基因干扰机制及其在细胞信号转导中的应用

基因干扰是一种新兴的基因阻断技术,是外源和内源性双链RNA在细胞内使特异性序列的基因表达受抑。基因干扰技术能高效特异的阻断基因的表达,可以确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,是研究信号转导通路的有力工具。基因干扰技术可有效抑制目的基因表达mRNA以及蛋白质产物,其可以简便、特异、高效、稳定地下调目的基因的表达,亦可在不影响其他物质的情况下,剔除目的基因。基因干扰技术比以前用于基因功能研究和应用的各种方法更优秀,但基因干扰技术对于哺乳动物细胞株的转染效率低;哺乳动物细胞中对双链RNA或小干扰RNA的导入会产生拮抗作用等方面亦有待改进。将有效且具高度安全性的小干扰RNA用于医疗,前景令人期待。     

CTGF shRNA表达质粒的构建及对大鼠肌源性干细胞CTGF表达的影响

目的 观察针对结缔组织生长因子(CTGF)所构建的短发卡RNA(shRNA)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肌源性干细胞(MDSCs)表达CTGF的影响.方法 针对CTGF mRNA上的序列,体外合成表达shRNA的DNA质粒载体pGenesil-3-shRNA并行测序鉴定;从新生SD大鼠骨骼肌中分离培养MDSCs并鉴定.实验分成对照组(MDSCs+TGF-β1培养),实验组(MDSCs+ TGF-β1+pGenesil-3-shRNA培养).观察shRNA质粒转染结果.利用Real-Time PCR及Western Blot检测CTGF mRNA和CTGF蛋白表达.结果 正确构建了靶向CTG,F基因的质粒载体pCenesil-3-shCTGF;大鼠MDSCs 48 h、72h和96h时实验组的CTGF mRNA及蛋白质水平均低于对照组(P＜0.05).结论 针对CTGF构建的pGenesil-3-shCTGF能够转染MDSCs,并在48h、72h和96h时能明显降低TGF-β1刺激MDSCs所产生CTGF的表达.     

Erk和p38信号转导通路对大鼠肌源性干细胞内结缔组织生长因子表达的调控作用

目的 探讨肌源性干细胞(muscle derived stem cells,MDSC)受转化生长因子β1(transforming growth factor-1,TCF-β1)刺激产生结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的过程中,Erk信号转导通路和p38信号转导通路是否发挥作用.方法 采用细胞差速贴壁法,从新生大鼠骨骼肌中分离提取肌源性干细胞,进行细胞表型鉴定后传代培养.实验设空白组、对照组和实验组共8组:空白组,添加液为基础培养基;对照组,基础培养基中加TGF-β1;PD98059实验组,分别用20、40、80μM的PD98059预处理;SB203580实验组,分别用0.2、0.5、1.0μM的SB203580预处理.用Real Time-PCR和Western Blot分别检测细胞中CTGF mRNA和蛋白质的水平.方果 空白组、对照组和PD98059实验组间CTGF mRNA和蛋白质的相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05),对照组和SB203580实验组间差异均无统计学意义(P>0.05).方论 TGF-β1诱导NDSC产生CTCF的过程中,存在着Erk信号转导途径,不存在p38信号转导途径.     

右美托咪定与瑞芬太尼用于ICU机械通气患者镇痛镇静效果比较

目的比较右美托咪定和瑞芬太尼用于ICU机械通气患者镇痛、镇静的效果。方法选择500例有创机械通气超过24h的患者,采用随机数字表法分为右美托咪定组及瑞芬太尼组,每组250例。两组分别给予右美托咪定[1滋g/kg维持10min的负荷剂量,然后予0.4~1滋g/（kg·h）]和瑞芬太尼0.05滋g/（kg·h）持续静脉泵入镇痛、镇静,采用数字评分法（NRS）评估疼痛,Richmond躁动－镇静评分法（RASS）评估镇静,ICU谵妄评分量表（CAM-ICU）评估谵妄情况。两组患者在治疗期间执行每日唤醒策略,分别记录两组用药前及用药1、6、12、24、36、48h的NRS、RASS和生命体征,加用丙泊酚及每日中断药物以唤醒的病例数,谵妄发生率、机械通气时间、住ICU时间,以及不良反应发生情况。结果两组均可达到满意的镇痛、镇静目标。两组间镇痛、镇静深度总体无明显差异,但用药1h时右美托咪定组NRS明显高于瑞芬太尼组（P＜0.05）;右美托咪定组合并用药患者数多于瑞芬太尼组（P＜0.05）,机械通气时间、住ICU时间均较瑞芬太尼组明显缩短（均P＜0.05）,并且谵妄发生率明显降低（P＜0.05）;右美托咪定组出现心动过缓、低血压患者较瑞芬太尼组多（均P＜0.05）。结论右美托咪定用于ICU机械通气患者与瑞芬太尼组治疗效果相当,但能缩短机械通气时间、住ICU时间,减少谵妄发生率,但有更多的心动过缓和低血压。     

改善颅脑损伤术后盐酸右美托咪定镇静致心率缓慢的临床安全性研究

目的 研究改善颅脑损伤术后盐酸右美托咪定镇静致心率缓慢不良反应的方法。方法 将盐酸右美托咪定镇静导致心率缓慢的120例患者随机分为硫酸阿托品注射液组、盐酸异丙肾上腺素组和盐酸多巴胺注射液组，各40例，观察3组药物干预后心率、目标血压、心律失常、胃钠潴留、肺部感染、目标热卡、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、S100B、脑氧代谢（脑氧摄取率、脑动脉-静脉血氧含量差）及对术后3个月致残率和死亡率的影响。结果 3组药物干预后，患者心率>60次/分的达标率均高。血压方面：盐酸异丙肾上腺素组的达标率较高（最低达97.5%）；硫酸阿托品注射液达标率稍低（P<0.05）；盐酸多巴胺注射液组的达标率较另2组更低（P<0.05），且心律失常的发生率明显增高（P<0.05）。与另2组相比较，硫酸阿托品注射液组发生胃钠潴留的概率明显增加（P<0.05），发生感染的概率亦明显增加，168 h目标热卡的达标率明显降低；而盐酸多巴胺注射液组与盐酸异丙肾上腺组在发生胃钠潴留、肺部感染、目标热卡达标方面无差异。3组药物干预后脑氧代谢、神经功能因子、3月后死亡率及致残率未见明显差异。结论 盐酸异丙肾上腺素、硫酸阿托品注射液、盐酸多巴胺注射液具有改善盐酸右美托咪定镇静所导致心率缓慢的作用，其中盐酸异丙肾上腺素改善心率减慢的不良反应小，可供临床推荐应用。     

急性一氧化碳中毒患者血清心肌型脂肪酸结合蛋白水平变化及临床意义

目的 分析急性一氧化碳中毒患者血清心肌型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP)水平变化及临床意义。方法 选择2014年1月－2017年12月杭州市萧山区第一人民医院收治的急性一氧化碳中毒患者108例作为中毒组,根据病情的严重度将其分为重度24例、中度48例与轻度36例。选择同期于该院进行体检的86例健康人作为健康对照组。观察对比中毒组与健康对照组血清H-FABP的水平、不同病情严重度急性一氧化碳中毒患者肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌钙蛋白(cTn-I)水平,并应用Pearson相关性分析一氧化碳中毒组患者临床相关指标与H-FABP水平的相关性。结果 中毒组的H-FABP、CK-MB、cTn-I水平分别为(30.78±15.20)μg/L、(8.00±1.92)IU/L、(0.56±0.11)μg/L,均高于健康对照组(t=16.512、26.032、42.419,均P<0.01)。不同程度的急性一氧化碳中毒患者血清CK-MB、cTn-I与H-FABP水平对比中,重度>中度>轻度,即随着病情加重而递增,组间对比差异均有统计学意义(F=647.665、552.633、54.747,均P<0.01)。中毒组H-FABP水平与碳氧血红蛋白、CK-MB、cTn-I呈正相关(r=0.428、0.518、0.481),与GCS评分呈负相关(r=-0.613)。结论 急性一氧化碳中毒患者血清H-FABP水平高表达,与疾病的严重度、预后有关,可作为急性一氧化碳中毒的有效评估指标。     

骨形成蛋白2活性多肽/Ⅰ型胶原复合煅烧骨修复兔桡骨缺损

目的 观察自行研制合成的骨形成蛋白2(BMP2)活性多肽与Ⅰ型胶原复合煅烧骨复合材料修复骨缺损的作用.方法 实验分3组.A组:单纯煅烧骨组;B组:含Ⅰ型胶原的煅烧骨组;C组:BMP2活性多肽与Ⅰ型胶原复合煅烧骨组.3组材料植入前分别电镜扫描观察.取大白兔36只,随机分成3组,建立桡骨中段10 mm骨缺损模型,分别将材料植入兔桡骨缺损处,术后4、8、12周行X线评分,8、12周行组织形态学观察与评分,比较各组植入材料的成骨作用以及取材后抗折强度.结果 36只大白兔均进入结果分析,(1)复合材料电镜扫描结果:孔隙率高,复合结构紧密;(2)术后不同时间X线评分示C组与A组和B组差异有统计学意义(P＜0.05);(3)组织学观察,8周时评分为:A组4.67±0.52、B组5.33±0.52、C组6.83±0.41.12周评分为:A组评分为6.17±0.41、B组为7.33±0.52、C组为8.67±0.52;(4)各组植入材料抗折强度的测定:术后12周,C组材料抗折强度明显高于A组和B组.结论 单纯煅烧骨及复合材料组均有修复骨缺损的能力,但以复合BMP2活性多肽的含I型胶原的煅烧骨较为理想.     

基因干扰机制及其在细胞信号转导中的应用

基因干扰是一种新兴的基因阻断技术,是外源和内源性双链RNA在细胞内使特异性序列的基因表达受抑.基因干扰技术能高效特异的阻断基因的表达,可以确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,是研究信号转导通路的有力工具.基因干扰技术可有效抑制目的基因表达mRNA以及蛋白质产物,其可以简便、特异、高效、稳定地下调目的基因的表达,亦可在不影响其他物质的情况下,剔除目的基因.基凼下扰技术比以前用于基因功能研究和应用的各种方法更优秀,但基因十扰技术对于哺乳动物细胞株的转染效率低;哺乳动物细胞中对双链RNA或小干扰RNA的导入会产生拮抗作用等方面亦有待改进.将有效且具高度安伞性的小干扰RNA用于医疗,前景令人期待.