bcl-2 bcl-x和bax基因多态性与系统性红斑狼疮易感相关性

目的 探讨bcl-2、bcl-X和bax基因中7个多态位点同系统性红斑狼疮(SLE)是否存在相关性。方法 采用引物引入限制性内切酶分析(PIRA-PER)、四引物扩增阻滞突变系统以及单链构象多态性(SSCP)技术，分析100名正常人和88例SLE患者bcl-2基因的3个单核苷酸多态性(SNP)位点(dbSNP：rs1800477，rsl801018．rs1564483)、bcl-x基因的3个SNP位点(dbSNP：rs6060900，rs6089046，rs5841091)及bax基因的1个微卫星位点。以Logistic回归分析统计实验数据。结果 SLE患者组bcl-2基因rs1800477位点的GG基因型频率高于正常人群(P=0．013)，rs1564483位点GG基因型频率则低于正常人群(P=0．024)；rs1801018位点则无统计学意义。bcl-x和bax的所选位点均没有表现出多态性。结论 bcl-2基因rs1800477和rs1564483两位点多态性可能与SLE相关。     

云南汉族系统性红斑狼疮与HLA-B等位基因相关性的研究

人白细胞抗原(HLA)系统是人类最为复杂的免疫遗传系统，与许多免疫疾病的发生直接或者间接相关。系统性红斑狼疮(SLE)与HLA的相关性研究一直受到国内外的关注，目前，国内研究SLE与HLA关联的报道多见于DQ、DR和TNF等基因。我们应用聚合酶链反应，序列特异性引物(PCR-SSP)方法对云南汉族SLE与HLA-B基因的相关性进行了研究。     

IgY的制备与应用进展

随着对鸡卵黄免疫球蛋白（ＩｇＹ）研究的逐步深入，发现它在生物学特性和制备方面具有一些独特优点，因此它已被广泛地用于抗哺乳动物蛋白的抗体制备，检验诊断和疾病防治中，本文将近年来这些方面的研究进展作一综述。     

建立不同民族永生细胞株质量控制方法的探讨

目的以建立普米族、独龙族和怒族永生细胞为基础,探讨EB病毒转化细胞、细胞培养、冻存、复苏以及支原体检测等建立永生细胞株的技术要点及质量检测方法.方法采用EB病毒转化技术建立3个民族永生细胞株;培养法和PCR法对细胞株进行支原体污染检测;染色体G显带及核型分析细胞株的遗传稳定性.结果成功建立了3个民族B淋巴细胞永生细胞株,转化率分别为98%、86%和76%.对已建株保存的3个民族的永生细胞进行复苏培养,复苏成活率为100%.支原体污染检测均为阴性.染色体计数和G带分析显示,细胞株经早期传代培养后,仍然保持二倍体特征,未发现染色体结构畸变.结论本研究中传代培养、细胞冻存、细胞复苏和支原体污染防范等一整套技术过程是满足建库要求的.同时为大规模永生细胞库的建立和进行相应的质量监测提供了科学的依据.另外,本研究还对一些影响转化的因素和可能的机理进行了探讨.     

ERAP1基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关联研究

目的：探讨内质网氨肽酶1（endoplasmic reticulum aminopeptidase 1,ERAP1）基因多态性与非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的相关性。方法入选NSCLC患者224例,健康体检人群207例。采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP1基因SNP rs26653和rs26618两个位点进行基因分型,并构建单倍型,评估上述两个SNPs及单倍型与NSCLC的相关性。结果病例组和对照组ERAP1基因rs26618和rs26653基因型和等位基因频率差异有统计学意义（P＜0.05）。病例组和对照组rs26618/rs26653单倍型CG、TC的单倍型频率差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ERAP1基因与NSCLC的发生有关, rs26618/rs26653-CG单倍型可能增加NSCLC的患病风险,rs26618/rs26653-TC单倍型对NSCLC可能具有保护性作用。     

中国四个少数民族九个Y-STR位点基因频率和单倍型研究

目的 通过对中国满族、维吾尔族、壮族、柯尔克孜族4个少数民族群体共117个男性样本9个Y-STR位点的多态性分析，得到其相关位点的多态信息。方法 对所有样本的9个Y-STR位点进行PCR扩增，产物在ABI PRISM^TM377 DNA Sequencer上进行电泳，结果用Genotyper2．0软件进行分型。计算基因频率、多样性、遗传距离。结果在这9个位点上满族有43个等位基因，32种单倍型；维吾尔族43个等位基因，33种单倍型；柯尔克孜族有31个等位基因，15种单倍型；壮族有34个等位基因，23种单倍型。其中满族和维吾尔族的遗传距离最小，仅为0．02530。而柯尔克孜族和壮族的遗传距离最大，达到了0．34590。结论 4个民族均有较高的单倍型多样性。研究不同民族群体的遗传多样性对了解他们的起源、迁移以及相互关系有重要的意义。     

残余牛血清蛋白ELISA检测方法的建立及其初步应用

建立检测疫苗中残余牛血清蛋白(CSP)含量的ELISA检测法。将混合的小牛血清分别免疫鸡和家兔,然后分别提取、纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)和兔抗小牛血清抗体IgG。IgY用作包被抗体,IgG用作酶标抗体,四甲基联苯胺(TMB)显色检测残余CSP含量。结果:包被用IgY的最适浓度为25—30μg/mL,用含0.4%明胶的0.01mol/LPBS(pH7.4)溶液作为包被缓冲液,HRPIgG的最适稀释度为1:20001:3000。该方法的检测灵敏度为2.5ng/mL,变异系数为6.3%—9.4%,回收率为90.4%—112.8%,与猪、猴、豚鼠血清皆无交叉反应。10批不含Al(OH)3的疫苗ELISA法与RPHA法(反相间接血凝法)检测结果无显著性差异(P>0.05);而10批含Al(OH)3的疫苗,两种方法检测结果相差很大(P<0.05)。建立的ELISA检测法不受Al(OH)3的影响,简便、特异和灵敏,更适用于检测生物制品中的残余CSP。     

肺癌中长链非编码RNA DICER1-AS1的表达变化及意义

目的检测肺癌组织以及细胞系中lncRNA DICER1-AS1的表达情况,并结合临床数据分析其临床应用价值。方法收集39例经病理诊断确诊肺癌患者的组织样本;培养肺癌细胞系A549、H1299以及二倍体人胚肺细胞系KMB17;实时荧光定量PCR检测lncRNA DICER1-AS1mRNA表达量。结合临床数据比较不同患者的lncRNA DICER1-AS1表达差异。结果肺癌组织中DICER1-AS1表达量0.98 (0.53,1.72)高于癌旁组织0.64(0.40,0.92)(P <0.05)。肺癌细胞系A549以及H1299的DICER1-AS1表达量分别为(23±2.7)、(42.3±0.48)均高于KMB17的(5.84±1.07)(P <0.05)。而不同性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期与DICER1-AS1在组织中的表达高低间差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中DICER1-AS1的表达高于癌旁组织,其高表达可能会是促进肿瘤发生以及发展的重要因素,有助于临床肺癌对患者的诊断以及治疗。     

钩端螺旋体OmpL1抗原表位预测、克隆和表达

目的　应用生物信息学方法预测钩体外膜蛋白OmpL1的表位 ,结合基因工程手段进行表位重组、表达和分离纯化。方法　用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测OmpL1的表位 ,PCR合成重组表位基因片段 ,克隆PCR产物构建表达质粒 pGEX/Omp Omp ,测序验证。对含有该质粒的大肠杆菌BL2 1(DE3)进行诱导表达 ,表达产物westernblot分析并纯化融合蛋白。结果　预测到 2个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段。重组表位基因序列与理论设计完全一致。IPTG诱导BL2 1(DE3)中高效表达Mr约 30 0 0 0的融合蛋白 ,纯化后蛋白纯度 >90 %。结论　成功构建原核表达质粒pGEX/Omp Omp ,并进行含重组表位的GST融合蛋白的分离纯化 ,为OmpL1的表位研究和应用于亚单位疫苗奠定了基础。     

阿帕替尼联合大剂量丹参酮IIA对肺腺癌A549细胞株凋亡及Bim异构体的影响

目的:观察阿帕替尼与丹参酮IIA单药及不同时序联合用药方案对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响，并探究其作用机制。方法:培养肺癌A549细胞，用梯度浓度的阿帕替尼(0、5、10、20、40、80 μmol/L)及丹参酮IIA(0、5、10、20、40、80 μmol/L)分别处理A549细胞，应用CCK8法检测其对细胞增殖的抑制作用；流式细胞技术（Annexin V/PI 双染法）检测不同用药组作用48 h后的细胞凋亡率；半定量RT-PCR检测凋亡相关基因Bim异构体的表达情况。结果:阿帕替尼及丹参酮IIA单药对A549细胞的增殖均有抑制作用，且呈现浓度依赖性。两种药物联合使用时，联合用药组增殖抑制和凋亡率优于单药组和改变药物顺序的序贯组。结论:阿帕替尼与丹参酮IIA单药以及联合用药均可抑制A549细胞的增殖并促进凋亡；最佳联合方案为阿帕替尼联合丹参酮IIA同时使用，细胞凋亡率最高；其作用机制之一可能是联合用药通过转录和mRNA选择性剪接来上调Bim L基因的表达,从而促进细胞凋亡。