miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调对食管癌细胞侵袭、迁移的抑制作用

目的探讨miR-133b通过介导转化生长因子-β受体1(TGF-βR1)表达下调,抑制食管癌细胞侵袭、迁移的作用及机制。方法采用实时荧光定量PCR检测人正常食管上皮细胞和人食管癌OE19、ECA109细胞中miR-133b的表达;构建miR-133b过表达的人食管癌OE19、ECA109细胞;Transwell小室实验观察不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法检测不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞中TGF-βR1、SMAD3、p-SMAD3、E-cadherin、N-cadherin蛋白水平的影响;双荧光素酶报告基因试验检测miR-133b对TGF-βR1的靶向调控作用。结果成功构建miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞;miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞的侵袭和迁移能力显著降低(P<0.01);miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞中TGF-βR1、p-SMAD3、N-cadherin蛋白水平明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因试验检测发现miR-133b可靶向调控TGF-βR1的表达。结论 miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调,抑制TGF-βR1/SMAD3信号通路活化,抑制人食管癌OE19和ECA109细胞上皮间质转化的发生,抑制食管癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-27a通过调控Sprouty2促进胰腺癌细胞PANC-1的生长

目的探讨miR-27a在胰腺癌细胞生长过程中的作用及相关机制。方法应用RT-PCR检测胰腺癌组织中miR-27a的表达水平;应用CCK-8生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测miR-27a对胰腺癌细胞PANC-1生长能力的影响;应用双荧光素酶报告基因实验和Westernblot筛选miR-27a的靶基因。结果 (1)相比较于癌旁正常胰腺组织,胰腺癌组织中miR-27a表达显著上调;(2)抑制胰腺癌细胞PANC-1内源性miR-27a能够显著下调癌细胞的生长活性;(3)miR-27a能够直接调控Sprouty2基因3'UTR中的MRE序列;(4)抑制PANC-1细胞内源性miR-27a能够显著上调Sprouty2蛋白35%。结论 miR-27通过调控胰腺癌细胞PANC-1中Sprouty2蛋白表达发挥癌基因功能。     

对乳腺癌细胞株增殖影响机制的研究

【目的】探讨拉帕替尼（1apatinib）对乳腺癌细胞株MDA-JMB-435S增殖能力的影响效果和机制。【方法】酪氨酸激酶抑制剂（TKI）拉帕替尼作用乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中检测其miR-21的表达。采用western blot鉴定MDA-JMB-435S细胞表皮生长因子受体（EGFR）表达水平;CCK-8法评价拉帕替尼对MDA-MB-435S细胞生长效果影响;实时定量PCR法评价MDA—MB-435S MAPK基因表达改变。【结果】CCK-8结果显示药物治疗肿瘤细胞生长速度小于对照组;EGFR表达水平较对照组下调;实时定量PCR表明酪拉帕替尼治疗后MDA-MB-435S细胞MAPK基因表达水平下调。【结论】拉帕替尼的抗癌机制以EGFR信号传导途径作为治疗靶点抑制MDA—MB-435S生长具有可行性。     

食管癌Survivin mRNA、Caspase-3的表达及其分子机制

【目的】探讨survivin mRNA、caspase-3蛋白在食管鳞癌中的表达及其分子机制。【方法】采用RT—PCR和免疫组化技术检测38例食管鳞癌及其对应的正常组织中survivin mRNA和caspase-3蛋白的表达。【结果】73．68％食管鳞癌组织呈survivin mRNA阳性表达,显著高于正常组织,并与食管鳞癌的分化程度、临床分期有关,与年龄、性别、淋巴结转移无关。caspase-3蛋白在食管鳞癌和正常组织中的阳性表达率分别为26．32％和89．47％,差异有显著性意义,并与食管鳞癌的分化程度有关,与年龄、性别、淋巴结转移和临床分期无关。在食管鳞癌组织中,survivin mRNA和Caspase-3蛋白表达呈负相关。【结论】survivin、caspase-3参与了食管鳞癌的发生、发展,可以作为食管鳞癌预后的指标,survivin通过抑制caspase-3的活性而发挥其抑制细胞凋亡的作用可能是其主要的分子机制。     

神经纤毛蛋白-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

【目的】探讨神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1,NRP-1)在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。【方法】收集42例口腔鳞状细胞癌、癌旁正常组织作为实验标本,用免疫组织化学方法检测 NRP-1原位表达情况,采用 RT-PCR 检测 NRP-1 mRNA 在口腔鳞状细胞癌、癌旁组织中的表达情况。【结果】本组42例口腔鳞状细胞癌组织中NRP-1均为高表达,42例癌旁正常组织中的 NRP-1表达均呈阴性;癌组织 NRP-1 mRNA 为(0.59±0.15),显著高于癌旁正常组织(0.43±0.17),且两者相比较差异具有显著性(P <0.05);>3 cm 的口腔鳞状细胞癌 NRP-1 mRNA 为(0.63±0.1)显著高于≤3 cm 的组织;周围组织及淋巴结转移的 NRP-1 mRNA 表达为(0.67±0.20),显著高于局部无转移的组织,且两者相比较差异具有显著性(P <0.05)。【结论】口腔鳞状细胞癌中 NRP-1为高表达,且可能参与口腔鳞状细胞癌的生长、转移过程中。     

RASSF6基因在食管癌细胞生长、增殖、侵袭、迁移中的细胞机制研究

目的探究RASSF6基因对食管癌细胞生长、增殖、侵袭、迁移的影响。方法回顾性收集2019年7月至2022年7月在新疆医科大学附属肿瘤医院接受治疗的200例食管癌患者的癌组织及癌旁组织,测定组织中RASSF6相对蛋白表达水平及mRNA水平。提取食管癌组织及癌旁组织细胞进行培养,敲除食管癌细胞中的RASSF6基因,构建缺失RASSF6食管癌细胞,检测正常食管癌细胞、癌旁组织细胞及缺失RASSF6食管癌细胞的生长周期、增殖、侵袭及迁移能力。结果食管癌组织中的RASSF6相对蛋白表达水平及mRNA水平均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织细胞比较,食管癌细胞的G0/G1期所占比例降低,S期及G2/M期所占比例升高,凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与食管癌细胞比较,敲除RASSF6食管癌细胞的G0/G1期所占比例升高,S期及G2/M期所占比例降低,凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织细胞及敲除RASSF6食管癌细胞比较,食管癌细胞培养24、48、72 h后的吸光度值显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与食管癌细胞比较,敲除RASSF6食管癌细胞培养24、48、72 h后的吸光度值显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织细胞及敲除RASSF6食管癌细胞比较,食管癌细胞侵袭及迁移细胞数量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与食管癌细胞比较,敲除RASSF6食管癌细胞的侵袭及迁移细胞数量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。癌旁组织细胞和敲除RASSF6食管癌细胞的生长、增殖、侵袭、迁移能力相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与癌旁组织相比较,食管癌组织中RASSF6蛋白相对表达水平及mRNA水平均显著上调。敲除RASSF6基因可以显著抑制食管癌细胞的生长、增殖、侵袭、迁移能力。     

miR-326靶向MAPK/MEK信号通路抑制食管鳞状细胞癌恶性生物学行为

目的探讨miR-326靶向MAPK/MEK信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 20例食管鳞状细胞癌患者,取手术切除食管癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-326mRNA和MAPK mRNA相对表达量,采用免疫组织化学法检测MAPK蛋白表达。3种食管癌细胞系(KYSE150、EC9706、TE-9)和人正常食管上皮细胞系Het-1A,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-326 mRNA和MAPK mRNA相对表达量,Western blot法检测细胞MAPK蛋白相对表达量。将对数生长期EC9706细胞随机分为miR-326组、转染对照组和空白对照组,miR-326组和转染对照组分别转染miR-326 mimic和mimic NC,空白对照组细胞不作任何处理,采用Western blot法检测细胞MAPK、p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量,克隆形成试验检测细胞克隆形成率,划痕试验检测细胞划痕闭合率,Transwell小室试验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。结果食管癌组织miR-326 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P0.05),MAPK mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P0.05)。KYSE150、EC9706和TE-9细胞miR-326 mRNA相对表达量均低于Het-1A细胞(P0.05),MAPK mRNA和MAPK蛋白相对表达量高于Het-1A细胞(P0.05),且EC9706细胞MAPK蛋白相对表达量最高。miR-326组细胞MAPK 3'UTR WT荧光素酶活性(0.53±0.05)明显低于转染对照组(1.22±0.14)(P0.05),MAPK 3'UTR MUT荧光素酶活性(0.86±0.06)与转染对照组(0.91±0.11)比较差异无统计学意义(P0.05)。miR-326组细胞MAPK蛋白相对表达量(0.32±0.15)低于转染对照组(0.88±0.07)和空白对照组(0.91±0.06)(P0.05),细胞克隆形成率[(21.30±0.55)%]、划痕闭合率[(29.47±4.12)%]和侵袭细胞数[(113.86±3.15)个]低于转染对照组[(75.43±0.81)%、(80.52±2.51)%、(427.27±4.25)个]和空白对照组[(79.13±0.65)%、(83.44±1.87)%、(468.10±3.38)个](P0.05),G_0/G_1期细胞比率[(63.15±1.20)%]和细胞凋亡率[(18.54±0.60)%]高于转染对照组[(41.18±0.60)%、(5.28±1.30)%]和空白对照组[(45.11±0.80)%、(4.13±0.90)%],S期和G_2/M期细胞比率及p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量低于转染对照组和空白对照组(P0.05),转染对照组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 miR-326靶向抑制MAPK/MEK信号通路的激活,影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。     

miR-21在前列腺癌中的表达及抑制其表达对前列腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨抑制前列腺癌细胞中miR-21基因表达对癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 RTPCR检测前列腺癌及癌旁组织中miR-21基因的mRNA表达;空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)和miR-21 inhibitor组转染人前列腺癌PC-3细胞,48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-21基因的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果前列腺癌组织中miR-21的mRNA表达显著高于癌旁组织(P0.01);转染miR-21 inhibitor后miR-21的表达显著降低;NC组细胞存活率、细胞凋亡率及ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与对照组,差异无统计学意义(P0.05),miR-21 inhibitor组细胞存活率及ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。结论抑制前列腺癌细胞中miR-21基因的表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Periostin蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达及其与患者临床病理特征的相关性

【目的】探讨食管鳞状细胞癌组织中Periostin蛋白表达情况及其与患者病理特征的相关性。【方法】收集在本院行手术切除的118例食管鳞状细胞癌组织标本(观察组),对应癌旁的正常食管组织(距癌组织5 cm以上)作为对照组,采用免疫组化法、半定量RT-PCR法和Western blot法检测食管鳞状细胞癌组织及癌旁正常食管组织中Periostin蛋白表达情况,采用Kaplan-Meier生存曲线、Cox比例风险回归模型分析Periostin蛋白的表达及其与食管鳞状细胞癌患者预后的相关性。【结果】观察组Periostin蛋白高表达率为63.6%(75/118),显著高于对照组的27.1%(32/118),差异有统计学意义(χ2=31.614,P<0.001)。Periostin mRNA在食管鳞状细胞癌组织中Periostin/GAPDH值高于正常食管组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Periostin蛋白在正常食管癌旁组织的Periostin/β-actin值低于食管鳞状细胞癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同Periostin表达水平的食管鳞状细胞癌患者TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Periostin低表达患者的生存率明显高于Periostin高表达患者(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示,Priostin高表达是影响食管鳞状细胞癌患者总生存期的危险因素(P<0.05)。【结论】Periostin在食管鳞状细胞癌组织中的表达与组织学类型、TNM分期及淋巴结转移有关,其预测食管鳞状细胞癌患者预后具有重要意义。     

lncRNA RP 11-351J 23.1靶向miR-765对食管鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制研究

目的研究lncRNA RP11-351J23.1对食管鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响和潜在机制。方法以正常食管上皮细胞HEEC为对照,qRT-PCR检测食管鳞癌Eca109、KYSE150和EC9706细胞中lncRNA RP11-351J23.1和miR-765表达量,用分子生物学方法上调或下调Eca109细胞中RP11-351J23.1和miR-765表达量,CCK8法和Transwell实验分别检测Eca109细胞增殖、侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告系统验证RP11-351J23.1和miR-765的调控关系。结果与对照相比,在食管癌Eca109、KYSE150和EC9706细胞中lncRNA RP11-351J23.1表达量均显著降低(P0.05),miR-765表达量均显著升高(P0.05);过表达lncRNA RP11-351J23.1可抑制Eca109细胞增殖、侵袭和迁移;lncRNA RP11-351J23.1靶向miR-765,抑制miR-765的表达;抑制miR-765表达可抑制Eca109细胞增殖、侵袭和迁移;过表达miR-765可逆转过表达lncRNA RP11-351J23.1对Eca109细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论 LncRNA RP11-351J23.1在食管鳞癌细胞中表达下调,过表达lncRNA RP11-351J23.1可靶向miR-765抑制食管鳞癌Eca109细胞增殖、侵袭和迁移。LncRNA RP11-351J23.1可能是食管鳞癌的潜在分子靶点。     

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。     

miR-601 is a prognostic marker and suppresses cell growth and invasion by targeting PTP4A1 in breast cancer

MicroRNAs (miRNA) play important roles in the initiation and progression of breast cancer. Here, we investigated the role of miR-601 in breast cancer and found that its expression was significantly down-regulated in breast cancer tissues compared with matched adjacent non-cancerous breast tissues. Moreover, we found that down-regulation of miR-601 was closely associated with distant metastasis and poor distant metastasis-free survival in breast cancer. In addition, miR-601 levels were inversely correlated with metastatic potential of human breast cancer cell lines. Further experiments showed that ectopic overexpression of miR-601 suppressed breast cancer cell proliferation, migration and invasion, whereas miR-601 knockdown promoted breast cancer cell proliferation, migration and invasion. Furthermore, protein tyrosine phosphatase type IVA 1 (PTP4A1) was identified as a direct target of miR-601. Overexpression of miR-601 repressed PTP4A1 mRNA and protein expression. Conversely, inhibition of miR-601 increased PTP4A1 mRNA and protein expression. Taken together, our data suggest that miR-601 inhibits growth and invasion of breast cancer cells by targeting PTP4A1 and that miR-601 is a potential biomarker for prognosis and therapeutic target in breast cancer.     

凋亡抑制蛋白Livin在食管癌表达的实验研究

目的 探讨食管癌发生、发展过程中凋亡抑制蛋白Livin的表达及其与食管癌临床病理特征的关系.方法 采用实时定量PCR法及蛋白免疫印迹法检测Livin在正常食管黏膜(10例)、不典型增生(10例)、原位癌(10例)及浸润癌(10例)组织中mRNA及蛋白的表达强度.结果 Livin mRNA在正常食管黏膜、不典型增生、原位癌及浸润癌组织中呈渐进性高表达[分别为1.00±0.00、2.26±0.79、7.24±1.06、12.21±2.47],原位癌、浸润癌与正常食管黏膜组织比较,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 Livin与食管癌的发生、发展密切相关,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点.     

Effect of MicroRNA-218 on the viability,apoptosis and invasion of renal cell carcinoma cells under hypoxia by targeted downregulation of CXCR7 expression

ObjectiveTo investigate the effect of microRNA-218 on the viability, apoptosis and invasion of renal cell carcinoma cells under hypoxia by targeted regulation of expression of chemokine receptor 7 (CXCR7).MethodsThe expression of miR-218 in renal cell carcinoma cell lines under normal and hypoxia conditions, as well in normal renal tubular epithelial cells (HK2) was measured using RT-PCR. MiR-218 mimic and NC were transfected into renal cell carcinoma cell line ACHN using Lipofectamine™ 2000. The expression of miR-218 was analyzed using RT-PCR. The viability, apoptosis, migration and invasion of the transfected cells were assayed using the MTT assay, flow cytometry and transwell assays. The expression of CXCR7 was assayed using RT-PCR and Western blot. Luciferase reporter was used to verify the downstream target of miR-218.ResultsThe expression of miR-218 was lower than in renal cell carcinoma cell lines ACHN, 769-p and Caki-1 that in HK-2. The expression of miR-218 in the renal carcinoma cell lines was lower under hypoxia than under normal oxygen conditions. The expression of miR-218 in ACHN cells under normal and hypoxic conditions was significantly increased after transfection with miR-218 mimic. Compared with NC transfected cells under normal oxygen condition, the mimic-transfected cells had reduced viability, migration ability and invasion ability, and increased apoptosis, and mimic transfected-cells under hypoxia had significantly reduced viability, migration ability and invasion ability, and increased apoptosis. Overexpression of miR-218 mimic resulted in significant reduction in the expression of CXCR7 at protein and mRNA levels under normal and hypoxic conditions. Luciferase reporter assay confirmed that CXCR7 is the target protein of miR-218.ConclusionUp-regulation of miR-218 expression in renal cell carcinoma under hypoxia can result in significant and targeted down-regulation of CXCR7 expression, which could reduce cell viability, migration and invasion ability and induce apoptosis in the cancer cells.     

microRNA-301在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 分析miR-301在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌侵袭转移中的意义.方法 用FQ-PCR方法从细胞水平检测5种胰腺癌细胞系(PANC-1、PaCa-2、AsPC-1、Hs-766T、BxPC-3)中miR-301的表达;进一步用免疫组织化学方法从组织水平检测胰腺癌组织芯片(含60份胰腺癌组织、10份癌旁组织和10份正常胰腺组织)中miR-301的表达;在证实miR-301高表达后,进一步研究其在胰腺癌侵袭转移中的临床意义,用100 nmol/L miR-301抑制剂(anti-miR-301)或阴性对照(Anti-miR~(TM) Negative Control#1)处理对数生长的胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2,用WB检测胰腺癌细胞系中侵袭转移相关分子COX-2、MMP-2的表达,并用Transwell技术检测胰腺癌细胞的侵袭转移能力.结果 FQ-PCR检测结果显示,在5种胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2、AsPC-1、Hs-766T、BxPC-3中miR-301的相对表达量分别为33.09±4.21、30.76±3.18、47.57±3.56、20.20±1.21、76.75±13.51;而正常胰腺细胞中为1.00±0.08;5种胰腺癌细胞系分别与正常胰腺细胞相比,差异有统计学意义(t值分别为8.86、9.53、6.39、6.77、11.18,P均<0.01).免疫组织化学结果亦显示,胰腺癌组织、癌旁组织及正常胰腺组织中miR-301的相对表达量分别为0.88±0.09、0.22±0.04、0.14±0.05;胰腺癌组织分别与癌旁组织及正常胰腺组织相比,差异有统计学意义(t值分别为15.1、10.6,P均<0.01);正常胰腺组织与癌旁组织相比,差异无统计学意义(t=1.32,P=0.22).用miR-301抑制剂抑制胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2中miR-301的表达后,WB检测结果显示,侵袭转移相关分子COX-2、MMP-2的表达下调;细胞侵袭转移能力试验结果显示,miR-301抑制剂处理后跨膜转移的细胞数分别为PANC-1(587±27)个、PaCa-2(363±13)个,而阴性对照处理后跨膜转移的细胞数为:PANC-1(1 091±15)个、PaCa-2(737±44)个;miR-301抑制剂处理与阴性对照处理相比,细胞侵袭转移能力亦显著下降(t值分别为7.89、7.56,P均<0.01).结论 胰腺癌细胞系和组织中miR-301高表达;且与胰腺癌的侵袭转移密切相关,抑制miR-301的表达能够有效抑制胰腺癌细胞的侵袭转移,miR-301有望成为抗胰腺癌侵袭转移治疗的新分子靶标和胰腺癌早期诊断的新分子标志.     

miR-198 通过靶向ZEB2 调控EMT 过程抑制肝癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 探讨微小核糖核酸-198（miR-198）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织细胞中的表达及其对癌细胞增殖、迁移的影响及其相关机制。方法 采用qRT-PCR 检测miR-198 在HCC 组织及细胞(HepG2,Hep3G,MHCC97H,Huh7) 中的表达情况;采用脂质体2000 向Huh7 细胞中单独转染miR-198 mimics,共转染miR-198 mimics 和pcDNA3.1-ZEB2;生物信息学网站预测miR-198 的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用Western blot 检测E 盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2, ZEB2）及上皮-间质转化（epithelialmesenchymaltransformation, EMT）相关蛋白表达;CCK-8 法和细胞划痕实验检测Huh7 细胞增殖和迁移能力。结果 20 例HCC 组织中miR-198相对表达量（0.354±0.022）明显低于邻近正常组织（4.762±1.135）,差异有统计学意义（t=17.365,P＜ 0.001）。HCC细胞系HepG2（0.589±0.103）,Hep3G（0.495±0.086）,MHCC97H（0.558±0.056）和Huh7（0.362±0.045）中miR-198 相对表达量较正常肝细胞LO2（1.823±0.125）显著降低（t=17.159,18.466,17.590,20.315,均P ＜ 0.05）。miR-198 mimics 组细胞增殖（0.398±0.146 vs 0.691±0.213）和迁移能力（20.012±2.103 vs 84.032±6.512）较对照组明显降低（t=1.965,52.459,均P ＜ 0.001）。miR-198 mimics 组细胞中E-cadherin 表达较对照组明显升高,N-cadherin和Vimentin 表达较对照组明显降低（t=18.478,17.550,19.706,均P ＜ 0.01）。ZEB2 是miR-198 的靶基因,miR-198负调控ZEB2。20 例HCC 组织中ZEB2 相对表达量（3.621±1.143）明显高于邻近正常组织（ 0.736±0.030）,差异有统计学意义（t=11.284,P ＜ 0.001）,与miR-198 表达呈负相关（r=-0.702,P ＜ 0.05）。共转染过表达ZEB2 逆转了miR-198 mimics 对HCC 细胞增殖、迁移和EMT 的抑制作用。结论 miR-198 在HCC 组织和细胞中表达下调,miR-198 通过靶向负调控ZEB2 的表达抑制Huh7 细胞的增殖和迁移。     

miR-645调控干扰素诱导蛋白2对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的探讨miR-645对干扰素诱导蛋白2(interferon inducible protein 2, IFIT2)的表达以及对肺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用反转录PCR法检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-645相对表达量。对数生长期人肺癌细胞H460分为对照组和转染组,分别转染NC mimic和miR-645 mimic,采用CCK-8法检测2组细胞增殖率,采用Transwell小室实验检测2组细胞侵袭率;采用荧光素酶报告基因实验检测2组细胞miR-645和IFIT2的结合活性;采用反转录PCR法检测2组细胞miR-645和IFIT2 mRNA相对表达量。结果肺癌组织(3.25±0.25)和肺癌细胞(2.85±0.22)miR-645相对表达量均高于正常肺组织(1.00±0.12)和正常肺上皮细胞(1.00±0.08)(P<0.05);转染组细胞增殖率[(220±12)%]、细胞侵袭率[(65.6±5.2)%]均高于对照组[(100±8)%、(25.9±3.2)%](P<0.05);转染组野生型3’UTR(WT-IFIT2)相对荧光素酶活性(0.48±0.06)低于对照组(1.00±0.12)(P<0.05),突变型3’UTR(MUT-IFIT2)相对荧光素酶活性(1.12±0.09)与对照组(1.00±0.08)比较差异无统计学意义(P>0.050);转染组细胞IFIT2 mRNA相对表达量(0.32±0.05)低于对照组(1.00±0.10)(P<0.05),miR-645在肺癌细胞中表达水平与IFIT2呈负相关(r=-0.743,P<0.001)。结论 miR-645可促进肺癌细胞H460的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控IFIT2的表达而实现。     

F-box蛋白4和端粒重复序列结合因子1相互作用核蛋白2mRNA表达与食管鳞癌发生发展关系研究

目的 检测食管鳞癌组织中F-box蛋白4(FBX4)和端粒重复序列结合因子1相互作用核蛋白2(TIN2)mRNA表达,并分析其与食管鳞癌相关临床指标的关系.方法 收集110例明确诊断的食管鳞癌中心组织及其30例癌旁组织,采用SBYR Green实时荧光定量PCR方法检测FBX4和TIN2基因在食管鳞癌中心组织和癌旁组织mRNA水平的表达,并分析FBX4和TIN2 mRNA表达临床相关指标的关系.结果 FBX4 mRNA在食管鳞癌组织中的相对表达量为0.24±0.43(n=110),而在肿瘤旁组织中为0.40±0.27(n=30),两者差异具有统计学意义(P=0.008);食管鳞癌组织中TIN2 mRNA的相对表达量为1.59±1.19(n=101);肿瘤旁为2.54±1.89(n=30),两者差异具有统计学意义(P=0.000).TIN2 mRNA表达在临床各参数不同分组内均未发现有统计学差异(P>0.05),而FBX4 mRNA表达虽在不同性别、年龄、钡餐分型、临床分期和肿瘤长度中均没有统计学差异(P>0.05),但在不同病理分型中存在统计学差异,即相对于高分化鳞癌,低分化和中分化的鳞癌组织中的FBX4 mRNA表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05).FBX4和TIN2在肿瘤组织中的表达呈正相关(r=0.671,P=0.000).结论 FBX4和TIN2 mRNA在食管鳞癌组织中均表现表达增高,且存在直线相关关系,提示FBX4和TIN2可能在食管癌的发生发展中具有重要的临床意义;肿瘤分化程度与FBX4表达相关,而与TIN2不相关,表明肿瘤分化还与FBX4介导的泛素化相关.