人皮肤真皮组织中角朊干细胞样细胞的分离与培养

背景：皮肤真皮组织是皮肤损伤修复时除表皮基底层以外可形成表皮层结构的重要干细胞来源。目的：探索从人皮肤真皮组织中分离培养角朊干细胞样细胞的新方法。方法：将一定大小的成人腹部全层皮肤组织用Dispase过夜消化后去除表皮层结构,然后用0．1％I型胶原酶过夜消化,离心分离以获取真皮来源总细胞。将分离的细胞用含有体积分数1％N2,2％B27,20μg／L表皮生长因子和40pg／L碱性成纤维细胞生长因子的DMEM／F12（1：1）无血清培养液悬浮后以低密度接种于培养皿进行培养。采用RT-PCR和免疫细胞荧光染色法对其进行分析。结果与结论：RT-PCR分析结果显示所分离的真皮细胞中含有表达Lgr5和Lirgl等特异基因的毛囊来源干细胞;免疫细胞荧光分析结果显示其表达细胞角蛋白8和细胞角蛋白14。在无血清条件下培养6d时,可观察到表达细胞角蛋白14和整合素α6的“铺路石”样细胞克隆。进行传代培养后P1细胞表达角朊干细胞标志物CD29、细胞角蛋白14和P63。传代培养至P3,4时大部分细胞分化,不能继续传代。结果证实,以无血清培养液结合低密度培养法可直接从人真皮组织中有效地培养增殖活跃、细胞角蛋白14和P63阳性的角朊干细胞样细胞。     

糖尿病肾组织PPARγ和PTEN的表达及对EMT和纤维化的影响

研究糖尿病小鼠肾组织及高糖培养的肾小管上皮细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)的表达情况及对上皮细胞间质转化(EMT)和纤维化情况。取糖尿病小鼠肾组织和高糖培养的肾小管上皮细胞,采用Western Blot检测蛋白表达；聚合酶链式反应(PCR)检测mRNA表达,分析PTEN与PPARγ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)、上皮钙粘蛋白(E-cadherin)的表达表达量的相关性。结果发现,糖尿病小鼠肾组织和高糖培养肾小管上皮细胞PPARγ、PTEN蛋白及mRNA表达均明显降低,E-cadherin蛋白表达下调,α-SMA、Collagen-Ⅲ蛋白表达上调,肾小管上皮细胞的EMT蛋白表达显著降低,肾组织纤维化现象明显加重。结果提示高糖条件下PPARγ、PTEN表达降低可能与EMT和纤维化过程有关。     

25(OH)D3缺乏与腹膜透析相关性腹膜炎发生风险的相关性研究

目的探讨血25-羟胆钙化醇D3[25（OH） D3]缺乏与腹膜透析相关性腹膜炎（PDRP）发生风险的关系。方法选取2017年1月至2019年6月在我院行腹膜透析患者180例,比较分析发生与未发生PDRP患者的临床资料。结果 180例患者中,56例发生PDRP（PDRP组）,发生率31.11%,124例患者未发生PDRP（对照组）。PDRP组年龄、透析时间和初始透析年龄分别为（65.39±8.39）岁、（55.40±8.28）月和（60.02±9.11）岁,明显高于对照组（P<0.05）; PDRP组尿素氮（30.02±10.11） mmol/L,铁蛋白（210.20±89.28）μg/L和CRP（66.60±34.40） mg/L高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,而25（OH） D3（13.38±3.29） ng/L,白蛋白（25.43±8.29） g/L、血红蛋白（85.72±10.11） g/L低于对照组,差异有统计学意义(（P<0.05）。Logistic回归分别结果显示:年龄、透析时间、25（OH） D3是PDRP发生的影响因素（P<0.05）。结论 25（OH） D3缺乏是腹膜透析患者发生PDRP的影响因素,值得临床注意。     

血清SFRP-4水平与2型糖尿病肾病患者胰岛素抵抗、肾功能及肾纤维化指标的相关性

目的分析血清分泌型卷曲相关蛋白-4(SFRP-4)水平与2型糖尿病肾病患者胰岛素抵抗、肾功能及肾纤维化指标的关系。方法选择2017年1月—2019年12月广东省江门市中心医院/中山大学附属江门医院肾内科收治2型糖尿病肾病患者84例作为糖尿病肾病组(DN组),单纯2型糖尿病患者86例作为单纯糖尿病组(DM组),同期体检的健康者80例作为健康对照组。比较各组血清SFRP-4、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)指标、肾功能指标、肾纤维化指标,并分析SFRP-4水平与上述指标的相关性。结果DN组SFRP-4、FINS、HOMA-IR、SCr、BUN、UA、尿β2-MG、TGF-β1、TIMP-1、CⅣ、CTGF水平高于DM组和健康对照组(F/P=92.392/0.000、11.297/0.008、12.346/0.000、29.354/0.000、8.965/0.007、42.286/0.000、8.762/0.021、42.348/0.000、78.392/0.000、32.293/0.000、7.281/0.043),Alb水平低于DM组和健康对照组(F/P=28.254/0.000),DM组SFRP-4、FPG、FINS、HbA1c、HOMA-IR、SCr、BUN、UA、尿β2-MG水平高于健康对照组,Alb水平低于健康对照组(P均<0.05)。DM组与健康对照组TGF-β1、TIMP-1、CⅣ、CTGF水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关分析显示,糖尿病肾病患者血清SFRP-4水平与FPG、FINS、HbA1c、HOMA-IR、SCr、BUN、UA、尿β2-MG、TGF-β1、TIMP-1、CⅣ、CTGF呈正相关(r/P=0.367/0.022、0.387/0.012、0.322/0.032、0.473/0.004、0.437/0.013、0.524/0.000、0.405/0.008、0.412/0.018、0.378/0.019、0.383/0.009、0.402/0.012、0.398/0.016),与Alb呈负相关(r/P=-0.377/0.009)。结论2型糖尿病肾病患者血清SFRP-4水平升高,其与胰岛素抵抗、肾功能及肾纤维化均有一定相关性,可能参与了糖尿病肾病的发生发展,具有辅助评估糖尿病肾病病情的潜力。