转染异种CXCR4基因下调黑色素瘤的致瘤性

[目的]利用基因转染技术将人源趋化因子受体CXCR4基因转染小鼠黑色素瘤细胞B16,研究异源CXCR4基因转染对肿瘤致瘤性的影响.[方法]脂质体转染法将人CXCR4基因导入小鼠黑色素瘤B16细胞中,RT-PCR、流式细胞术(FACS)分析人CXCR4在B16细胞中的表达,体内成瘸实验验证B16细胞的致瘤性.[结果]人CXCR4基因转染B16细胞,G418筛选获得阳性细胞克隆,RT-PCR检测到人CXCR4 mRNA的表达,流式细胞分析检测到人CXCR4蛋白的表达,体内成瘤实验证实异源CXCR4转染降低了B16的生长速度.[结论]异源CXCR4基因转染下调黑色素瘤的致瘤性,其机制可能与异源CXCR4诱导的免疫交叉反应有关.     

食管鳞状细胞癌患者microRNA-127-3p 的 表达水平及临床意义

目的 探讨miR-127-3p 在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及其临床意义。方法 选取 2013 年2 月—2015 年2 月于湖南省人民医院和长沙市中心医院行外科手术的80 例ESCC 患者癌组织及癌 旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-127-3p mRNA 相对表达量,利用免疫组织化学法 检测SKI 蛋白在患者癌组织及癌旁组织标本中的表达,并对所有患者进行≥ 3 年的随访。同时检测ESCC 细 胞株Eca109 和Kyse150 及正常人食管上皮细胞株Het-1a 中miR-127-3p 的表达水平。结果 免疫组织化 学染色结果表明,癌组织中SKI 蛋白表达阳性率较癌旁组织升高（P <0.05）;ESCC 细胞株Eca109、Kyse150 中miR-127-3p 相对表达量低于正常人食管上皮细胞株Het-1a（P <0.05）;临床分期Ⅲ期患者miR-127- 3p 低表达率高于Ⅰ期和Ⅱ期（P <0.05）,有淋巴结转移和饮酒史患者miR-127-3p 低表达率高于无淋巴 结转移和无饮酒史患者（P <0.05）,miR-127-3p 低表达患者的中位无进展期较高表达患者短（P <0.05）。 结论 miR-127-3p 通过靶向调控SKI 蛋白的表达参与ESCC 的发生,其低表达可能参与ESCC 的侵袭及转 移过程,并显著影响患者的预后。     

食管癌组织miR-133表达对其癌细胞生长的影响

【目的】探讨食管癌组织中miR-133表达对其癌细胞生长的影响。【方法】采用RT-PCR法检测miR-133在食管癌组织中的表达。利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-133 mimics、anti-miR-133及其分别相应的对照转入食管癌细胞中,RT-PCR检测miR-133的表达,MTT法检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中EGFR蛋白的表达。【结果】miR-133在食管癌组织中的相对表达量(0.33±0.08)显著低于其癌旁正常组织(1.15±0.18)。miR-133过表达显著抑制了食管癌细胞的生长,而miR-133的下调显著增强了肿瘤细胞的生长。同时,miR-133的过表达抑制了EGFR mRNA和蛋白的表达,miR-133的下调显著增强了EGFR mRNA和蛋白的表达。EGFR的过表达逆转了miR-133对食管癌细胞生长的抑制效应。【结论】miR-133通过调控EGFR的表达进而抑制食管癌细胞的生长。     

上皮性卵巢癌Rac1b表达水平与TP方案新辅助化疗疗效的相关性研究

目的分析上皮性卵巢癌组织中Rac1b表达水平与TP方案新辅助化疗临床疗效的关系。方法收集上皮性卵巢癌组织标本20例,按照是否采用新辅助化疗手段治疗分为实验组与对照组,其中实验组9例,对照组11例。比较采用TP方案新辅助化疗后手术切除上皮性卵巢癌组织与直接手术切除上皮性卵巢癌组织中Rac1b表达水平,并对两组患者开展为期18个月的随访观察,比较两组患者临床疗效与Rac1b表达水平之间的关系。结果实验组Rac1b阳性面积百分率(%)为37.2±5.3,对照组Rac1b阳性面积百分率(%)为6.9±1.1,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中位生存时间为15.9±2.7个月,对照组中位生存时间为16.7±3.1个月,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。对两组患者在随访12个月进行临床疗效分析,结果显示实验组有效率为55.6%,对照组有效率为54.5%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Rac1b的表达水平与化疗药物的使用间存在较为明确的关联。     

乳腺癌环磷酰胺治疗的药物基因组学研究进展

环磷酰胺作为乳腺癌最主要的化疗用药，在乳腺癌治疗中具有显著的药动学、不良反应和药效个体差异，给药剂量难以控制，并可导致严重的血液系统、消化系统不良反应。研究显示环磷酰胺体内代谢酶的功能性遗传变异决定了其体内处置、不良反应及临床疗效。本文综述了近年来环磷酰胺代谢酶功能性遗传变异，在乳腺癌临床治疗中药物基因组学研究的新进展。     

肝癌相关基因HTA的重组表达及多克隆抗体的制备

目的将肝癌相关基因HTA进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其作为肝癌导向治疗靶点的可行性及临床意义奠定基础。方法应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到HTA3＋cDNA,再将其克隆到原核表达载体pET21a（＋）-MBP内,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白MBP-HTA,通过Westernblot和ELISA方法检测重组蛋白的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠制备多克隆抗体,并采用ELISA、Westernblot和免疫组化的方法检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了表达MBP-HTA融合蛋白的原核表达质粒pET21a（＋）-MBP-HTA。重组MBP-HTA融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）内得以高效表达,且以包涵体的形式存在。His-tag磁珠纯化试剂盒纯化和Westernblot分析,得到了分子量约为52kDa的目的蛋白。获得了高效价的特异性多克隆抗体,经ELISA检测抗体的效价为1：3200。用Westernblot检测的效价为1：400。免疫组织化学检测表明：肝癌组织中HTA蛋白的阳性表达率明显高于正常肝组织俨〈0．01）。结论成功地制备出抗MBP-HTA多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性;能用于免疫组织化学的检测,且HTA在肝癌组织中的阳性表达率明显高于正常肝组织。HTA蛋白有望成为肝癌导向治疗的潜在靶点。     

胃癌组织中表皮生长因子受体及蛋白激酶表达程度与临床病理特征的关系

目的 探讨胃癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)和蛋白激酶(AKT)表达情况与胃癌的临床病理特征相关性.方法 用免疫组化的方法分别检测153例胃癌患者的癌组织和癌旁正常胃组织中EGFR、AKT的表达程度,分析其与患者临床病理特征的相关性.结果 在不同的性别、年龄及不同肿瘤病理类型、分化程度的患者中,胃癌组织EGFR、AKT的表达程度比较差异无统计学意义(P＞0.05).EGFR水平与TNM分期有关(x2=5.43,P＜0.05);AKT的表达水平与肿瘤大小,T分期,TNM分期有关(x2=4.73、4.95、5.32,P＜0.05或P＜0.01);出现淋巴结转移及远处转移的胃癌组织中AKT(x2 =4.83、4.75,P＜0.05)、EGFR(x2=4.67,4.58,P＜0.05)表达水平分别较无转移者高.结论 检测胃癌组织中EGFR、AKT的表达对于胃癌的诊断、疾病的分期和转移的判断有一定的参考意义.     

乳腺癌CXCR4的表达及临床意义

【目的】研究趋化因子受体4（CXCR4）在乳腺浸润性导管癌中的表达及其·临床意义。【方法】运用免疫组化技术,检测78例手术切除乳腺浸润性导管癌组织的CXCR4的表达,并分析其染色类型与临床病理类型的关系。【结果】在78例乳腺浸润性导管癌组织中,有60例CXCR4呈广泛一致性表达（广泛表达型）,其中有26例呈高表达,34例呈低表达;18例组织呈局部不均一性的表达（局灶表达型）。与广泛表达型相比,局灶表达型的淋巴结转移明显增加;在广泛表达型病理中,淋巴结阳性病历与染色的强度没有显著性差异。高表达CXCR4肿瘤较低表达CXCR4肿瘤有较高的淋巴结转移率。【结论]CXCR4的表达类型与乳腺癌淋巴结转移级别密切相关,提示CXCR4可能是决定乳腺癌淋巴系统转移的重要因素。     

瘦素、N-Cadherin在大肠癌中的表达及临床意义

【目的】探讨瘦素、N-Cadherin蛋白表达与大肠癌临床病理特征之间的关系。【方法】采用免疫组织化学SP法检测蛋白瘦素、N-Cadherin在120例大肠癌中的表达并分析与临床病例资料的关系。【结果】瘦素、N-Cadherin在大肠癌中的阳性表达率分别为75.8%(91/120)和68.3%(82/120);瘦素与N-Cadherin的高表达均与大肠癌的浸润深度、临床分期、淋巴结转移、分化程度密切相关(P<0.05);大肠癌组织中瘦素、N-Cadherin的表达呈显著正相关,差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】瘦素、N-Cadherin可能在大肠癌的发生、发展中起相互协同作用,二者可能作为判断大肠癌预后及指导临床治疗的指标。