DNA酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡。     

Egr-1DNA酶抑制自体移植静脉内膜增生的实验研究

目的 探讨早期生长反应基因-1 (Egr-1) DNA酶(Egr-1 DNA enzyme,EDRz)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和内膜增生的抑制作用,从而证实基因治疗静脉移植后狭窄、闭塞的可行性.方法 构建EDRz,建立自体静脉移植模型,将大鼠右颈总静脉端-端吻合于肾下腹主动脉,EDRz转染移植静脉,分别于移植后1、2、6、24 h及3、7、14、28、42 d切取移植静脉标本,每个时相按随机数字表法随机抽取10只大鼠.荧光显微镜下观察EDRz转染移植静脉情况;应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达;应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1蛋白表达情况;HE染色光镜下观察组织学形态.结果 ①EDRz转染移植静脉情况:移植后1h时,EDRz主要位于移植静脉的外膜、中膜和部分内皮细胞;2、6及24 h时,EDRz则主要位于移植静脉的中膜;7d时,EDRz主要位于移植静脉的内膜; 14、28及42 d时未检测到EDRz的表达.②Egr-1 mRNA表达结果.RT-PCR检测结果:转染EDRz后1h时,Egr-1 mRNA表达出现高峰,2、6及24 h表达下降,3d时表达微弱,移植后7、14、28及42 d未见Egr-1 mRNA的表达,转染EDRz后1h时Egr-1 mRNA表达明显高于其余各时相(P＜0.01).原位杂交检测Egr-1 mRNA表达的变化趋势与RT-PCR结果基本一致.③Egr-1蛋白表达结果.Western蛋白印迹结果:正常静脉中未检测到Egr-1蛋白阳性表达.转染EDRz后2h时,出现Egr-1蛋白阳性表达,6h、24 h及3d时其表达逐渐降低,移植后1h时和移植后7、14、28及42 d时未见Egr-1蛋白阳性表达.移植后2h时的Egr-1蛋白表达的吸光度值高于其他时相(P＜0.01).免疫组织化学方法检测的Egr1蛋白阳性表达的变化趋势与Western蛋白印迹结果基本一致.④EDRz转染移植静脉与未转染同期相比VSMC的增殖程度和内膜厚度明显减轻.结论 EDRz通过减少Egr1在自体移植静脉中的表达,可有效地抑制自体移植静脉中VSMC增殖和内膜增生,可用来防治自体静脉移植后所导致的血管狭窄、闭塞.     

神经生长因子促大鼠缺血后肢血管再生的实验研究

目的：通过制备大鼠后肢缺血模型,我们对神经生长因子（NGF）促大鼠缺血后肢血管再生的功能进行评价,为临床上治疗下肢缺血性疾病提供一些新的思路及实验依据。方法：通过结扎W istar大鼠一侧股动脉制备大鼠缺血后肢模型,通过EL ISA和免疫组化,观察缺血后肢的血管再生与NGF及其高亲和力受体在缺血组织中的表达与是否具有相关性的作用。结果：反复的缺血内收肌的NGF注射,可以增加毛细血管和小动脉的密度,减少血管内皮细胞及纤维细胞的凋亡,并在不改变血流动力学的前提下加速缺血再灌注。结论：结果表明NGF在血管的修复和新生血管的形成中起到很大的作用。此外,在组织缺血的条件下,NGF途径的正反馈作用,刺激了血管再生及动脉形成,从而加速了血液血流动力的恢复,NGF可以促进血管内皮生长因子（VEGF）在缺血肢体骨骼肌中的表达,从而可能促进缺血肢体的血管再生;通过增加一定剂量的NGF,可以明显改善缺血肢体的功能恢复。NFG促血管再生的机制可以做为缺血性血管疾病的治疗的一个科研方向。     

自体移植静脉中早期生长反应基因1的表达及意义

目的:研究自体静脉移植后早期生长反应基因1(Egr-1)表达的动态变化,探讨其在内膜增生(IH)中的作用.方法:Wistar大鼠80只,建立自体静脉移植模型.应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mtRNA的表达,应用Western蛋白印迹和免疫组化方法检测Egr-1蛋白表达情况,同时进行组织形态学研究.结果:自体静脉移植后,Egr-1mRNA和Egr-1蛋白的表达具有双相变化.移植1 h,Egr-1 mRNA阳性率为(35±7)%,6 h和24h时下降,7 d时重新升高,4周达高峰(45±6)%.移植早期2 h即有Egr-1蛋白的表达,阳性率为(30±5)%,并持续至6h,24 h～3 d表达下降,移植4周Egr-1蛋白的阳性表达率达到高峰(40±9)%.结论:Egr-1的激活及表达与自体移植静脉内膜增生关系密切,Egr-1可能成为防治移植静脉内膜增生及狭窄、闭塞的一个新的干预靶点.     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制     

纳米粒子介导Egr-1 DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生**☆

背景：应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题。 目的：观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响。 方法：构建Egr-1 DNA酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA酶,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型210只,随机分成3组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。 结果与结论：转基因组内膜中Egr-1基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P < 0.05);在术后7,14,28 d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少(P < 0.01);转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高(P < 0.05)。结果表明Egr-1 DNA酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡。 关键词：纳米粒子;DNA酶;移植静脉;转染;血管平滑肌细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.08.006