猪链球菌选择性培养基优化

目的对原有的猪链球菌选择性培养基进行优化改良,用于猪源样本中猪链球菌的分离。方法比较猪链球菌在其他高营养培养基上的生长适宜性;进一步通过药物敏感实验筛选对猪链球菌2型不敏感的抗菌药物,继而用琼脂平板稀释法测定候选抗菌药物的最小抑菌浓度,组方后用现场标本考核抑菌效果,用模拟样本和猪源标本考核分离效果。结果使用特殊蛋白胨替代原培养基中的酵母粉,可改善猪链球菌生长状态,使菌落更易于挑取。筛选出含有氨曲南50 mg/L,多粘菌素B 10 mg/L,链霉素40 000 U/L,结晶紫0.5 mg/L,呋喃妥因6 mg/L的改良选择性培养基,该培养基对猪源标本中常见的非目标菌抑制作用更强。在实验室模拟样本中,使用直接涂布法,检测猪链球菌灵敏度为1×103CFU/ml;在猪源样本中,经选择性脑心肉汤增菌后,改良选择性培养基可使猪链球菌检出率达到17.1%。结论改良选择性培养基对猪链球菌具有更强的选择作用,使用该培养基可以提高检测灵敏度,更适合动物源性标本中猪链球菌的分离培养。     

江西省表观健康猪群携带猪链球菌状况分析

目的：了解江西省表观健康猪群携带猪链球菌的情况,为有效防控猪链球菌病提供科学依据。方法选取景德镇市、崇仁县为采样点,采集表观健康猪群鼻咽拭子和扁桃体进行猪链球菌病原分离鉴定。结果共采集表观健康猪群鼻咽拭子和扁桃体样本301份,检出2株猪链球菌2型,其毒力基因mrp、sly、ef均为阴性。结论本次调查中江西省表观健康猪携带猪链球菌的带菌率为0.66％。     

小肠结肠炎耶尔森菌耐热性肠毒素B基因(ystB)初步研究

目的研究小肠结肠炎耶尔森菌的耐热性肠毒素B基因(ystB)的分布特征。方法通过聚合酶链反应(PCR)、DNA探针杂交方法与序列分析检测致病性和非致病性小肠结肠炎耶尔森菌携带ystB基因的情况。结果98株非致病性小肠结肠炎耶尔森菌中52株携带ystB基因,占53.06%。全部48株致病性小肠结肠炎耶尔森菌均不携带该基因。结论ystB基因仅存在于部分生物1A型非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,而不存在于致病性菌株中。     

血清2型猪链球菌全菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究

目的寻找血清2型猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)全菌体蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗侯选抗原的筛选提供线索。方法采用免疫蛋白质组学技术,分析和研究血清2型S.suisSC84菌株全菌体蛋白中能与猪链球菌病人恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定。结果S.suisSC84全菌体蛋白与3份猪链球菌病人恢复期血清进行免疫杂交反应,发现8个与IgG抗体发生阳性反应的蛋白点。经MALDI-TOF-MS鉴定,这8个蛋白分别为溶菌酶释放蛋白(MRP)、琥珀酸脱氢酶/延胡索酸还原酶黄素蛋白亚单位(SDHFp/FRDFp)、触发因子(TF)、延长因子G(EF-G)、细菌糖磷酸转移酶系统甘露糖特异ⅡAB亚单位(PTS/MAN-IIAB)、丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶(6-PFK)、色氨酸-tRNA合成酶(TrpRS)。MRP定位于胞壁;TF、PTS/MAN-IIAB、PK及TrpRS定位于胞质;SDHFp/FRDFp、EF-G及6-PFK定位于胞外。并且确定了它们在S.suis05ZYH33菌株基因组的编码基因。结论在S.suisSC84全菌体蛋白中发现8个抗原活性蛋白,其中SDHFp/FRDFp、TF、EF-G、PTS、PK、6-PFK及TrpRS是在S.suis新发现的抗原性蛋白,它们作为特异诊断抗原和疫苗侯选抗原的前景有待进一步研究。     

超抗原的研究进展

超抗原（superantigen）是迄今为止发现的能力最强的T细胞丝裂原。浓度不超过0．1pg／mL的细菌超抗原就能够引发机体发热．休克甚至死亡。超抗原以完整形态结合到抗原提呈细胞（APC）表面表达的MHCⅡ类分子的抗原结合沟槽的外侧。     

四川资阳地区健康猪2型猪链球菌分离与分子生物学特征分析

目的了解四川资阳地区健康猪携带猪链球菌状况及其主要毒力基因分布和药物敏感性,分析这些菌株与病人分离株的同源性,为疫情预测和制定防治措施提供依据。方法从屠宰场采集健康猪的咽拭子和扁桃体标本分离培养获得分离株,用API20 Strep进行生化鉴定、猪链球菌诊断血清进行血清分型;聚合酶链反应（PCR）检测猪链球菌种特异性基因（16SrDNA）和相关毒力基因;K—B纸片法进行药物敏感性分析;并用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性。结果从健康猪分离到了12株猪链球菌,均为血清2型;菌株均具有cps2J、mrp、sty、ef和gapdh毒力基因;所有菌株抗药性一致;PFGE分析结果显示均为SinaI001型,与同期病人分离株带型一致。结论四川资阳地区健康楮携带的2型猪链球菌是高致病性菌株,与同期病人分离株具育一致的生物学特征,是引起猪或入发病的重要传染源;猪带菌率存在季节差异。     

猪链球菌wzy基因与血清型别的相关性分析

目的 分析wzy基因序列与血清分型相关性,评价基于wzy基因的基因组水平血清分型的可行性。 方法 建立了33个已知血清型（1 ~ 31,33与1/2型）及21种新型cps型别（NCL1 ~ 20与Chz型）的wzy基因的氨基酸序列数据库,用来检索公开发表的767个有传统血清分型结果的基因组序列,以确定它们的分子血清型别,并与其用传统血清分型结果进行比对。 结果 767个基因组中,有765个基因组含有1种且仅含有1种数据库中的wzy基因,剩余的2个基因组携带数据库中没有的wzy基因,本研究中将其cps型别命名为NCL21。 94.13%（722/767）基因组的分子血清型别与其传统血清分型结果一致。 在二者结果有差异的基因组中,其cps基因簇的核苷酸序列与其传统血清分型结果相应的血清型标准菌株cps序列有明显的差异。 结论 基因组水平检测血清型特异性的wzy基因的分型策略,显著优于传统的血清分型方法。      

副猪链球菌临床分离株引起小鼠大脑炎性反应的特征及机制研究

目的 研究副猪链球菌临床分离株引起小鼠大脑炎性反应的特征及其机制。方法 副猪链球菌临床分离株NN1和BS26及高致病型猪链球菌P1/7感染C57BL/6小鼠后,观察其脑组织中的细菌载量,并提取脑组织RNA,使用实时荧光定量聚合酶链式反应方法明确诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、促炎性细胞因子IL-1β以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体（NOD1/2）表达的时间动力学特征。副猪链球菌临床分离株NN1和BS26及猪链球菌P1/7分别与小鼠原代星型胶质细胞及小胶质细胞细胞系BV2细胞相互作用后,分别测定细胞上清液中一氧化氮（NO）浓度以及IL-1β和NOD1/2 mRNA转录水平的时间动力学特征。结果 副猪链球菌临床分离株感染小鼠后可在小鼠脑组织中持续存在超过48 h,并在感染早期引起小鼠脑组织中iNOS、IL-1β及NOD1/2受体转录水平的显著升高（P<0.05）。小胶质细胞可能在副猪链球菌临床分离株诱导脑组织产生NO和IL-1β中发挥重要作用。副猪链球菌通过NOD1/2受体激活星形胶质细胞的能力显著强于小胶质细胞（P<0.05）。结论 副猪链球菌临床分离株NN1和BS26在感染...     

大肠埃希菌O157:H7志贺毒素Ⅱ变种的分布

目的 了解徐州地区E.coli O157：H7分离菌析Stx2毒素变种Stx2vha在人及畜禽中的携带分布情况。方法 用特异性探针Southern杂交检测菌株中是否携带Stx2vha毒素变种。结果 66株分离株中35株为Stx2vha毒素变种阳性，占53%，13株为Stx2原互不素阳性，占19.7%，17株为Stx2毒素阴性，占25.8%，另有1株不同于其它菌株是否可为新的毒素变种需进一步确证。35株Stx2vha毒力基因菌株是徐州地区O157：H7菌株的优势菌型，主要宿生动物为羊。