ELF4通过激活Akt通路促进胰岛素瘤细胞增殖并抑制细胞凋亡

目的 探索ELF4促进胰岛素瘤细胞增殖与抗凋亡的作用及其机理。方法 利用逆转录病毒载体系统,构建稳定高表达ELF4的胰岛素瘤细胞BON-ELF4,以及载体对照组细胞BON-Vector。采用MTT法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BON-Vector各组细胞的生长情况。采用0.1 μmol/L化疗药物表阿霉素处理BON-ELF4和BON-Vector细胞24 h后,检测细胞凋亡相关指标,采用免疫印迹法检测各组肿瘤细胞中凋亡通路关键因子caspase-9,caspase-8和PARP切割带的表达水平;采用Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术分析各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BON-Vector细胞中Akt磷酸化水平。结果 免疫印迹法检测结果显示,BON-ELF4细胞中ELF4蛋白表达量高于对照组细胞BON-Vector（P=0.013）,稳定高表达外源性ELF4蛋白的细胞系BON-ELF4构建成功。稳定高表达ELF4的细胞系BON-ELF4生长明显较快（P<0.05）。相比较于载体对照组 BON-Vector,BON-ELF4 细胞在 0.1 μmol/L 表阿霉素处理 24 h 后 caspase-8,caspase-9的蛋白前体降低,而caspase-8,caspase-9切割成熟体升高（P<0.05）;同时,相应的PARP切割带随着ELF4的高表达而降低（P<0.05）;流式细胞术检测结果显示,22.90%的载体对照组BON-Vector细胞呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果,6.03%的BON-ELF4细胞组呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果。外源高表达ELF4的肿瘤细胞中Akt的磷酸化显著升高（P<0.05）,而Akt总蛋白的水平基本未受影响（P>0.05）。结论 ELF4能通过激活Akt通路而促进胰岛素瘤胞增殖和抗凋亡。