神经生长因子在小鼠病毒性心肌炎心肌中表达的意义

目的探讨病毒性心肌炎(VMC)发病过程中,心肌组织神经生长因子(NGF)表达的动态变化及发病机制中作用。方法70只4周龄雄性BALB/C小鼠腹腔接种0.1ml的CVB3建立VMC模型,10只同周龄同品系小鼠腹腔接种Eagle’s液作为对照组。VMC组于接种后3、7、15、30d,对照组于30d处死,采用RT-PCR、免疫组化检测心肌NGF mRNA及蛋白表达,并对NGF表达水平与心肌病变积分进行相关性分析。结果VMC组3~30d各时点心肌NGF mRNA及蛋白表达水平均明显增高,以7d时为最高,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.05或0.01),而且NGF蛋白表达水平与心肌病变积分呈显著正相关(r=0.90,P<0.05)。结论NGF过度表达可能在病毒性心肌炎的发病机制中起重要作用。     

芪苈强心提取物对缺氧大鼠心肌微血管内皮细胞VEGF及HIF-1α表达作用的研究

目的观察芪苈强心提取物对缺氧诱导的大鼠心肌微血管内皮细胞VEGF及其上游调控因子HIF-1α表达的影响,探讨芪苈强心胶囊抗心力衰竭作用的相关机制。方法植块法培养2周龄SD大鼠心肌微血管内皮细胞并鉴定,传代后将第二代细胞随机分为三组：空白对照组,缺氧干预组,缺氧干预＋芪苈强心组。干预6h后收集细胞上清,提取细胞核蛋白及胞浆蛋白,利用ELISA,WesternBlot分别检测细胞上清液中VEGF含量及细胞内VEGF上游调控因子HIF-1α的表达。结果与对照组比较,缺氧干预组心肌微血管内皮细胞VEGF、HIF-1α表达增加,与缺氧干预组比较,芪苈强心干预组VEGF含量均进一步升高,HIF-1α也表现出相同趋势。结论芪苈强心提取物能够通过促进缺氧状态下心肌微血管内皮细胞HIF-1α诱导的VEGF表达,这可能是芪苈强心发挥抗心力衰竭作用的机制之一。     

乙醛脱氢酶2抑制剂daidzin对大鼠心肌细胞缺氧损伤作用的机制

目的检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)被daidzin抑制时对大鼠心肌细胞在缺氧状态下发生凋亡和信号转导的影响,验证乙醛脱氢酶2 (ALDH2)在此过程中所起的作用．方法在确定daidzin的最佳抑制浓度后,运用心肌细胞缺氧模型,比较大鼠心肌细胞在单独缺氧和经ALDH2特异性抑制剂daidzin预处理24 h后缺氧的凋亡和MAPK信号通路的改变。酶活性检测采用乙醛代谢法、ROS的检测用C400测定,凋亡的测定通过用Hoechest 33324、免疫荧光标记的流式细胞仪和TUNEL试剂盒检测,MAPK信号通路酶(ERK1／2、JNK、P38)磷酸化的改变用Western印迹法检测。结果60μmol/Ldaidzin浓度是ALDH2酶活性被抑制而细胞无凋亡发生的最佳工作浓度。在daidzin (60μmol／L)预处理24 h后再经缺氧诱导,比单独缺氧引起的心肌细胞凋亡更为明显:表现为在Hoechest 33324染色中,细胞核溶解和核碎裂(P<0．05),在FACS和TUNEL的检测中,凋亡细胞明显增加(P<0．05),经凋亡后的死亡细胞有增加趋势但差异无统计学意义,同时与MAPK信号通路有关的磷酸化ERK1／2、JNX和P38的酶活性均表达增强。结论daidzin使ALDH2酶活性降低可增加心肌细胞对缺氧导致凋亡的易感性,其机制是与细胞ROS和凋亡的增加及MAPK信号通路的激活有关。ALDH2对缺氧引起的细胞凋亡损伤具有保护作用。     

高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌中钙敏感受体表达和血浆中H2S含量的检测及其意义

目的：检测钙敏感受体（CaSR）在高肺血流性肺动脉高压（PH）大鼠肺动脉平滑肌中的表达水平及血浆中H₂S含量,阐明两者在PH形成机制中的作用。方法：18只雄性SD大鼠随机分为对照组和PH组,对照组大鼠行单纯开胸,PH组大鼠行左肺切除手术。饲养35 d后,应用右心导管法分别测定各组大鼠肺动脉平均压（PAMP）,检测右心室/ 体质量(RV/ BW) 和右心室/左心室+室间隔［RV/（LV+S)］ 比值,光学显微镜观察肺血管结构的变化,分光光度法检测血浆H₂S含量,应用实时荧光定量PCR方法检测大鼠肺动脉平滑肌细胞CaSR mRNA的表达水平。结果：PH组大鼠PAMP、RV/ BW及RV/ (LV + S) 比值均明显高于对照组（P<0.05）,光镜下肺小血管肌化程度明显增强,肺中、小肌型动脉相对中膜厚度明显增加（P<0.05）。PH组大鼠肺动脉平滑肌细胞CaSR mRNA的表达水平较对照组明显增高（P<0.05）;PH组大鼠血浆中H₂S含量较对照组明显降低（P<0.05）。大鼠肺动平滑肌细胞CaSR mRNA的表达水平与血浆H2S含量呈负相关(r=－0.931,P<0.05)。结论：高肺血流时肺动脉平滑肌细胞CaSR mRNA表达的改变可能通过改变内源性H2S的产生参与PH的形成。     

E-钙黏蛋白和上皮细胞黏附分子在结节型肝细胞性肝癌大体形态亚型中的表达及相关性研究

目的分析结节型肝细胞性肝癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）各形态亚型的生存情况,初步探讨E一钙黏蛋白（E—cadherin）和上皮细胞黏附分子（EpCAM）在结节型HCC各亚型中的表达及其相关性。方法选取2008年至2011年在我院手术切除、直径小于5am且经病理证实为结节型HCC的肿瘤组织,根据其大体形态划分为3个亚组：单个结节组（sN组）61例;单个结节伴有结外生长组（SNEG组）21例;多结节融合型组（CM组）18例。应用免疫组织化学sP法检测E—cadherin蛋白和EpCAM蛋白在结节型HCC各亚型中的表达情况,并初步探讨两者的相关性。采用Kaplan—Meier生存统计分析结节型HCC3种亚型的生存情况。结果结节型HCC中SN组的平均生存时间为（33．5±0．9）月,明显高于SNEG组（24．3＋2．6）月和CM组（29．3±2．6）月,SN组与SNEG组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。E—cadherin在SN组、SNEG组、CM组中的阳性表达率分别为40．98％（25／61）、9．52％（2／21）、27．78％（5／18）（P〈0．05）,其中SN组与SNEG组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。EpCAM在SN组、SNEG组、CM组中的阳性表达率分别为22．95％（14／61）、52．38％（11／21）、27．78％（5／18）（R0．05）,其中SN组与SNEG组比较,差异有统计学意义（P〈．0．05）。相关『生分析结果显示E．cadhefin与EpCAM两者的阳性表达呈负相关（r=-0．580,P〈0．01o结论结节型HCC中的SNEG有潜在的复发风险;E—cadhefin低表达与EpCAM高表达提示HCC患者术后预后不良,可作为评估预后的联合诊断指标。     

乙醛脱氢酶2在大鼠心肌缺氧损伤中的抗凋亡作用

目的： 检测大鼠心肌在缺氧条件下发生细胞凋亡的变化，以及乙醛脱氢酶2（ALDH2）在此过程中所起的作用。 方法： 运用缺氧模型，比较大鼠心肌细胞在单独缺氧和经ALDH2特异性抑制剂daidzin预处理24 h后缺氧的凋亡改变，酶活性检测采用乙醛代谢法、凋亡的测定通过用Hoechest 33324、免疫荧光标记用流式细胞仪测定和TUNEL试剂盒检测。 结果： 心肌细胞在daidzin作用下，其酶活性被抑制而细胞无凋亡发生。在daidzin预处理24 h后再经缺氧诱导，比单独缺氧引起的心肌细胞凋亡更为明显：表现为在Hoechest 33324染色中，细胞核溶解和核碎裂(P<0.05)，FACS和TUNEL显示，凋亡细胞明显增加(P<0.05)。 结论： ALDH2酶活性降低可增加心肌细胞对缺氧导致凋亡的易感性，ALDH2对缺氧引起的细胞凋亡有拮抗作用。     

心功能衰竭大鼠模型心肌线粒体蛋白的差异表达分析

利用差异蛋白质组的方法识别心功能衰竭大鼠心肌代谢的异常 ,以期发现新的治疗靶点。对大鼠行冠状动脉左前降支结扎 ,术后 4周 ,左心室射血分数达 4 6 .4 %± 10 .9% ,成功建立心功能衰竭大鼠模型。实验动物分心功能衰竭组 (n =8)和对照组 (n =8) ,分别取左心室进行线粒体抽提。利用双向凝胶电泳技术显示差异蛋白的表达谱。再经胶内酶解 ,行质谱鉴定和蛋白数据库分析。结果发现 ,双向电泳显示 3个蛋白位点表达有显著差异 ,其中一条蛋白被证实为乙醛脱氢酶 2 ,它在心功能衰竭心肌中的表达显著下降。在心肌梗死后 3、7、14及 2 8天心肌乙醛脱氢酶 2mRNA的表达呈逐渐下降趋势。结果提示 ,在心功能衰竭大鼠的心肌线粒体中乙醛脱氢酶 2表达显著下调 ,而乙醛脱氢酶与硝酸甘油的转化有关。这为临床心功能衰竭患者使用硝酸甘油提供了很有价值的依据。     

扩张型心肌病心肌组织中组织蛋白酶L与心功能的关系

目的：探讨溶酶体组织蛋白酶L（cathepsin L）与扩张型心肌病发病的关系。方法：收集因终末期扩张型心肌病行心脏移植术的受体标本20例为心肌病组及脑死亡3h内排除心脏疾患的心脏标本5例为正常对照组，通过免疫组化及RT-PCR等方法半定量分析心肌组织中cathepsin L蛋白阳性颗粒及mRNA表达水平，并对cathepsin L mRNA表达水平的动态变化与心功能（EF值）的相关性进行分析。结果：心肌病组心肌组织中cathepsin L蛋白阳性颗粒及mRNA表达水平均明显高于对照组，均有极显著差异（P〈0．01）；心肌组织cathepsin L mRNA表达水平的变化与EF值的变化呈显著负相关（r=-0．544，P〈0．05）。结论：cathepsin L参与了扩张型心肌病的发生发展。     

乙醛脱氢酶2抑制剂大豆甙对缺氧心肌细胞的MAPK信号转导作用

目的 检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)对大鼠心肌细胞在缺氧状态下氧自由基(ROS)产生、凋亡发生和信号转导的影响.方法 通过缺氧模型比较大鼠心肌细胞缺氧和经大豆甙(daidzin)24h预处理后缺氧的活性变化,用C400测定ROS,用TUNEL试剂盒检测凋亡,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路酶磷酸化的改变用Westernblotting的方法检测.每组实验(n)均重复3次以上. 结果 当心肌细胞ALDH2被特异大豆甙抑制后,更易在缺氧环境下诱导产生ROS和凋亡,且与MAPK有关的磷酸化酶活性均表达增强. 结论 当ALDH2被抑制后,心肌细胞对缺氧的耐受性下降,这与ROS的产生、凋亡和MAPK信号通路的激活有关,ALDH2对缺氧引起的细胞改变具有保护作用.     

组织蛋白酶B抑制剂CA-074Me对小鼠病毒性心肌炎的干预作用

目的观察组织蛋白酶B(cathepsinB)抑制剂CA-074Me对病毒性心肌炎小鼠的干预作用。方法55只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(N组,n=10)、心肌炎对照组(V组,n=15)、低剂量干预组(L组,n=15)及高剂量干预组(H组,n=15)。后三组经腹腔接种柯萨奇病毒(CVB3m)诱发急性心肌炎,L组和H组于病毒接种后第2d分别腹腔注射CA-074Me0.4mg/kg和4mg/kg,均连续使用7d(2～8d),第15d处死全部存活小鼠并取其心脏,采用RT-PCR和免疫组化等方法半定量分析各组小鼠心肌组织中cathepsinB基因转录及蛋白表达水平。结果V组与N组比较,心肌中cathepsinBmRNA及蛋白表达水均明显增加(P<0.05);L组与V组比较,心肌中cathepsinBmRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),小鼠生存率虽然有所升高,但差异无显著性(P>0.05);H组与V组相比,心肌组织中cathepsinBmRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01),心肌损害减轻,小鼠生存率明显升高,差异有高度统计学意义(P<0.05)。结论CA-074Me通过抑制cathepsinB的表达,减轻心肌损害,提高感染小鼠的存活率,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。