青蒿琥酯对生存素在乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达的影响

目的 探讨青蒿琥酯对生存素(survivin)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中表达的影响.方法 以不同浓度(0、25、50 μg/mL)的青蒿琥酯处理MDA-MB-231细胞,分别于药物处理后24、48和72 h收集细胞及培养上清液,用RT-PCR检测不同组别、不同时间点的细胞中survivin的基因表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组、各时间点培养上清液中survivin的蛋白质表达水平.结果 PCR结果和ELISA结果均显示,随着药物浓度的增加和处理时间的延长,survivin基因水平和蛋白质水平的表达也逐渐降低,同一时间点各组间survivin的表达量进行单因素方差分析,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组(0 μg/mL)在24 h和48 h survivin的表达量变化不大,经t检验分析,差异无统计学意义(P＞0.05),而各浓度经药物处理48 h后survivin的表达量明显低于24 h的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可通过抑制survivin的表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

非甾体类抗炎药对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖影响的实验室研究

目的 通过研究阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用.方法 采用MTT法检测不同浓度的阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响.结果 阿司匹林、塞来昔布单药对MDA-MB-231细胞生长均有抑制作用,表现为浓度、时间依赖性,统计学差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的阿司匹林、塞来昔布分别联合阿那曲唑后对MDA-MB-231细胞的抑制作用较单用阿那曲唑增强,亦表现为浓度依赖性,差别具有统计学意义(P<0.05).结论 阿司匹林和塞来昔布均有抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用,两者分别联合阿那曲唑后有协同抗肿瘤的作用.     

以体外共培养系统进行乳腺癌细胞株对正常内皮细胞作用的研究

目的 本文建立了体外肿瘤细胞与内皮细胞的共培养体系，试图以这种体外共培养环境下了解乳腺癌细胞对正常内皮细胞的作用，模拟研究体内肿瘤细胞对血管内皮细胞的细胞性质和行为的作用和影响。方法 对乳腺癌细胞株MEF-7、MDA-MB-231与正常、新鲜脐带的静脉内皮细胞体外共培养的细胞比例和培养条件进行了实验摸索，分别建立了体外乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231与正常脐带静脉内皮细胞的体外共培养体系。以同期培养的正常脐带静脉内     

大蒜素对人乳腺癌细胞株的抑制作用

目的探讨大蒜素对人乳腺癌细胞株（MDA-MB-231）的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度（5、10、20、40、80mg／L）大蒜素对增殖MDA-MB-231的抑制率。通过药物半数抑制浓度（IC50）计算软件计算IC50。相差倒置显微镜下观察细胞形态的改变情况。结果10、20、40mg／L组大蒜素对MDA-MB-231的增殖有明显抑制作用（P〈O．01）。24、48、72hIC50值分别为16．50、8．28、7．82mg／L。相差倒置显微镜下观察可见MDA-MB-231细胞分裂相减少，部分细胞漂浮，残存细胞形态不规则，状态差，反光差，出现细胞碎片。16．50、8．28、7．82mg／L的大蒜素作用24、48、72h后，琼脂糖凝胶电泳可见DNA凋亡梯形条带。结论大蒜素可使MDA-MB-231的增殖受到抑制，促进肿瘤细胞凋亡，具有抗肿瘤作用。     

IVIG联合抗病毒方案对手足口病合并脑炎患儿病程及实验室指标的影响

目的 研究静脉注射用丙种球蛋白(intravenous immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)联合抗病毒方案对手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)合并脑炎患儿病程及实验室指标的影响。方法 选取2016年3月～2018年1月本院收治的126例HFMD合并脑炎患儿,采用随机数字表法分为对照组及观察组,每组63例。对照组给予抗病毒治疗,观察组在对照组基础上给予IVIG治疗,疗程3～5天。观察两组患儿的实验室指标变化、病程变化及临床疗效情况。结果 两组患儿在年龄、性别、病程、儿童类型、居住地等方面差异无统计学意义(P0.05)。两组患儿在治疗前血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、前白蛋白(prealbumin,PA)、白细胞计数(white blood cell count,WBC)、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、S100B、神经元特异性烯醇化酶(neuro specific enolase,NSE)及脑脊液S100B、NSE比较差异无统计学意义(P0.05),治疗后两组患儿ALP、PA均略有增高,观察组略高于对照组但差异无统计学意义(P0.05),血清WBC、CRP、血清S100B、血清NSE及脑脊液S100B、脑脊液NSE均有所下降且观察组明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组患儿退热时间、皮疹消退时间、神经系统症状消失时间均明显短于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。对照组总有效率为77.78%,观察组总有效率为96.82%,两组患儿临床疗效有效率差异有统计学意义(P0.05)。结论 IVIG联合抗病毒治疗方案能够改善手足口病合并脑炎患儿的实验室指标,缩短各种临床症状的改善时间和病程,临床效果显著。     

静脉丙种球蛋白预防早产儿感染的临床观察

目的 :预防早产儿感染。方法 :98例早产儿随机分为观察组 5 0例和对照组 48例 ,两组均预防性应用抗生素 3天 ,观察组于生后 48小时内应用静脉丙种球蛋白 (IVIG)每次 2 0 0～ 40 0mg kg ,每周 1次 ,连用 4周。观察两组疗效差异及应用IVIG前后免疫抗体的变化。结果 :观察组应用IVIG后 ,IgG水平明显升高 ( P <0 0 1) ,而对照组IgG水平治疗前后无显著变化 ( P >0 0 5 ) ,观察组新生儿期的感染率明显低于对照组 (P <0 0 1)。结论 :应用IVIG可提高早产儿的免疫力 ,有效预防早产儿感染     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。     

着丝粒蛋白CENP-H对乳腺癌细胞株MCF7增殖能力的影响

目的 研究CENP-H对乳腺癌细胞增殖能力的影响,初步探讨CENP-H与乳腺癌发生、发展的关系.方法 将反转录病毒质粒pMSCV和pMSCV-CENP-H经脂质体转染至293FT细胞制备病毒,并感染MCF7细胞,用嘌呤霉素筛选及Western blot鉴定,建立CENP-H基因稳定表达的MCF7细胞株;应用噻唑盐(MTT)法、平板集落形成实验、5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法检测CENP-H对MCF7细胞增殖的影响.结果 成功建立稳定表达CENP-H的MCF7细胞株,并发现CENP-H过表达可上调细胞增殖相关分子cyclin D1的表达;MTT、平板克隆实验及Brdu掺入实验结果显示CENP-H过表达后,MCF7的增殖能力模型增强.结论 CENP-H可上调cyclin D1的表达,增强MCF7的增殖能力,提示CENP-H可能在乳腺癌发生、发展中起重要作用.     

沉默Kin17表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的 探讨沉默Kin17表达对乳腺癌细胞生长增殖的影响,为评估该分子作为未来药物靶点的潜能提供依据. 方法 分别用携带Kin17基因特异性siRNA与正常对照siRNA的慢病毒重组载体感染MDA-MB-231细胞,再用嘌呤霉素进行抗性筛选,然后在荧光显微镜下观察阳性细胞的比例;用Real-time PCR与Western blot方法检测稳定转染了慢病毒重组载体的MDA-MB-231细胞中的Kin17mRNA与蛋白表达水平;CCK-8实验检测细胞生长增殖状况. 结果 通过感染携带Kin17特异性siRNA的病毒重组载体,稳定、明显敲减了MDA-MB-231细胞中的Kin17 mRNA与蛋白表达水平,而且显著减缓了该乳腺癌细胞的生长增殖速度. 结论 沉默Kin17表达能抑制三阴表型乳腺癌细胞的增殖,并有可能成为一种潜在的乳腺癌治疗新策略.     

对乳腺癌细胞株增殖影响机制的研究

【目的】探讨拉帕替尼（1apatinib）对乳腺癌细胞株MDA-JMB-435S增殖能力的影响效果和机制。【方法】酪氨酸激酶抑制剂（TKI）拉帕替尼作用乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中检测其miR-21的表达。采用western blot鉴定MDA-JMB-435S细胞表皮生长因子受体（EGFR）表达水平;CCK-8法评价拉帕替尼对MDA-MB-435S细胞生长效果影响;实时定量PCR法评价MDA—MB-435S MAPK基因表达改变。【结果】CCK-8结果显示药物治疗肿瘤细胞生长速度小于对照组;EGFR表达水平较对照组下调;实时定量PCR表明酪拉帕替尼治疗后MDA-MB-435S细胞MAPK基因表达水平下调。【结论】拉帕替尼的抗癌机制以EGFR信号传导途径作为治疗靶点抑制MDA—MB-435S生长具有可行性。     

人乳腺癌细胞株KLK5 mRNA的表达及雌激素的调节作用

目的 探讨雌激素对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7和B37组织激肽释放酶5（KLK 5）mRNA的表达水平,以及雌激素对KLK5 mRNA表达水平的影响。方法 分别取生长良好的MCF-7和B37细胞,在不同浓度的雌激素（17-βE2）存在下培养72小时后,收集细胞,提取总RNA,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应,检测KLK5 mRNA表达水平及变化。结果 在未经刺激的乙醇对照组,MCF-7细胞KLK5 mRNA的相对表达水平（KLK5 mRNA/GAPDH mR-NA）为（3.23±0.51）×10^-5,B37细胞KLK5 mRNA表达水平为（3.13±0.62）×10^-4。B37细胞KLK5 mRNA表达水平高于MCF-7细胞。当17-βE2浓度10^-11mol/L以下时,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA表达水平与乙醇对照组无明显差异（P〈0.05）。随17-βE2浓度的增高,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA的表达呈递增趋势,各组与乙醇对照组相比差异有显著意义（P〈0.01）。结论 雌激素对人乳腺癌细胞株MCF-7和B37细胞的KLK5 mRNA表达有剂量依赖的上调作用。     

二甲双胍对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231体外抑制作用的研究

目的探讨二甲双胍对三阴乳腺癌细胞的抑制作用和可能的损伤机制。方法利用MTT、流式细胞仪检测二甲双胍对MDA-MB-231乳腺癌细胞周期的影响及诱导凋亡作用;应用Western blot技术检测加药后MDA-MB-231乳腺癌细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化表达水平变化。结果不同浓度二甲双胍作用MDA-MB-231乳腺癌细胞系24、48h后细胞增殖被不同程度抑制,并呈时间和浓度依赖性(P0.05);可促进MDA-MB-231乳腺癌细胞系凋亡,并呈浓度依赖性(P0.05);细胞周期检测,与对照组比较,G0/G1期比例增加(P0.05),S期比例逐渐降低(P0.05),G2/M期比例无明显变化(P0.05);药物处理MDA-MB-231乳腺癌细胞系24h后,Western blot检测示随药物浓度的增加,细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)磷酸化表达水平下降(P0.05)。结论二甲双胍对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖有抑制作用,下调P-ERK1/2的表达可能是其抗肿瘤机制之一,可能成为三阴乳腺癌潜在的维持治疗药物。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖周期的影响

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌细胞株增殖周期的影响.方法 培养乳腺癌细胞株MCF-7,用TSA、SAHA、CS055、MS-275 4种不同类型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂分别作用于细胞,于24、48、72、96 h用MTT比色法观察细胞生长情况,初筛出高效的抑制剂.用所选出的抑制剂的不同浓度处理细胞,流式细胞术检测S期细胞的比例和周期素Cyclin D1、Cyclin A2,并进行统计分析.结果 在TSA、SAHA、CS055和MS-275 4种不同类型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂中,SAHA显示出较强的抑制能力(P＜0.05);在一定时间和浓度范围内,其抑制能力有明显的时效关系;在抑制剂作用下,S期细胞比例和周期素Cyclin A2表达下降,Cyclin D1表达上升(P均＜0.05).结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA是乳腺癌细胞增殖的高效抑制剂,其抑制作用有一定的时效关系;周期素Cyclin D1、Cyclin A2参与了抑制剂对细胞增殖周期的调控.     

HSV-TK/GCV系统在体外对胃癌MNK-45细胞株的增殖抑制作用研究

目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷（HSV-TK/GCV）自杀基因系统对胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移的抑制效应。方法　分别采用MTS试验、CCK8试验、Transwell试验、Western blot试验和RT-PCR方法检测HSV-TK/GCV系统对胃癌MNK-45细胞在24,48,72和96h的增殖、侵袭和迁移的改变;对MNK-45细胞凋亡相关蛋白mRNA水平的变化。结果　HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞的增殖效应,并能够减弱胃癌MNK-45细胞的侵袭和迁移能力,诱导MNK-45细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bax蛋白水平和mRNA的表达增加,抑制Bcl-2蛋白表达水平的降低,促进凋亡的发生。结论　HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移,诱导MNK-45细胞凋亡的发生。     

厚朴酚抑制体外乳腺癌细胞株生物活性的实验研究

[目的]探讨中药厚朴提取物厚朴酚(Magnolol,Mag)抑制不同乳腺癌细胞株生物活性的作用.[方法]选取不同乳腺癌高转移细胞株(MCF-7、MDA-MB-231),在培养液中分别加入不同浓度的Mag溶液,观察处理后细胞的凋亡、侵袭、转移和黏附能力,判断Mag对乳腺癌细胞株生物活性的影响.[结果]Mag可以抑制细胞的抗凋亡、侵袭、转移和黏附能力(P<0.05),随着Mag浓度的增大,抑制生物活性的作用逐渐增强(P<0.05).[结论]Mag可以通过抑制不同受体状态乳腺癌细胞株的抗凋亡率、侵袭能力、黏附能力和迁移能力,从而抑制其生物活性,在乳腺癌的治疗及预防乳腺癌复发、转移中具有重要的临床应用价值.     

肿瘤抑制基因WWOX转染MDA-MB-231细胞系的实验研究

目的探讨肿瘤抑制基因WWOX与乳腺癌疾病相关性,为进一步研究WWOX基因的作用机制及功能奠定基础。方法构建真核表达载体pcDNA4．0／Myc—His-WWOX,并转染至MDA．MB．231细胞中,采用RT-PCR及Westernblot方法,检测WWOXmRNA及融合蛋白在MDA-MB-231细胞中的表达。结果测序结果显示,RT-PCR法获得的WWOX序列与GenBank中报道的一致。真核表达载体pcDNA4．0／Myc．His—WWOX转染MDA—MB-231细胞48h后,从RT-PCR及Westernblot结果中观察到WWOX基因的有效转录。结论成功构建了肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体pcDNA4．0／Myc．His—WWOX,为进一步研究WWOX在乳腺癌发生和进展中的作用及其靶向基因治疗奠定了实验基础。     

地特胰岛素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖及凋亡的影响

目的：探讨地特胰岛素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法：用10 U/L地特胰岛素处理人乳腺癌细胞株MCF-7,处理不同时间后,用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用Western blotting法检测胰岛素受体（insulin receptor,INS-R）和胰岛素样生长因子1类受体（type 1 insulin-like growth factor receptor,IGF-1R）的表达,用real-time PCR法检测B细胞淋巴瘤因子2（B cell lymphoma 2,Bcl 2）、IGF-1R、Myc-1和caspase-3的mRNA水平.结果：人乳腺癌细胞株MCF-7经地特胰岛素处理后,细胞增殖水平随处理时间的延长呈现增高趋势（r=0.753,P ＜0.01）,细胞凋亡水平则随处理时间的延长而降低（r=-0.821,P＜0.01）;INS-R和IGF-1R蛋白的表达水平随处理时间的延长而升高,之后有所降低;凋亡抑制基因Bcl-2、IGF-1R和Myc-1的mRNA水平也呈类似变化趋势（r=0.813,P＜0.01）,而促凋亡相关基因caspase-3则呈现相反的变化趋势（r=-0.719,P＜0.01）.结论：地特胰岛素处理可以促进人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖并抑制其凋亡,其机制可能与促进凋亡抑制基因表达以及抑制凋亡基因表达有关.     

MTT法测定复发转移性乳腺癌体外化疗药物敏感性实验研究

目的探讨MTT法体外药敏试验在复发转移性乳腺癌化疗中的价值。方法取35例复发转移性乳腺癌患者肿瘤组织，简易机械法制备细胞悬液，应用MTT法体外药敏试验测定其对10种常用化疗药物的敏感性，并指导临床用药，同时与临床疗效进行相关分析。结果MTT法检测复发转移乳腺癌患者药敏试验的成功率为91．4％，体外药敏试验的敏感性为86．4％，特异性为80．0％，阳性预测值为90．5％，阴性预测值为72．7％，总的预测准确率为84．4％。结论MTT法可作为临床上指导复发转移乳腺癌个体化化疗的有效方法。     

羟基磷灰石微晶体对人白血病HL—60细胞株的生长抑制作用

采用体外细胞培养和MTT测定等方法,研究羟基磷灰石微晶体(HAP—Sol)对人白血病细胞株(HL—60)的生长抑制作用。将不同浓度的HAP—Sol(0.001～0.02mg/ml)分别加入 HL—60细胞(10~4/孔),置 37℃,5％CO_2培养 48小时。结果显示:①不同浓度HAP—Sol对HL—60细胞集落形成可产生影响:在倒置显微镜下,可见全部测定孔细胞集落形成均较对照孔低下,且呈剂量依赖关系,同时出现萎缩和死亡细胞;②不同浓度HAP—Sol对HL—60细胞生长抑制率呈明显正相关性,在浓度为1.0,5.0,10.0.15.0,20.0时,抑制率相应为16.8,39.2,53.6,64.2,75.0。本研究进一步证实,HAP—Sol本身能明显抑制HL—60细胞生长,可能具有细胞毒作用。对白血病及肿瘤的治疗可能具有良好的开发前景。