用序列特异性引物多聚酶链反应的方法进行大样本、多基因的多态性鉴定

目的:建立多个基因同时进行多态性分析的序列特异性引物多聚酶链反应的方法,以满足其在临床检验中进行基因多态性鉴定时的应用。方法:实验于2005-10/2006-05于河南省新乡医学院分子生物研究室完成。进行临床普通血液常规检测的患者血样200份(由新乡医学院第三附属医院提供),采用临床血样,提取DNA后采用多聚酶链反应扩增,并以扩增后的样品进行琼脂糖凝胶电泳,以是否出现相应的扩增条带作为基因分型的标准。应用优化后的序列特异性引物多聚酶链反应的方法分析以下基因的多态性:肿瘤坏死因子α-308A/G和-238G/A变异、白细胞介素6-174G/C变异、细胞色素P4502D6(CYP2D6)*10B外显子第188位的C/T变异。并由此优化序列特异性引物多聚酶链反应的方法,以达到应用同一个多聚酶链反应扩增程序,可同时对多个基因、多个临床样本的基因多态性同时进行分析,且基因型清晰,分型快速、准确。结果:①用20 g/L的琼脂糖凝胶电泳可看到每泳道内可有2条或1条扩增产物,其中阳性对照β珠蛋白基因的扩增片段长268 bp,此条带可以出现、减弱或者不出现。②其中肿瘤坏死因子α-308A/G存在G/G和A/G两种基因型;肿瘤坏死因子α-238G/A位点可检测到的基因型有G/A、G/G和A/A3型;白细胞介素6-174G/C变异位点可检测到的基因型均为G/G纯合子;细胞色素P4502D6*10B外显子第188位的C/T位点可检测到的基因型为C/C、C/T、T/T3型。结论:优化后的序列特异性引物多聚酶链反应适合对大样本,多个基因的单核苷酸位点变异进行多态性分析,快速、准确、成本低。     

细胞色素P450CYP2D6＊10B缺陷等位基因与利培酮治疗效应的关系

目的探讨CYP2D6＋10B缺陷等位基因与利培酮治疗效应的关系。方法采用等位基因的特异性扩增法，根据是否含有突变型CYP2D6＋10B缺陷等位基因将70例精神分裂症患者分为野生型等位基因的纯合型（w／w）组（16例），突变型等位基因的纯合型（m／m）组（16例）以及野生型和突变型等位基因的杂合型（m／w）组（38例），观察3组患者利培酮4—6mg／d治疗6周后疗效与不良反应。采用阳性和阴性症状量表（PANSS）评价疗效，副反应量表（TESS）和锥体外系不良反应量表（RSESE）评定药物不良反应。PANSS减分率≥30％为有效。结果治疗6周后，有效者58例。有效组W等位基因频率（0．43）明显低于无效组（0．83），有效组的in等位频率（0．57）明显高于无效组（0．17）。自第4周起，m／w，m／m型PANSS减分值明显多于w／w型。3种基因型患者组间不良反应差异无统计学意义。结论利培酮治疗携带CYP2D6＊10B缺陷等位基因患者的疗效优于治疗野生型等位基因患者的疗效。CYP2D6t10B缺陷等位基因与利培酮不良反应无关联。     

艾灸仪艾灸对慢性心力衰竭患者胃肠道症状的影响

目的观察使用艾灸仪艾灸对改善慢性心力衰竭患者胃肠道症状的影响。方法将2016年1月-2017年6月入住我院心血管科60例慢性心力衰竭出现胃肠道症状的患者按随机数字表法分为实验组和对照组各30例。对照组给予常规护理,实验组在对照组护理基础上加用艾灸仪艾灸中脘、内关、足三里、合谷等穴,中脘穴每日1次,内关穴、足三里穴、合谷穴隔日左右交替艾灸,每次30 min,连续使用2周。比较2组干预前后胃肠道症状总积分及疗效。结果胃肠道症状总积分,对照组干预前为(11.427±2.691)分,干预后为(6.598±3.144)分,实验组干预前为(11.796±2.767)分,干预后为(4.636±2.398)分,实验组改善情况优于对照组(P0.05);实验组总有效率为83.33%,优于对照组的50.00%(P0.05)。结论艾灸仪艾灸有助于改善慢性心力衰竭患者胃肠道症状。     

斑点酶标法检测血清中人心肌特异性肌钙蛋白方法的建立

目的　建立人血清中肌钙蛋白的检测方法。方法　将倍比稀释后的待检血清 2μl滴加于硝酸纤维膜上的方格内 ,5 %牛血清白蛋白 50℃下 30min封闭硝酸纤维膜 ,然后将该膜浸于 1∶1 0 0稀释的辣根过氧化物酶 (HRP)标记的抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体N1 5C ,N1 6D ,37℃反应 40min后 0 .0 35MPBS -T液振荡洗涤 3次 ,每次 5min ,其后将膜浸入显色液中显色后水洗终止反应。目测判读结果。结果　辣根过氧化物酶标记的N1 5C单克隆抗体检测心肌梗塞患者血清 ,患者血清最高稀释为 1∶8,N1 6D检测患者血清时 ,血清稀释度可达 1∶64 ,用 2株单抗检测时正常人血清均无斑点出现。结论　由抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体N1 6D组建的斑点酶标方法能用于心肌梗塞病人的定性诊断     

2种制备Taq DNA聚合酶方法的比较

目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶活性能可有效扩增DNA片段;冻融法制备的Taq DNA聚合酶活性较低。结论硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶优于冻融法,能够达到分子生物学实验中基因扩增的要求。     

两种饲料对丝光绿蝇蛹长和羽化率的影响

目的 观察比较两组丝光绿蝇室内连续饲养的蛹期形态和羽化率。方法 将丝光绿蝇引入室内，分成鱼粉组和麦麸组两种幼虫饲料在室内进行连续饲养，对两组各代蛹期的蛹长、羽化率等进行比较观察，结果 第204代蛹长鱼粉组显著大于麦麸组；第5代蛹长鱼粉组与麦麸组差异无显著性。第1－4代羽化率两组差异无显著性，第5代羽化率鱼粉组显著性高于麦麸组。结论 鱼粉组蛹形态、羽化率等指标好于麦麸组，提示鱼粉组饲料饲养效果好于麦麸组饲料。     

原发性肋骨尤文氏肉瘤一例报告

原发性肋骨尤文氏肉瘤一例报告第一临床学院胸外科刘伟崔永生纪振东第二临床学院ＣＴ科杨献军关键词尤文氏肉瘤肋骨肿瘤中图号Ｒ７３８．１尤文氏肉瘤（Ｅｗｉｎｇ′ｓＳａｒｃｏｍａ）起源于骨髓内的原始细胞，是一种生长迅速且少见的恶性肿瘤，原发于肋骨者甚少见，临床...     

先天性非融合型横过异位肾一例报告

<正> 异位肾系指一侧或两侧肾脏先天性位置异常而言。依异位肾所在位置分为简单异位肾(异位肾在本侧)和横过异位肾(异位肾过体中线至对侧)。横过异位肾又依两肾脏有无融合分为融合型横过异位肾和非融合型横过异位肾。 非融合型横过异位肾甚少见。我院于1979年曾诊断一例,报告如下。     

Ebstein氏畸形一例报告

<正> 患者男,30岁。七年来腹胀、胸闷、呼吸困难,活动后更明显.当地医院发现肝大以“肝炎”治疗无效而入我院.体检:口唇微绀,巩膜无黄染,颈静脉怒张.两肺呼吸音清,心脏理学检查未发现增大,心率92,偶闻期前收缩,心音弱,各瓣膜区未闻及杂音。肺肝界:右锁骨中线第三肋间,肝下界肋弓下4cm,剑突下6—7cm,有触痛.腹平软,腹水征(-)。常规化验均正常。心电:异位心率,心房扑动2—3∶1,不正常心电图、完全右束枝传导阻滞。X线胸透:右房增大。胸正位片:心胸比例增大,心右缘右房段显著向上、向下及向右突出延     

Angiografin与Ultravist在CT造影增强扫描的随机对比研究

国内常用于ＣＴ造影增强扫描的造影剂有离子型和非离型两类。本文对１２００例病进行了随机对比研究。通过两类造影剂在不良反应发生率及影像质量的对比，我们认为为了保证ＣＴ增强扫描中病人的安全和效果，应以非离型造影剂为首选。