Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335、AST-P639中国定制药敏卡性能评估

目的评估Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335和AST-P639中国定制药敏卡的性能。方法随机收集权威机构质控菌株73株和2018年1—6月华山医院住院患者首次临床分离株112株。以权威机构提供的质控菌株为检测对象,采用3种中国定制药敏卡及微量肉汤稀释法(BMM)进行平行试验,以室间质量评价结果为参考标准,评估中国定制药敏卡及BMM的可靠性。以临床分离株为检测对象,以BMM结果为参考标准,评估中国定制药敏卡对临床分离株耐药多样性检测的准确性。结果以质控菌株为检测对象,以权威机构提供的抗菌药物敏感性试验结果为标准,AST-N334、AST-N335、AST-P639的分类一致率(CA)分别为95.5%(126/132)、96.8%(179/185)、99.5%(182/183)。以临床分离株为检测对象,以BMM药物敏感性试验结果为参考标准,AST-N334标准一致率(EA)为88.4%(961/1087)、CA为94.6%(903/955)、非常重大错误(VME)占0.3%(3/955)、重大错误(ME)占1.9%(18/955)、微小错误(MIE)占3.2%(31/955);AST-N335 EA为89.9%(1388/1544)、CA为95.1%(1414/1487)、VME占0.3%(5/1487)、ME占0.8%(12/1487)、MIE占3.8%(56/1487);AST-P639 EA为95.4%(541/567)、CA为98.7%(389/394)、ME占0.5%(2/394)、MIE占0.8%(3/394)。结论Vitek 2 Compact AST-N334、AST-N335、AST-P639中国定制药敏卡准确性高,具有临床应用可信度,但也存在一定的错误率及局限性,实验室检测人员应予以关注。     

革兰阴性菌引起的血培养阳性标本的直接鉴定药敏试验

目的 为进一步缩短实验室菌血症诊断时间,评估联合法阳性血培养直接鉴定药敏试验的可行性.方法 将血培养瓶放人BACTEC 9000血培养系统进行培养筛选.选取65份含革兰阴性杆菌的阳性血培养瓶进行试验.抽取培养液,用BD真空分离管离心分离血细胞.在收集到足量菌液后,用Phoenix 100 NMIC/ID-4革兰阴性菌鉴定药敏卡做0.25 McF和0.5 McF直接鉴定药敏试验.用标准方法及哑培养后的鉴定药敏试验对直接鉴定药敏试验进行评估.结果 0.25 McF直接鉴定试验,65株中的63株(96.9%)准确鉴定.0.5 MeF直接鉴定试验,65株中的59株(90.8%)准确鉴定.0.25 McF直接药敏试验标准符合率97.8%以上.0.5 McF直接药敏试验标准符合率95.9%以上.KB法血标本直接药敏试验标准符合率96.4%以上,但微小错误率高于联合药敏法.结论 采用0.25 McF、0.5 McF两种菌液浓度法进行血培养阳性标本鉴定药敏试验是切实可行的.联合法0.25 McF菌液浓度的直接鉴定药敏试验具有明显优势,对临床具有很好的及时、有效地指引作用.

Abstract：

Objective To reduce the turnaround time for laboratory diagnosis of bacteremia, the feasibility of rapid identification and susceptibility testing using samples taken directly from positive blood culture bottles was evaluated. Methods The growth of microorganisms in blood culture bottles was screened by the BACTEC 9000 blood culture system. 65 positive blood culture bottles containing gram-negative bacteria were adopted to test. Culture fluid was injected into BD SST vacutainer and centrifuged to pellet blood cells. After collecting required McFarland units, they were cultured on Phoenix 100 NMIC/ID-4(identification-gram-negative bacteria and susceptibility testing) cards using 0.25 McF and 0.5 McF methods respectively. They were also evaluated by the standard method, involving subculture tests from positive blood culture bottles. Results 63 of 65 gram-negative bacteria (96. 9% ) were correctly identified with 0. 25 McF method. 59 of 65 gram-negative bacteria(90.8% ) were correctly identified with 0.5 McF method. For antimicrobial susceptibility testing, the 0.25 McF direct method had an agreement rate more than 94% , the 0.5 McF method was more than 85.7% and direct blood sample KB method was more than 93.8% compared to the standard method. But the overall minor error rate in susceptibility testing of direct blood sample KB method is higher than other methods. Conclusion Applying 0. 25 McF and 0. 5 McF rapid identification and susceptibility test was practical. During to possessing more prominent advantages, laboratory put the 0. 25 McF direct method into practice had a timely, remarkable significance.     

同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒bla_(KPC-2)基因

目的建立敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的耐药基因的方法。方法聚合酶链反应(PCR)分别扩增试验菌株待敲除目的基因blaKPC-2的上下游片段及质粒pMQ300的潮霉素耐药基因片段,采用重叠延伸基因扩增(SOE-PCR)技术构建融合片段,以耐阿普霉素的λred质粒pKOBEG-Apr为介导,同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因。用含潮霉素和阿普霉素的LB培养基筛选重组子,用PCR和逆转录PCR扩增检测blaKPC-2基因、潮霉素耐药基因及药物敏感性验证重组子。结果不同多位点序列分析(MLST)型别的2株临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因得以敲除。结论λred同源重组法可以可靠敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的基因。     

革兰阴性菌引起的血培养阳性标本的直接鉴定药敏试验

目的 为进一步缩短实验室菌血症诊断时间,评估联合法阳性血培养直接鉴定药敏试验的可行性.方法 将血培养瓶放人BACTEC 9000血培养系统进行培养筛选.选取65份含革兰阴性杆菌的阳性血培养瓶进行试验.抽取培养液,用BD真空分离管离心分离血细胞.在收集到足量菌液后,用Phoenix 100 NMIC/ID-4革兰阴性菌鉴定药敏卡做0.25 McF和0.5 McF直接鉴定药敏试验.用标准方法及哑培养后的鉴定药敏试验对直接鉴定药敏试验进行评估.结果 0.25 McF直接鉴定试验,65株中的63株(96.9%)准确鉴定.0.5 MeF直接鉴定试验,65株中的59株(90.8%)准确鉴定.0.25 McF直接药敏试验标准符合率97.8%以上.0.5 McF直接药敏试验标准符合率95.9%以上.KB法血标本直接药敏试验标准符合率96.4%以上,但微小错误率高于联合药敏法.结论 采用0.25 McF、0.5 McF两种菌液浓度法进行血培养阳性标本鉴定药敏试验是切实可行的.联合法0.25 McF菌液浓度的直接鉴定药敏试验具有明显优势,对临床具有很好的及时、有效地指引作用.     

分子检测快速诊断伤寒沙门菌血流感染一例CSCD

患者女,40岁,公司职员。因“高热6d”于2017年9月4日人院。患者6d前无明显诱因下出现高热,最高达40．9℃,伴畏寒寒战、头痛,不伴流涕咽痛、咳嗽咳痰、腹痛腹泻等。     

泌尿生殖道副嗜沫嗜血杆菌感染1例

我们从1例患的泌尿生殖道分泌物中分离培养出副嗜沫嗜血杆菌(Haemophilus aphrophilus)，现报告如下。     

马耳他布鲁菌病一例报道

布鲁菌病是由布鲁菌（Brucella）引起的人畜共患传染性变态反应疾病。当前该病在我国流行区域甚广,发病率呈上升趋势,疫情与奶牛、羊只等的流动情况关系较大,新发患者主要分布在牧区和半农半牧区。布鲁菌病一年四季均可发病,但有明显的季节性,羊种布鲁菌（马耳他布鲁菌）病春季开始,夏季达高峰,秋季下降;牛种布鲁菌病以夏、秋季发病率较高。最近本实验室在非发病高峰期、非疫区的上海市一位女患者的血培养中分离出1株马耳他布鲁菌。     

革兰阴性菌引起的血培养阳性标本的直接鉴定药敏试验

目的 为进一步缩短实验室菌血症诊断时间,评估联合法阳性血培养直接鉴定药敏试验的可行性.方法 将血培养瓶放人BACTEC 9000血培养系统进行培养筛选.选取65份含革兰阴性杆菌的阳性血培养瓶进行试验.抽取培养液,用BD真空分离管离心分离血细胞.在收集到足量菌液后,用Phoenix 100 NMIC/ID-4革兰阴性菌鉴定药敏卡做0.25 McF和0.5 McF直接鉴定药敏试验.用标准方法及哑培养后的鉴定药敏试验对直接鉴定药敏试验进行评估.结果 0.25 McF直接鉴定试验,65株中的63株(96.9%)准确鉴定.0.5 MeF直接鉴定试验,65株中的59株(90.8%)准确鉴定.0.25 McF直接药敏试验标准符合率97.8%以上.0.5 McF直接药敏试验标准符合率95.9%以上.KB法血标本直接药敏试验标准符合率96.4%以上,但微小错误率高于联合药敏法.结论 采用0.25 McF、0.5 McF两种菌液浓度法进行血培养阳性标本鉴定药敏试验是切实可行的.联合法0.25 McF菌液浓度的直接鉴定药敏试验具有明显优势,对临床具有很好的及时、有效地指引作用.     

携带bla_(NDM-1)碳青霉烯类耐药雷极普罗威登斯菌耐药机制研究

目的研究碳青霉烯类耐药雷极普罗威登斯菌的耐药表型、耐药机制、传播方式及同源性。方法对分离自重症监护病房(ICU)的17株雷极普罗威登斯菌进行药物敏感性试验、耐药基因筛选、NP试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、质粒可移动性及复制子分型分析。结果 17株雷极普罗威登斯菌均携带碳青霉烯类耐药基因bla_(NDM-1)。对厄他培南、美罗培南、亚胺培南、头孢唑林、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢美唑、哌拉西林、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、环丙沙星、呋喃妥因的耐药率为100.00%,对哌拉西林-他唑巴坦、氨曲南的耐药率为88.23%。PFGE同源性分析显示17株雷极普罗威登斯菌中有15株为ICU主要流行株;质粒分析显示bla_(NDM-1)存在于～160 kb接合性质粒上,复制子Inc分型为A/C型,质粒携带多种耐药基因,除对环丙沙星和呋喃妥因敏感外,介导对碳青霉烯类、头孢类、头霉素类、磺胺类和氨基糖苷类抗菌药物高水平耐药。结论携带bla_(NDM-1)的雷极普罗威登斯菌多重耐药,临床抗感染治疗难度较大。