蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区神经干细胞增殖潜能的影响

目的: 观察侧脑室注射蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖能力的影响,了解蛋白酶体对NSCs增殖潜能的调控作用,从而进一步探讨蛋白酶体在帕金森病(PD)等老年性疾病神经元损伤中的可能作用机制。方法: 选90日龄健康BALB/c小鼠,左侧侧脑室注射10 μg MG132,于注射后3 d、7 d、14 d提取SVZ总蛋白,荧光酶标仪检测蛋白酶体活性。同时腹腔注射5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),BrdU免疫荧光染色标记NSCs,动态观察蛋白酶体活性改变对NSCs增殖能力的影响。另设溶剂对照组左侧侧脑室注射等剂量DMSO,进行上述实验。结果: 侧脑室注射MG132 3 d、7 d后,SVZ蛋白酶体活性较DMSO对照组显著降低(P<0.05),同时SVZ BrdU⁺ NSCs也显著减少至21±4和22±3,与DMSO对照组相比差异显著(P<0.05)。随着MG132注射时间延长,14 d后SVZ蛋白酶体活性恢复至正常水平(P＞0.05),BrdU⁺ NSCs数量MG132组(82±4)与DMSO组(67±6)相比无显著差别(P＞0.05)。结论: 应用蛋白酶体可逆性抑制剂MG132短时期内能显著抑制SVZ蛋白酶体活性,并且能够降低NSCs增殖能力,提示蛋白酶体活性与NSCs增殖潜能密切相关。     

20S蛋白酶体β5亚单位基因沉默对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

目的:应用基因沉默技术,观察下调20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖能力的影响及其潜在机制,寻求调节干细胞活力的关键靶点。方法:构建PSMB5-shRNA慢病毒载体感染早期hBMSCs,根据感染条件不同将细胞分为绿色荧光蛋白(GFP)对照组和shRNA组。倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫印迹检测PSMB5沉默效率,荧光分光光度法检测蛋白酶体活性;BrdU掺入实验观察PSMB5基因沉默对早期hBMSCs增殖潜能的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹检测细胞周期相关蛋白1(cyclin D1)及其激酶CDK4的表达变化。结果:慢病毒感染早期hBMSCs 72 h可见约95%以上细胞表达绿色荧光蛋白。shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平较GFP对照组分别降低93.31%±0.59%和56.83%±13.31%,且蛋白酶体活性较对照组降低37.47%±0.41%。此外,shRNA组BrdU阳性率26.14%±8.13%较对照组49.53%±11.18%显著降低,G1期细胞较GFP对照组增多,而S期和G2/M期细胞却较对照组减少,Cyclin D1和CDK4的表达水平分别下降54.55%±7.76%和63.26%±15.76%。结论:PSMB5基因沉默能够下调Cyclin D1和CDK4的表达,导致细胞G1/S转换停滞,影响hBMSCs增殖潜能。     

两种脓毒症模型小鼠血清白细胞介素-6与其早期生存率的关系

目的探讨盲肠结扎穿孔( CLP)、腹腔持续置管引流( CASP)脓毒症模型小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)与其早期生存率的关系。方法将60只雄性BALB/c小鼠编号,采用数字表法随机分为3组,即假手术组( Sham组)、CLP组、CASP组,各20只。 CLP组小鼠麻醉后,于中下腹正中线做纵行切口,充分暴露并结扎盲肠,用18 G注射器针头在结扎部位远端穿孔并来回贯穿2次,将少量肠内容物挤出,回纳盲肠,缝合腹壁切口。 CASP组术前准备、开腹方式同CLP模型,暴露小鼠升结肠系膜,在其对侧处插入静脉导管,退出针芯,荷包缝合并固定、剪断静脉导管,将游离端放置于腹腔内。用棉签挤压肠管,使少量肠内容物从导管口溢出,以确认导管通畅。 Sham组术前准备、开腹、术后处理同CLP组,不行盲肠结扎、穿孔。观察各组小鼠术后12、24、36、48、60、72 h的生存率。术后6 h采集各组小鼠尾静脉血,采用 ELISA 检测血清 IL-6,比较此时间点3组存活小鼠间 IL-6水平以及CLP组、CASP组的存活和死亡小鼠间IL-6水平。结果 Sham组、CLP组和CASP组术后72 h生存率分别是100.0%(20/20)、45.0%(9/20)和10.0%(2/20),3组间总体比较差异有统计学意义(字2=32.970,P<0.01),两两比较3组间差异均有统计学意义(P值均<0.05);3组小鼠生存时间曲线经Log-rank检验,差异有统计学意义(字2=34.030,P<0.05)。术后6 h,Sham组、CLP组、CASP组存活小鼠血清 IL-6水平分别是(36.62依10.30) ng/L、(2443.47依970.50) ng/L、(4057.93依827.41)ng/L,差异均有统计学意义(Hc=29.270,P<0.01);CLP组和CASP组各组内存活小鼠血清IL-6水平平均分别为(1348.80依276.25) ng/L、2100.00 ng/L,明显低于死亡小鼠的(3157.29依330.94)ng/L、(4275.48依512.71)ng/L,CLP组差异有统计学意义(t=13.071,P<0.01)。结论两种脓毒症模型小鼠的转归都有一定的病死率,较好地模拟了脓毒症的病理生理过程,CLP模型侧重于模拟局限性腹腔脓肿,CASP模型则侧重于模拟弥漫性腹膜炎。 CLP组模型术后6 h血清IL-6水平较低的小鼠,术后72 h生存率较高。     

甲氨蝶呤联合雷公藤多甙片治疗类风湿性关节炎疗效及安全性研究

目的探讨甲氨蝶呤联合雷公藤多甙片治疗类风湿性关节炎的临床效果。方法将我院2013年1月~2014年12月期间收治的77例类风湿性关节炎患者分为两组,对照组38例单独给予甲氨蝶呤治疗,观察组39例采用甲氨蝶呤联合雷公藤多甙片治疗,比较两组患者的病情改善情况、晨僵、关节肿痛数、关节压痛数、患者对疾病活动性的总体评价、医生对疾病活动性的总体评价、ESR、CRP等临床指标差异。结果治疗后观察组和对照组晨僵时间、关节肿胀数、关节压痛数及疼痛程度评分、ESR、CRP水平、患者总体评价、医生总体评价得分均低于治疗前,观察组治疗后低于对照组治疗后,有统计学差异(P<0.05)。观察组不良反应发生率与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论甲氨蝶呤联合雷公藤多甙片治疗类风湿性关节炎疗效确切,明显比单独应用甲氨蝶呤治疗有效更显著,安全性高,可在临床推广应用。     

人脐血细胞分化为神经细胞的体内实验研究

目的：人脐血富含干细胞和前体细胞，本文检索了人脐血治疗中枢神经系统疾病的体内实验研究状况、脐血细胞穿过血脑屏障的机制，并对其临床应用前景进行展望。资料来源：应用计算机检索PUBMED 1997-01／2005—10期间的相关文章，检索词为“Human umbilical cord blood cells，nerve cell”，并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库2000-01／2005—10期间的相关文章，检索词为”脐血细胞，神经细胞”，并限定文章语言种类为中文。资料选择：对资料进行初审，并查看每篇文献后的引文。纳入标准：文章所述内容应与人脐血细胞的研究相关。排除标准：重复研究或Meta分析类文章。资料提炼：共收集到230篇相关文献，52篇文献符合纳入标准，排除的178篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的52篇文献中，36篇涉及人脐血治疗中枢神经系统疾病的体内实验研究状况，11篇涉及脐血细胞穿过血脑屏障的机制，5篇涉及人脐血细胞存在的问题与展望。资料综合：脐血富含干细胞和前体细胞，静脉注射人脐血细胞可进入脑内分化为神经干细胞、神经元和星形胶质细胞，提高脑和外周血神经营养因子水平，促进神经功能恢复。脑损伤后，病变组织表达趋化蛋白和黏附分子并释放多种化学物质及一系列生物活性因子，促使脐血中的骨髓间充质细胞、单个核细胞和造血细胞穿过损伤的血脑屏障进入脑内，向病灶迁移通过促进病灶周围的血管再生从而促进神经再生。脐血静脉移植为治疗神经退行性疾病提供了广阔的前景，脐血来源的干细胞可能将成为组织工程中的种子细胞，将对神经系统的细胞治疗和基因治疗起到极大地推动作用。结论：静脉注射人脐血细胞可进入脑内并分化为神经细胞，对神经功能缺损有改善作用，为脐血移植治疗神经系统疾病提供了新思路。     

颊间隙的解剖学结构及其临床意义

目的 为了给颊间隙疾病的诊治提供解剖学基础，探讨颊间隙的解剖边界、内容物及其与颊间隙疾病的关系。方法 选用成年尸体头颈部5例，逐层解剖分离，观察颊间隙的解剖结构、内容物以及与相邻组织的关系；选用2例健康人、3例颊间隙感染和2例颊间隙肿瘤患者进行电子计算机断层扫描和磁共振成像检查，观察其解剖及疾病影像特征。结果 颊间隙有较为明确的前后、内外及下界，而无明确的上界；在间隙内有面神经、面动脉、颊神经、颊动脉、面深静脉走行，也有少许淋巴结及脂肪组织分布；颊间隙内并未发现面静脉、腮腺导管；电子计算机断层扫描和磁共振成像是颊间隙病变诊断的重要方式。结论颊间隙可以认为是一个不完全封闭的相对独立空间，依据其内容物的特点可以指导颊间隙及相关疾病提供合理的治疗手段，颊间隙的影像学与解剖对比研究对颌面部疾病的诊治也具有重要意义。     

运动试验收缩压恢复比对冠心病的诊断

目的 :探讨运动中收缩压恢复比 ( SPRR)异常对冠心病 ( CHD)诊断的价值。方法 :对1 50例患者进行活动平板运动试验并与冠状动脉造影对照。结果 :SPRR异常诊断的敏感性、特异性及准确性分别为 62 .0 %、96.0 %及 73.3% ,而 ST段压低则分别为 72 .0 %、86.0 %及 76.6%。结论 :CHD患者运动后引起 SPRR异常反应可预测冠状动脉病变。     

神经刺激仪刺激电流的不同设定对臂丛神经阻滞时间及效果的影响

目的观察神经刺激仪刺激电流的不同设定对肌间沟臂丛神经阻滞时间及效果的影响。方法 40例拟行择期骨科手术(上臂部位)的成年患者随机分为两组(每组20例),Ⅰ组神经刺激仪刺激电流由1mA～0.4mA逐步降低,Ⅱ组则固定刺激电流于0.5mA。局部麻醉药的配伍为1.2%利多卡因+0.2%布比卡因,0.5ml/kg。各组患者肌间沟阻滞的时间被记录,术中麻醉效果采用VAS评分、是否追加镇痛药或改全麻等指标进行评定。结果两组患者年龄、性别、体重等指标无显著差异,Ⅰ组和Ⅱ组臂丛神经阻滞成功的时间分别为6.5±1.2分和2.2±1.0分,两组相比具有显著差异。Ⅰ组臂丛神经阻滞成功率和并发症的发生率与Ⅱ组相比均无显著差异。结论臂丛神经阻滞中始终将刺激电流固定于0.5mA,在其操作时间显著缩短的情况下也可获得满意的麻醉效果。     

以肝脏损害为突出表现的脂质沉积性肌病一例

患者男,25岁.因"纳差、呕吐20余天"于2012年11月28日入院.患者20余天前出现纳差,厌油腻,伴恶心、呕吐,呕吐物为胃内容物.于2012年11月17日至当地医院就诊.查血常规示:白细胞计数(WBC)8.3×109/L,淋巴细胞0.57,血红蛋白浓度(Hb)、血小板计数(PLT)正常;血液生化示:丙氨酸转氨酶(ALT)426 U/L,天冬氨酸转氨酶(AST)286 U/L,尿酸568.6 μmol/L.予甘草酸二铵、天冬氨酸钾镁保肝治疗1周,效果不佳.患者于2012年11月22日至我院门诊查红细胞沉降率为39 mm/1 h,C反应蛋白103.3 mg/L,HLA-B27、抗核抗体、抗角蛋白抗体、抗环瓜氨酸肽抗体均阴性;ALT407.8 U/L,AST 194.6 U/L,乳酸脱氢酶(LDH)338 U/L;乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)阳性;甲型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎病毒抗体均阴性.