PKA含量动力学检测方法的研究与建立

目的建立激肽释放酶原激活剂(prekallikrein activator, PKA)含量的动力学检测方法,并对该方法进行验证。方法对比不同样品稀释缓冲液的pH、离子强度,各步骤的孵育时间、孵育温度等因素,确定检测方法的最适条件。并对该方法的准确度、专属性、精密度、线性、稳定性和耐用性进行方法学验证。结果确定以0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.5、含0.15 mol/L NaCl)稀释样品,在37℃下与激肽释放酶原(PK)试剂混合孵育20 min后加入底物S-2302,检测反应前10 min内吸光度变化率△A405/min。方法验证结果表明PKA含量在(0.5~4.0)IU/mL范围内,△A405/min与含量呈良好的线性关系,标准曲线相关系数R2>0.99,校正标样回收率在96.9%~103.7%。专属性验证表明人血白蛋白和静注人免疫球蛋白(pH4)的辅料、低pH及蛋白质含量等因素对该方法检测PKA含量均无明显影响,各溶液的加标回收率分别为98.0%(0.9%NaCl溶液)、95.3%(0.46%辛酸钠溶液)、96.7%(10%麦芽糖溶液,pH4.0)、94.0%(20%BSA)、94.0%(5%BSA,pH4.0)。在(0.5~4.0)IU/mL内,该方法准确度和精密度均符合要求。其中质控品批内回收率在96.4%~109.5%, CV在0.2%~6.9%,批间回收率在101.5%~102.9%, CV在2.6%~5.9%。PK试剂和S-2302在室温放置6 h内,线性、准确度和精密度均能符合要求,质控品回收率在94.9%~109.9%。采用新建的动力学法和《中国药典》(ChP)2015年版终点法检测本公司生产的20批次人血白蛋白样品中PKA含量的结果对比表明2种分析方法差异无统计学意义(P>0.05),2种方法的相关系数为0.99805(n=20)。结论建立的PKA含量动力学检测方法,具有良好的线性、专属性、准确度、精密度、稳定性、耐用性,相比《中国药典》方法,新建方法更节省分析时间,更为方便、准确、快速,可实现快速测定人血白蛋白和静注人免疫球蛋白(pH4)PKA含量测定。