人骨髓间充质干细胞体外支持脐血CD34+细胞增殖的研究

为了研究人骨髓间充质干细胞(MSC)作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的作用,将MSC和胎儿骨髓来源的成纤维细胞样骨髓基质细胞系(HFCL)经60Coγ线照射后分别制备细胞滋养层,比较不同滋养层细胞和添加或不加细胞因子对脐血CD34+细胞增殖数及LTC-IC数的影响.结果表明,无论有无添加细胞因子(rhFL、rhSCF、rhTPO),HFCL滋养层组培养12天扩增细胞数明显高于MSC滋养层组,以第0天细胞数为100%(下同),有细胞因子组为(9797±361)%vs(7061±418)%,无细胞因子组为(5305±354)%vs(1992±247)%,均P＜0.01.MSC滋养层组CD34+细胞扩增数与HFCL滋养层组相比无显著差异[(825±305)%vs(820±191)%,P＞0.05],但在细胞因子存在时低于HFCL滋养层组[(939±212)%vs(1617±222)%,P＜0.01].MSC滋养层组维持脐血中LTC-IC的能力明显优于HFCL滋养层组[第5周CFU-GM数(129.95±8.73)个/105接种细胞数vs(89.81±10.29)个/105接种细胞数,P＜0.05];细胞因子存在时,其作用更为明显[第5周CFU-GM数(192.93±4.95)个/105接种细胞数vs(90.47±14.28)个/105接种细胞数,P＜0.01].MSC与HFCL按一定比例混合,可提高扩增效率.当MSC与HFCL之比为41时,集落形成数量最高,达(186.89±11.11)个/105接种细胞数,明显高于比例为32(131.45±13.02)个/105接种细胞数和二者单用组[前者(138.92±14.84)个/105接种细胞数,后者(64.63±6.11)个/105接种细胞数;均P＜0.01].结论MSC维持脐血中LTC-IC集落形成的能力优于基质细胞系HFCL,HFCL支持脐血CD34+细胞的增殖能力优于MSC,MSC加上适量HFCL可显著提高CD34+细胞扩增效率.     

不同时相移植人骨髓间充质干细胞对人脐血CD34^＋细胞植入NOD／SCID小鼠的影响

为了观察不同时相移植人骨髓间充质干细胞（MSC）对脐血（UCB）CD34^＋细胞移植的NOD／SCID小鼠造血重建的影响，明确最佳的移植时机，将体外培养扩增的人骨髓MSC分别于UCBCD34^＋细胞移植同时、移植前48小时及移植后48小时输入经^60Coγ射线照射的NOD／SCID小鼠，观察共移植后42天内小鼠外周血白细胞和血小板变化，并于移植后42天处死小鼠，用FACS检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量。结果表明：（1）MSC和UCBCD34^＋细胞同时输注可明显降低外周血白细胞和血小板下降幅度，缩短白细胞和血小板恢复时间；二者不同时输注均不降低白细胞和血小板下降幅度，且输注UCBCD34^＋细胞后48小时输注MSC时外周血血小板恢复时间明显晚于同时输注者。（2）与单纯UCBCD34^＋细胞移植相比较，不同时相输注MSC均可促进UCBCD34^＋细胞的植入，三个共输注组间促进骨髓各系造血植入效应无明显差异。结论：人骨髓MSC与UCBCD34^＋细胞共移植时，以同时移植效果最佳，此结果为MSC的临床应用提供了实验依据。     

结直肠癌中 RhoGDI2的表达与肿瘤侵袭、转移及预后的关系

目的：探讨 RhoGDI2在结直肠癌中的表达与肿瘤侵袭、转移及预后的关系。方法：应用 Northern blot和 Western blot 检测具有不同侵袭、转移潜能的人结直肠癌细胞系（SW620、SW480）中 RhoGDI2 mRNA 及蛋白的表达。收集行手术切除并随访满5年的结直肠癌患者原发灶癌组织石蜡标本80例及相应的癌旁非癌组织、转移性淋巴结癌组织石蜡标本各20例。应用免疫组化法检测上述120例标本中 RhoGDI2蛋白的表达,分析其与临床病理特征及预后的关系。结果：SW620、SW480人结直肠癌细胞系中 RhoGDI2 mRNA 及蛋白的表达具有统计学差异（P <0.01）,前者表达均高于后者。结直肠癌相关组织中 RhoGDI2蛋白存在差异性表达（转移淋巴结癌组织>原发灶癌组织>癌旁非癌组织,P <0.01）。RhoGDI2蛋白在结直肠癌组织中的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、远处转移、周围淋巴管浸润、周围神经浸润、TNM 分期显著相关（P <0.05）。RhoGDI2高表达的结直肠癌患者5年生存率显著低于低表达者（P <0.01）。高 RhoGDI2表达是结直肠癌的独立预后因素之一（P <0.05）。结论：RhoGDI2在结直肠癌中的高表达与肿瘤的侵袭、转移及预后不良密切相关,可能是一个有效的结直肠癌预后标志物。     

尿毒症肺30例临床分析

尿毒症肺报道不多，本文从其临床资料、症状、体征及胸部X线表现、实验室检查、中西医结合治疗等方面，对30例进行了分析。     

人FL基因高效真核表达载体的构建及其在COS—7细胞中的表达

目的：构建人FL真核表达载体－pIRS1neo/hFL,观察其在COS－7细胞 中的表达。方法：采用RT－PCR方法自人白血病细胞系TF－1中克隆可溶型FL（Flt3-ligand)cDNA片段,测序鉴定正确后,插入真核表达载体-pIRES1 neo中的EcoR Ⅰ和BamHI位点,构建hFL真核表达载体－pIRES1neo/hFL。脂质体介质法将其转染COS－7细胞,72h以RT－PCR检测转染细胞中外源hFL基因的转录、ELISA法及脐血CD34^ 细胞增殖实验测定转染细胞上清上hFL的含量和活性。结果：酶切鉴定表明成功构建了重组真核表达载体－pIRES1neo/hFL;外源hFL基因能在转染细胞中有效转录;ELISA法测得72h后培养上清中的hFL含量为每24小时251ng/10^6 cells,并且分泌的hFL具有良好的生物学活性。结论：构建hFL真核表达载体在COS－7细胞中具有良好的表达活性。     

转FL、GM-CSF基因的人骨髓基质细胞促进脐血CD34+细胞体外扩增

研究转FL、GM-CSF基因的基质细胞对脐血CD34+细胞的扩增效应.将转FL、GM-CSF基因的入骨髓基质细胞系与脐血CD34+细胞共培养,观察细胞总数、CD34+细胞数、CFU-GM的变化情况.培养到第4周时,第(4)组(SCF+IL-3+IL-6+GM-CSF+FL)和第(8)组(HFCL/hGM-CSF+HFCL/hFL+SCF+IL-3+IL-6)的细胞总数增加到最大,分别扩增了717±24.47和709±63.63,第1周,第(5)组(HFCL+SCF+IL-3+IL-6)扩增了10.5±2.08倍,较第(8)组减少(P＜0.05).第1周时,CD34+细胞总数第(4)组和第(8)组分别扩增了8.44倍和11.5倍(P＜0.05),CD34+细胞百分率第(7)组(FCL/hFL+SCF+IL-3+II,-6)为50.2%,第(6)组(HFCL/hGM-CSF+SCF+IL-3+IL-6)为28.95%(P＜0.01).第2周,各组CFU-GM增加显著,以第(4)组和第(8)组增加最为明显,以后随扩增时间延长,造血细胞集落数、集落体积逐渐减少.表明转FL、GM-CSF基因的基质细胞,能有效的协同其他细胞因子对脐血CD34+细胞产生明显的扩增作用,能显著改变基质细胞造血功能.     

血液病从肝论治的理论探讨

血液病范围虽然广泛,但对其治疗中医学以往多从脾肾入手者为众,且已取得了可喜的进展。为了提高临床疗效,开拓治疗新思路,兹结合血液病的现代中医药治疗进展与临床体会,试探讨从肝论治的有关理论问题。1 血虚必调肝血虚的治疗古今医家无一不以健脾益肾为主。究其原因主要是：“血之源头在乎肾”(《士材三书》)。而采用补肾益精治法的方药约占35%,其它类如活血化瘀、解毒清热、育阴生津等类约占30%。可见,血虚治疗中脾肾之重要地位。但从肝与脾肾之病证的关系上分析,可以看出肝之重要地位决不可忽视。其一,“饮食入胃,全赖肝木之气…     

RhoGDI2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的：探讨RhoGDI2在结直肠癌中表达及临床意义。方法：通过免疫组化检测 RhoGDI2 在结直肠癌组织、癌旁组织及转移淋巴结中表达,分析其与CRC患者临床因素及生存期之间的关系。结果：RhoGDI2在癌旁组织、肿瘤原发灶及转移淋巴结中表达逐渐升高,差异有统计学意义（P＜0.001）; RhoGDI2表达与淋巴结转移、远处转移关系密切（P＜0.05）;高表达RhoGDI2者总生存期及无病生存期短。结论：RhoGDI2在结直肠癌组织中高表达,且与结直肠癌淋巴结转移、远处转移明显相关,高表达RhoGDI2者总生存期及无病生存期短。     

增强型绿色荧光蛋白转染活细胞效率的研究

目的 研究影响增强型绿色荧光蛋白(EGFP)逆转录病毒表达系统转染活细胞效率的主要相关参数,建立一种稳定高效的活细胞EGFP标记技术.方法 培养、扩增携带EGFP逆转录病毒载体的包装细胞PGl3,分别于12h、24h、36 h和48 h收集病毒液,转染骨髓基质细胞(BMSCs),通过流式细胞仪和荧光显微镜检测不同时间点病毒转染效率.选择转染率最高时间点的病毒液,连续转染BMSCs两次,小剂量嘌呤霉素筛选6h,观察病毒转染率及细胞活力.再以上述方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),观察这种方法标记其他干细胞或成熟分化细胞的可行性.结果 根据流式细胞仪及荧光显微镜观察结果,24h收集的病毒液转染BMSCs效率最高(64.56±2.53)％,36 h次之(56.98±3.22)％,12 h(47.39+1.82)％与48 h(37.84±1.77)％相对较低.连续转染两次并经短暂筛选后,BMSCs转染率可达80％以上,且细胞活力不受影响.采用相同方法转染脂肪基质细胞(ADSCs)和成纤维细胞(FBs),转染率均能达到80％,且细胞形态、增殖能力均未见明显改变.结论 本实验建立了一种稳定高效的活细胞EGFP转染技术,为研究组织工程种子细胞的体内、外转归及细胞间相互作用提供了稳定且直观的检测手段.