乙酰基亚硝基脲对C57BL/6J雄鼠毒性作用的研究

目的 观察乙酰基亚硝基脲（ENU）对C57BL/6J雄鼠的毒性作用及对睾丸等组织器官的影响,分析引起小鼠死亡的原因,探索ENU处理雄鼠的最佳处理浓度.方法 将8～10周龄的C57BL/6J 雄鼠分为实验组和对照组.实验组又分为A、B、C、D 4组,分别腹腔注射ENU 150、100、75、50 mg/kg,每周1次,共3次.对照组腹腔注射生理盐水.首次注射ENU后的第1周至12周,每周分别取实验组和对照组小鼠2 只进行剖检并行组织病理学观察,取其睾丸、附睾称重,记录死亡小鼠数量.结果 实验组小鼠剖检发现胸腔纵隔内有巨大肿块,明显压迫心脏;组织切片观察发现睾丸和肝、肾有不同程度的病理改变.结论 ENU为小鼠的一种强诱变剂,纵隔肿瘤是导致雄鼠死亡的主要原因,ENU对睾丸的毒性作用最强,主要表现为曲精小管组织结构破坏,生精细胞减少.ENU处理雄鼠的最佳浓度为150 mg/kg.     

小鼠胰岛素样生长因子-1基因体外克隆及表达的研究

目的 探讨小鼠胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因提取、鉴定及重组质粒转染COS-7细胞表达.方法 通过RT-PCR获取小鼠骨骼肌IGF-1的cDNA,将该基因亚克隆入重组质粒p1 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP)中,构建重组质粒p2 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP- IGF-1),脂质体转染COS-7细胞,ELISA检测细胞培养基中IGF-1蛋白量.结果 克隆IGF-1基因cDNA与GenBank中该基因序列一致,重组质粒转染COS-7细胞培养基中均含有IGF-1蛋白.结论 IGF-1基因成功构建到重组质粒p2中,且能在COS-7细胞中过表达.     

胰岛素样生长因子-1诱导新生小鼠海马源性神经干细胞增殖分化的研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生小鼠海马源性神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法通过取新生C57BL／6J小鼠海马组织,机械分离,体外培养NSCs,特异性标志蛋白Nestin免疫荧光鉴定。在细胞培养液中加入100μg／L的IGF-1记为IGF-1组,同时设立正常细胞对照组。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,GFAP、133Tubulin细胞免疫化学检测细胞分化情况。结果体外成功培养NSCs,特异性蛋白Nes-tin具有表达。IGF-1组NSCs较对照组增殖显著,且IGF-1组细胞具有显著的迁移和分化能力。细胞免疫荧光鉴定,IGF-1可促进细胞分化为星形胶质细胞和神经元（P〈0．05）。结论IGF-1能够促进体外培养的新生小鼠海马源性NSCs增殖,并诱导NSCs向星形胶质细胞和神经元分化。     

Lats1基因敲除小鼠卵巢玻璃化冷冻的研究

目的对小鼠卵巢玻璃化冷冻的方法和冷冻液进行研究,摸索出一种简便的小鼠卵巢冻存法。方法用玻璃化冷冻液EFS40对Lats1基因敲除杂合子小鼠卵巢进行玻璃化冷冻,冷冻效果通过解冻后的卵巢肾包膜下易位移植、卵巢囊原位移植和对移植后的成活卵巢进行组织学检查来判定。对出生的后代进行Lats1基因检测,来判定卵巢原位移植结果的可靠性。结果与结论解冻后的卵巢肾包膜下移植733%成活,并具有正常的功能;卵巢囊移植后卵巢存活率为467%,受体怀孕率为333%,平均产仔数为(37±22)只,后代中能检出Lats1基因;试验中还发现,受体的发情时间普遍提前10d左右。     

仔猪用于实验性外科手术教学初探

我院从１９９４年开始试用仔猪代替犬进行外科手术，通过３年比较发现：无论是手术操作、术后成活率，还是价格，仔猪都具有优越性，它的生理解剖特点以及皮肤结构更接近人。因此，用仔猪进行外科手术实验可行而且经济。     

小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的研究

目的　对小鼠卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液进行研究。方法　用两种玻璃化冷冻液EFS4 0 (高钠 )、DEFS4 0 (低钠 )对ICR、C57BL 6J小鼠卵母细胞进行冷冻 ,0 5mol L蔗糖液解冻 ,体外授精前对部分解冻后的C57BL 6J小鼠卵母细胞进行透明带切割。结果　DEFS4 0冷冻液冷冻效果明显高于EFS4 0冷冻液 ,ICR小鼠卵母细胞解冻后成活率达 75 2 %、体外授精率 (2 4 6 % )与对照组相比差异无显著性 ,C57BL 6J小鼠卵母细胞解冻后成活率为 87 1%、卵母细胞切割后体外受精率 (36 0 % )与对照组相比差异也无显著性。结论　冷冻液中钠离子浓度影响小鼠卵母细胞冷冻效果 ,用DEFS4 0 (低钠 )冷冻液进行玻璃化冷冻可以取得理想的冷冻效果。     

实验兔心血管系统解剖标本制作

作者在实践中摸索了一套制作实验兔心血管系统解剖标本的经验，其主要过程为：动物灌注固定、血管色素填充、血管游离、涂色等。     

低硒小鼠模型的建立及低硒对心肌的影响

目的建立低硒实验动物模型,观察低硒对心肌的影响。方法利用黑龙江地产酵母配制低硒小鼠饲料,使用配制的小鼠饲料喂养BALB/c幼鼠,经过4个月的喂养,测定血清、肝脏、心肌细胞的硒含量,观察心肌超微结构的变化,测定血清心肌酶的变化。结果利用黑龙江地产酵母配制的低硒饲料,硒含量为0.016 mg/kg,符合低硒标准。BALB/c鼠用该饲料喂养4个月,心肌、肝脏、血清硒含量分别为0.187 mg/kg、0.219 mg/kg、0.241mg/kg,符合低硒诊断标准。观察低硒鼠心肌超微结构,可见心肌细胞线粒体肿胀,细胞核出现了异型性,血清心肌酶较常硒鼠升高。结论利用黑龙江地产酵母成功配制了低硒饲料。经过低硒饲料饲养可建立低硒鼠模型。低硒可以引起BALB/c鼠心肌细胞损伤。     

小鼠Calbindin-D28k基因体外表达及其抗凋亡作用的研究

目的:研究钙结合蛋白D28k(calbindin-D28k,CaBP)体外表达及其对神经元细胞抗凋亡作用。方法:RT-PCR从小鼠脑组织中扩增出小鼠CaBP的cDNA片段;重组构建pTH-CB质(pcDNA3-TH-CB),脂质体包裹pTH-CB质粒转染MN-9D细胞(多巴胺能杂交瘤神经元细胞);RT-PCR、免疫沉淀法检测CaBP的cDNA在细胞内表达情况;Hoechst染色、Caspase-3活性检测、AnnexinV/PI法对CaBP过表达的抗凋亡作用进行检测。结果:小鼠脑组织RT-PCR扩增出785bp条带,测序结果与Genebank中报道完全一致。脂质体包裹重组构建pTH-CB质粒转染MN-9D细胞后,转染pTH-CB质粒的MN-9D细胞中,CaBP的mRNA表达量和CaBP水平显著高于转染pc-DAN3组和正常MN-9D细胞组(P0.05),3种细胞凋亡检测方法结果显示,CaBP过表达的细胞抗凋亡能力显著提高。结论:体外克隆CaBP的cDNA能在细胞内表达,过表达的CaBP通过抑制细胞的caspase-3活性,起抗凋亡作用。     

大鼠妊娠期糖尿病影响胎鼠发育及仔鼠生长的研究

目的建立SD大鼠妊娠期糖尿病（GDM）模型,研究妊娠糖尿病对胎鼠发育及仔鼠生长的影响。方法40mg／kg链脲佐菌素（STZ）腹腔注射怀孕第1天大鼠复制GDM,5d后空腹检测血糖、尿糖和体质量。对照组注射等量柠檬酸钠缓冲液。孕鼠第13天、第19天剖宫产,观察其死胎、吸收胎、畸胎及存活胎数等,并测量胎鼠体质量。取4周龄仔鼠检测其血糖和体质量,并进行行为学观察。结果受孕第13天、第19天剖宫产,GDM组死胎、吸收胎、畸心胎数明显多于对照组;4周龄GDM组仔鼠体质量明显低于对照组,记忆力试验也低于对照组。8周龄GDM组仔鼠空腹血糖值显著高于对照组。结论大鼠妊娠糖尿病影响胎鼠正常发育,并导致仔鼠记忆力下降和血糖值升高。