髓源抑制细胞对HBV转基因小鼠肝脏炎症损伤抑制作用的研究

目的：建立HBV抗原特异性细胞毒性T细胞（CTLs）介导的小鼠肝炎模型,探讨肿瘤诱导的髓源抑制性细胞（MDSCs）在免疫介导的HBV转基因小鼠肝损伤中的有效性。方法制备新鲜的HBV转基因小鼠肝脏匀浆,予普通小鼠腹腔注射,1次/周,连续4周,以诱导致敏小鼠（Sensitized-mice）产生HBV抗原特异性CTLs（HBV-specific CTLs,HBV-CTLs）。分离致敏小鼠脾脏来源HBV-CTLs,静脉回输给高复制型HBV转基因小鼠,分别在注射前,注射后1 d、3 d、6 d和9 d经眶后取血测血清ALT/AST水平。分离荷瘤小鼠骨髓来源的MDSCs,静脉注射给HBV-CTLs诱导的肝炎小鼠,并在注射后24 h,经眶后取血测血清ALT/AST水平,肝脏组织经固定、石蜡包埋、HE染色进行组织形态学检测。结果致敏小鼠脾脏来源的HBV-CTLs可诱导HBV转基因小鼠肝组织损伤,血清ALT、AST水平呈升高趋势;且与CTLs注射组小鼠相比,CTLs联合MDSCs注射组小鼠肝脏组织损伤程度减轻,小鼠血清转氨酶水平显著降低[ALT：（254.5±25.50）vs （80.67±11.57）,P ＜0.05;AST：（301.5±40.50）vs（249.0±79.00）,P ＞0.05）]。结论静脉回输肿瘤诱导的MDSCs可有效减轻HBV-CTLs诱导的肝炎小鼠中肝组织损伤。     

CD4+CD25+调节性T细胞在慢性乙型肝炎患者免疫发病机制中的作用

目的:探探讨CD4~ CD25~ 调节性T细胞(regulatory T Cell,Treg)在慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者免疫发病机制中的作用以及其可能在治疗中的应用前景.方法:收集未经抗病毒治疗的CHB患者34例和健康对照18例外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)标本,以三色/四色流式分析法对PBMC中CD4~ CD25~ Treg的频率及表面分子表达进行分析,并同时通过磁珠分选去除CHB患者PBMC中的CD4~ CD25~ Treg,分别以MHC-肽-五聚体法和酶联斑点计数法(enzyme-linked immunospot assay,Elispot)检测HBV core18-27抗原肽刺激的对HBV特异性的CTL(cytotoxic T lymphocyte)频率的升高以及IFN-γ的分泌.结果:CHB患者外周血中CD4~ CD25~ CD45RO~ CTLA4~ T细胞群以及CD4~ CD127~(lo)CD25~(hi-int)T细胞群所占CD4~ T细胞群的比例与健康对照相比均明显上升(3.78%±1.87%.4.40%±2.11%vs 1.58%±0.76%,2.11%±1.26%;t=4.86,t=5.96;P<0.01)去除CHB患者中CD4~ CD25~ Treg后,特异性CTL的频率以及其分泌IFN-γ的频数与未去除组比出现显著上调(0.94%±0.38%,26±13 vs 0.20%±0.18%,119±30;t=5.25,t= 9.886;P<0.01).结论:CHB患者循环中增多的Treg可能参与抑制抗HBV的免疫应答抑制,去除Treg以及联合病毒抗原肽刺激的进一步研究可能为CHB的免疫治疗提供新的思路.     

调节因子X5在消化系统肿瘤中高表达

［摘要］目的: 观察调节因子X5(regulatory factor X5,RFX5)在消化系统肿瘤组织中的表达水平。方法: 通过分析美国癌症和肿瘤基因图谱计划(the Cancer Genome Atlas,TCGA)中常见消化系统肿瘤的RNA测序数据,获得RFX5 mRNA在癌组织和癌旁组织的表达水平。利用免疫组织化学方法检测25例癌组织和配对的癌旁多肿瘤组织芯片中食管鳞状细胞癌、胃腺癌、结肠腺癌、直肠腺癌、肝细胞肝癌和胰腺腺癌的RFX5蛋白表达水平。结果： 初步研究显示,上述6种消化系统肿瘤中RFX5 mRNA和蛋白水均明显高于癌旁组织,且在胃腺癌和肝细胞肝癌中的表达上调最为显著。 结论： RFX5 mRNA和蛋白在常见消化系统癌组织中均呈过表达。     

转录因子Foxp3在肝癌细胞中的表达及意义

目的研究转录因子Foxp3在肝癌细胞中的表达及其对肿瘤免疫微环境的作用。方法用常规RT-PCR和基因表达谱芯片检测Foxp3在10种肝癌细胞系中的表达,进一步用Western blot、免疫组化和流式细胞术验证其蛋白水平的表达;将表达Foxp3的肿瘤细胞及用Foxp3 shRNA沉默后的肿瘤细胞分别与CD4＋CD2-5T细胞共培养,CFSE评价免疫效应细胞增殖情况。结果 Foxp3在所有的肝癌细胞系中均出现表达;肝癌细胞与CD4＋T细胞进行共培养,可显著抑制共培养体系中CD＋4T细胞增殖及其表面标记的表达;肝癌细胞Foxp3表达沉默后,可显著逆转共培养体系中肝癌细胞对CD4＋T细胞增殖的表达抑制。结论在肝细胞癌（HCC）细胞系及部分HCC患者组织中均发现Foxp3的表达,肝癌细胞Foxp3的表达参与对肿瘤微环境中效应性T细胞增殖的抑制。     

GP73在原发性肝癌诊断中的应用及临床意义

原发性肝癌（HCC）是世界上第五种最常见癌症,HCC标化发病率为21/10万,死亡率为20.2/10万[1]。HCC死亡率高。如能及早诊断,可以采取手术切除或射频消融等有效手段进行干预,可改善预后。     

全髋关节置换术生物固定型股骨柄假体临床应用进展

全髋关节置换术（THA）已成为治疗终末期非感染性髋关节疾患最为成功的手术,其中生物固定型股骨柄假体的临床应用越来越广泛.生物固定型股骨柄假体通过紧压配合获得初始稳定性,通过骨整合获得远期稳定性,临床报道的中远期疗效良好.影响临床疗效的多种因素中假体设计十分重要,假体设计各异使得临床疗效略有差别,术后出现相似的假体松动、应力遮挡效应等并发症.该文就生物固定型股骨柄假体设计特点、临床应用中远期效果及近年设计研究进展作一综述.     

早期肠内与肠外营养对进展期胃癌术后患者的支持效果

目的评价早期肠内营养（early enteral nutrition,EEN）与肠外营养（parenteral nutrition,PN）对进展期胃癌术后患者的支持效果。方法将40例进展期胃癌患者随机分为EEN组（n=20）与PN组（n=20）。EEN组患者,术后24h开始经鼻肠营养管予以肠内营养液瑞素;PN组患者,术后24h开始经锁骨下静脉给予肠外营养,两组患者术后营养支持均为7d。两组患者分别于术前1d和术后第8d晨起静脉采血检测营养指标[总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PA）]和体液免疫指标（IgA、IgM、IgG）,并比较两组患者术后肠功能恢复时间（即肛门排气时间）、并发症发生率、营养相关费用等。结果 EEN组患者术后IgA恢复程度显著高于PN组（P〈0.05）,并且肠功能恢复时间短,并发症发生率及营养相关费用低。结论 EEN是一种安全、有效、经济的营养补给方法 ,而且具有免疫调节作用,所以是进展期胃癌患者术后早期首选的营养支持方法 。     

Foxp3 siRNA特异性抑制肝癌患者调节性T细胞进而增强抗肿瘤免疫应答的体外实验研究

目的:设计、合成Foxp3 siRNA序列,并体外干扰肝癌患者调节性T细胞(regulatory T cells,Treg),评价Foxp3 siRNA干扰后对Treg表型及抑制功能的影响以及是否能上调肝癌患者抗肿瘤免疫应答的能力.方法:设计并化学合成Foxp3 siRNA,将Foxp3 siRNA通过脂质体转染的方式体外转染Treg.通过实时定量PCR以及流式细胞术分析Foxp3 siRNA对Treg中Four3表达的抑制效能,并通过流式细胞术评价Foxp3 siRNA干扰后对Treg表面分子CD127、CTLA-4、GITR的表达以及对CD4+CD25-T细胞的抑制作用.通过酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,Elispot)以及五聚体(pentamer)分析法评价Foxp3 siRNA干扰肝癌患者Treg后对经肿瘤特异性抗原NY-ESO-1b诱导的肿瘤特异性免疫应答的影响.结果:通过Foxp3 siRNA的转染可实现对Treg Foxp3表达的部分沉默,并且上调Treg表面CD127分子的表达,下调CTLA-4和GITR的表达.肝癌患者Treg Foxp3表达的沉默可下调Foxp3+Treg对CD4+CD25-T效应性细胞增殖抑制的能力.通过五聚体法及Elispot法检测发现,Foxp3 siRNA以及siRNA-control转染组NY-ESO-1157-165特异性的细胞毒T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的数量分别为0.21%±0.17%和0.57%±0.39%(P<0.05),与siRNA-control进行干扰的肝癌患者组相比,Foxp3 siRNA干扰后的Treg与特异性CTL共培养后,肿瘤特异性CTL数量及分泌的干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的数量显著上调(132±55vs27±11,P<0.05).结论:通过Foxp3 siRNA对于肝癌患者Treg中Foxp3表达的沉默,可在体外干扰肝癌患者Treg免疫抑制功能,继而增强肝癌患者经肿瘤抗原诱导的CTL抗肿瘤免疫应答.     

人β2-微球蛋白在pET-22b(+)表达载体中的克隆、表达与纯化

目的：构建人β2-microglobulin(β2-M)基因的原核表达载体，在大肠杆菌中高效表达β2-M蛋白质并进行纯化，为构建MHC-肽四聚体奠定基础。方法：从人外周血单核细胞中提取总RNA，采用RT-PCR技术扩增出去除信号肽部分的β2-M基因，克隆人pET-22b( )表达载体进行诱导表达。采用离子交换层析和凝胶过滤方法对表达产物进行纯化，用ELISA和Westem blot法进行免疫学鉴定。结果：成功地构建了表达载体pET-22b( )-β2-M，对表达产物进行了纯化，并对表达产物进行了鉴定。结论：获得β2-M蛋白的高效表达，为进一步利用亲和素在体外构建MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定了基础。