重庆地区地中海贫血基因突变类型分析

目的了解重庆地区地中海贫血患者基因突变类型及分布,以指导优生优育。方法采用聚合酶链式反应(PCR)和膜杂交术,进行α-地中海贫血和β-地中海贫血基因检测。结果 2012年9月至2013年9月共检出349例地中海贫血患者,其中α-地中海贫血患者125例,α-地中海贫血患者的基因突变类型以缺失为主,缺失类型主要为东南亚型缺失--SEA/αα(占73.60%)和右侧缺失-3.7/αα(占19.20%)。检出β-地中海贫血患者211例,基因突变热点分别为CD17(A→T)(29.38%)、CD41-42(-TCTT)(28.91%)、IVS-Ⅱ-654(C→T)(27.49%)。α-地中海贫血兼β-地中海贫血13例。结论了解重庆地区地中海贫血基因突变类型及分布可以为该地区地中海贫血的遗传咨询和临床诊疗提供有价值的信息。     

系统性红斑狼疮患者静脉血BCMA和CD138~+浆细胞的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康者静脉血B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)表达和CD138+浆细胞数量的差异。方法将40例SLE患者血液标本作为SLE组,30例健康人血液标本作为对照组,采用荧光定量实时聚合酶链反应及酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测BCMA的表达,流式细胞技术检测静脉血CD138+浆细胞数量。结果 SLE组患者静脉血中BCMA mRNA水平、蛋白含量以及CD138+浆细胞的数量明显高于对照组(P<0.05)。结论 SLE患者中浆细胞数量的增多可能与BCMA高表达相关。     

抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建

目的:构建抑制增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的慢病毒表达载体。方法:选取EGFP的19nt特异性序列,构建针对EGFP的shRNA,用XbaⅠ、XhoⅠ双酶切后定向克隆到慢病毒表达载体pLL3.7中,用包装的慢病毒液感染细胞,用荧光显微镜观察EGFP基因在不同细胞的表达情况。结果:干扰序列正确克隆至含U6启动子的慢病毒载体中,慢病毒感染Hela及J558L细胞后,可有效抑制细胞中EGFP的表达。结论:构建的慢病毒系统有效抑制了EGFP的表达,为后续的基因功能研究提供了有利工具。     

重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因多态性的研究

目的研究重庆地区人群HLA—A、B、DRB1和DQB1位点等位基因的多态性特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）技术对1664名重庆籍健康人进行HLA—A、B、DRB1、DQB1等位基因的低分辨分型,并与国内其他地区汉族人群进行比较。结果本次研究共检出HLA—A、B、DRB1、DQB1位点等住基因62种,其中A位点14种,B位点27种,DRB1位点13种,DQB1位点8种。A位点中A＊11（34．62％）、A＊02（28．81％）、A＊24（14．93％）、A＊30（5．53％）为重庆人群的优势基因。B位点中B＊46（14．92％）〉B＊40（12．96％）〉B＊13（12．39oA）〉B＊51（7．26oA）。DRB1位点中,频率最高的为DRB1＊09（15．65％）,其次为DRB1＊12（14．78％）、DRB1＊14（14．49％）、DRB1＊04（14．49％）。DQB1位点中,频率最高的为DQB1＊07（26．04％）,其次为DQB1＊05（19．94％）、DQB1＊09（15．51％）。与其他地区不同人群相比,HLA—A、B、DRB1、DQB1各位点等位基因的分布均有显著的差异。结论重庆地区人群的HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因符合南方汉族人群分布特点,具有复杂的多态性,中国各地常见的基因均有分布,白血病及其他器官移植患者在重庆不难找到合适的供者。     

重庆地区5-氟尿嘧啶代谢相关酶的基因多态性分布

目的分析5-氟尿嘧啶（5-Fu）代谢相关酶二氢嘧啶脱氢酶（DPYD）、胸苷酸合成酶（TS）和亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）的基因多态性位点在重庆地区肿瘤患者中的分布特点,为临床提供预测5-Fu疗效及不良反应的遗传学依据。方法采用PCR产物直接测序法分别检测重庆地区60例肿瘤患者DPYDIVSI4＋1位点、TS3＇-UTR位点以及MTHFRC667T和A1298C的基因型。结果（1）60例肿瘤患者中DPYDIVSI4＋1位点均为G／G基因型,未检测出可引起5-Fu相关毒性的G／C和C／C基因型;（2）TS3’-UTR＋6／＋6bp、＋6／-6bp、-／-6bp基因型分布概率分别是1．6％（1／60）、61．7％（37／60）和36．7％（22／60）;（3）MTHFR的C667T位点C／C、C／T、T／T基因型分布概率分别是33．3％（20／60）、61．7％（37／60）和5％（3／60）;A1298G位点A／A、A／C、C／C基因型分布概率分别是63．3％（38／60）、36．7％（22／60）,C／C基因型0．1％。结论重庆地区肿瘤患者DPYDIVSI4＋1位点以G／G基因型为主,提示5-Fu对该地区肿瘤患者的毒性较弱;TS3＇-UTR、MTHFR的C667T和A1298G位点基因多态性分布与国内其他地区相似,结果提示5-Fu对重庆地区患者有效性中等。肿瘤患者最好采用联合化疗制定个体化治疗方案,从而达到最佳治疗效果。     

蛋白芯片联合检测5项结核抗体在结核病诊断中的价值

目的 探讨结核分枝杆菌抗LAM、38 kD、16 kD、CFP10、ESAT-6 5项抗体的枪测对临床的应用价值. 方法 检测50例结核病、80例非结核病患者血清,应用蛋白芯片识别仪检测受试者血清中5项结核抗体,并对诊断试验结果进行分析评价.结果 130例临床标本显示,以任一抗体检测阳性诊断为结核病阳性,则诊断结核病的灵敏度为92.0%,特异度为77.5%,正确率为83.1%,Youden指数为69.5%. 结论 蛋向芯片联合检测5项结核抗体具有较高的诊断价值,与"金标准"诊断的一致性较好,且取材简易、操作方便、历时较短,可以作为临床上诊断结核病特别是肺外结核病的一项重要辅诊项目.     

SNP基因芯片方法的建立及在MTHFR多态性检测中的初步应用

目的 建立单核苷酸多态性（SNP）的基因芯片检测法,并初步应用于结直肠癌患者MTHFR基因位点C677T的多态性检测,分析其位点突变与致病性的关系.方法 采用醛基修饰玻璃基片,阵列检测亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因型,生物素标记显色.应用该芯片检测78例结直肠癌患者及40例健康对照组MTHFR基因C677T多态性,并分析MTHFR基因多态性与结直肠癌的相关性.结果 建立检测MTHFR基因SNP的基因芯片.采用基因芯片法检测病例组中MTHFR基因的C677T位点CC、CT、TT基因型分布频率分别为38.5%、53.8%、7.7%,健康对照组中C677T位点CC、CT、TT基因型分布频率分别为35.0%、62.5%、2.5%.结论 成功建立检测SNP的基因芯片法.MTHFR基因位点C677T的基因多态性与结肠癌易感性无明显关系.     

乙型肝炎病毒耐药变异与基因型检测在临床上的应用

目的 建立直接测序法检测HBV P区耐药变异情况并分析基因型.探讨HBV基因型与临床病情的关系.方法 检测46例乙肝患者血清样本,采用特异的引物对待检标本HBV P区进行PCR扩增后作基因序列检测,利用Chromas2.23软件对测序结果 进行分析有无突变产生,测序结果 用软件clustalx1.81进行基因分型分析.结果 可通过一次测序反应完成对HBV.DNA P区的基因检测及基因型分析.检出YMDD变异株8例,其中YIDD 5例,YVDD 3例.在检测的46例标本中23例为B基因型,阳性率为50.0%;有21例为C基因型,其阳性率45.6;D基因型2例,阳性率4.4%.B基因型HBV感染者中HCC 2例,占8.7%;C基因型HBV感染者中HCC 8例,占38.1%.结论 直接测序法分析HBV常见耐药突变位点及基因型准确可行,B基因型乙肝患者预后优于C基因型患者.     

HBV相关性肝癌患者CD19+CD24+CD38+调节性B细胞和IL-10的检测及临床价值

目的 检测HBV相关性肝癌患者CD19+ CD24+ CD38+调节性B细胞(Bregs细胞)的分布频率及血清白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平并分析其临床意义.方法 收集93例HBV相关性肝癌患者、47例HBV相关性肝硬化患者和57例健康体检者的外周血,采用流式细胞术检测CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率,化学发光法检测血清IL-10水平,并分析其与疾病分期、肿瘤个数、血管侵犯等临床指标的关系;同时收集20例HBV相关性肝癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织,采用流式细胞术检测组织中CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率,并分析其与肿瘤位置的相关性.结果 HBV相关性肝癌外周血CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞显著高于肝硬化组和健康对照组,且HBV相关性肝癌晚期(C+D期)患者显著高于早期(0+A期)和中期(B期)患者(P ＜0.05,P＜0.01);HBV相关性肝癌和HBV相关性肝硬化患者血清IL-10水平显著高于健康对照组(P＜0.01);HBV相关性肝癌外周血CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率和血清IL-10水平与肿瘤个数、是否血管侵犯有密切关系;HBV相关性肝癌患者外周血CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞分布频率与血清IL-10呈正相关(r =0.46,P＜0.01);HBV相关性肝癌患者癌组织和癌旁组织CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞频率显著高于远癌组织(P＜0.01).结论 CD19+ CD24+ CD38+ Bregs细胞可能通过分泌IL-10在HBV相关性肝癌免疫微环境中发挥调节作用,参与肿瘤的发生、发展.