完全腹膜化腹腔内置网片与经腹腹膜前修补术的对比研究

目的探讨腹腔镜下脐正中襞或脐内侧襞覆盖完全腹膜化腹腔内置网片(TPIPOM)与经腹腹膜前修补术(TAPP)修补腹股沟疝的优缺点。方法回顾性分析2010年1月至2012年1月,广东省第二人民医院行TPIPOM手术患者资料,并与同期行TAPP患者资料进行对比。比较指标包括手术时间、术后住院时间、下床活动时间、术后疼痛持续时间、使用止痛药例数、术前1 d、术后4 h、术后1、2、3 d血白细胞计数(WBC)、C-反应蛋白(CRP)以及炎性因子白介素6(IL-6)、住院费用、术后随访情况等。结果 TPIPOM组完成96例,TAPP组完成72例。TPIPOM组手术时间、术后住院时间、下床活动时间、术后疼痛持续时间、住院费用、使用止痛药患者例数明显少于TAPP组,差异有统计学意义(t=20.760 5、3.774 8、6.177 8、5.598 9、15.244 4,χ2=4.495 9,P=0.000 0、0.000 2、0.000 0、0.000 0、0.000 0、0.034 0)。术前1 d,二组患者WBC、CRP和IL-6差异无统计学意义(t=1.484 6、1.023 3、1.284 2,P=0.139 5、0.307 7、0.200 8)。术后4 h、术后1、2、3 d,TPIPOM组WBC均低于TAPP组,差异均有统计学意义(t=3.181 6、7.147 8、2.388 6、2.052 0,P=0.001 7、0.000 0、0.018 0、0.041 7)。术后4 h、术后1、2、3 d,TPIPOM组CRP均低于TAPP组,差异均有统计学意义(t=4.852 0、3.057 8、3.695 8、3.299 0,P=0.000 0、0.002 6、0.000 3、0.001 2)。术后4 h、术后1、2、3 d,TPIPOM组IL-6均低于TAPP组,差异均有统计学意义(t=8.190 5、6.461 8、4.805 4、2.485 9,P=0.000 0、0.000 0、0.000 0、0.013 9)。术后随访24~48个月,二组均未发现肠粘连、肠梗阻以及疝复发。结论 TPIPOM具有手术操作简单、手术时间短、疼痛轻、恢复快、住院时间短、住院费用低、不易复发、微创等优势;适宜在基层医院推广。     

腹腔镜疝囊高位结扎及脐内侧襞加强修补腹股沟疝的实验研究

目的:通过动物实验研究观察腹腔镜疝囊高位结扎+脐内侧襞加强术修补腹股沟疝的安全可行性。方法:将健康新西兰雄兔(先天性双侧内环口未闭合)64只,随机均分为实验组与对照组,实验组行腹腔镜右侧疝囊高位结扎+脐内侧襞加强术,对照组行腹腔镜右侧疝囊高位结扎术;两组分别于术后第7、15、30、60天各随机取8只进行腹腔观察,及修补侧内环口的抗腹压能力测量。结果:实验期内无动物死亡。术后两组兔均无腹腔内并发症发生,实验组脐内侧襞与原腹膜融合良好。两组兔在术后修补侧腹股沟区承受抗腹压值均随时间延长而不断升高,且均在术后30 d基本达最高,但实验组术后各时间点的抗腹压值均明显高于对照组(均P0.05)。结论:腹腔镜疝囊高位结扎+脐内侧襞加强术修补兔腹股沟疝是安全有效,可为临床推广提供实验依据。     

经内镜逆行胰胆管术在胆道损伤的临床应用

胆道损伤是胆囊切除术最为常见的严重并发症,腹腔镜胆囊切除术和小切口胆囊切除术开展以来胆道损伤的发生率有所上升[1],胆道损伤后及时诊断和正确的处理与患者的预后密切相关。本文总结了17例胆囊切除术胆道损伤患者的经内镜逆行胰胆管术(ERCP)诊治情况,报告如下。     

完全腹膜化腹腔镜腹腔内补片植入法治疗成人腹股沟嵌顿性斜疝

目的:探讨完全腹膜化腹腔镜腹腔内补片植入法治疗成人腹股沟嵌顿性斜疝的安全性、可行性及优越性。方法:2002年1月至2007年6月,我院应用腹腔镜腹腔内补片植入术联合脐正中襞完全覆盖网片法治疗成人急性腹股沟嵌顿性斜疝患者35例。结果:5例麻醉后自动复位,25例腹腔镜手法复位或辅助复位成功,4例镜下剪开内环口复位成功,1例经腹股沟区小斜切口切开部分弓状下缘复位成功。35例均行腹腔镜腹腔内补片植入术联合脐正中襞完全覆盖网片法,5例附加肠切除吻合术,1例大网膜切除术。平均手术时间55(30～110)min,平均住院6.5(3～11)d。无切口感染、肠梗阻等并发症发生,术后3dB超检查未见腹腔、盆腔积液等并发症。随访6～48个月,平均26个月,无复发、粘连性肠梗阻、睾丸萎缩等。结论:完全腹膜化腹腔镜腹腔内补片植入法治疗成人急性腹股沟嵌顿性斜疝安全、可行、有效,具有创伤少、并发症少、费用低等优点。     

腔镜治疗甲状腺癌12例报告

在腔镜甲状腺腺瘤切除术中,个别患者被术中冰冻切片诊断为甲状腺癌,这给内镜甲状腺手术的开展提出了难题.对此,大部分学者选择中转开放手术[1],也有学者采用腔镜进行手术治疗[2].我们于2003年1月至2006年1月12例甲状腺癌患者进行腔镜一侧腺叶全切除加峡部及对侧次全切除(患者家属不同意中转开放手术),同时行中央区淋巴结清除,现将资料报告如下.     

免补片法腹腔镜腹股沟疝修补术

目的 探讨免补片法腹腔镜下腹股沟疝修补的有效性.方法 回顾分析广东省第二人民医院2001年1月至2004年3月,应用腹腔镜免补片法治疗92例腹股沟疝的手术后恢复情况及随访结果,并与同期91例腹腔镜完全腹膜外疝修补手术(totally extraperitoneal laparoscopichemioplasty,TEP)的结果相比较.结果 免补片组与TEP组手术时间分别为(21±4)min与(70±16)min(t=28.01,P<0.05)、住院天数分别为(3.5±1.0)d与(4.8±1.2)d(t=7.96,P<0.05)、下床活动时间分别为(1.0±0.5)d与(1.8±0.7)d(t=8.90,P<0.05)、术后疼痛持续时间分别为(1.0±0.5)d与(2.5±0.7)d(t=16.69,P<0.05)、住院总费用分别为(4500±500)元与(8000±820)元(t=34.89,P<0.05),免补片组均明显优于TEP组,差异有统计学意义.免补片组无皮下血肿及阴囊水肿发生,TEP组皮下血肿8例(8.7%)(χ~2=6.48,P<0.05).免补片组与TEP组术后48h C-反应蛋白(CRP)分别为(3.9±0.3)mg/dl与(8.8±0.5)mg/dl(t=80.48,P<0.05).所有病例随访(56.9±6.2)个月,免补片组复发率为0,TEP组复发率为2.1%(χ~2=0.51,P>0.05).结论 腹腔镜免补片治疗腹股沟疝安全、可行,恢复快、住院时间短、费用少.     

Sirtl在肝癌及癌旁组织中的表达差异研究

目的：研究肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱差异。方法：应用包含44000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片检测肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱，并比较两者之间存在明显上、下调的表达差异基因，随后用RT—PCR和Western blot方法进行验证分析。结果：基因芯片筛选出存在差异表达的基因，其中沉默信息调节因子1（Sirtl）在肝癌组织与癌旁组织中的表达差异明显，在肝癌组织中明显升高，经RT—PCR和Western blot证实与基因芯片结果一致。结论：Sirtl基因的表达可能与肝癌的发生发展密切相关。     

同种异体骨髓间质干细胞移植在大鼠肝内的定居能力

背景：骨髓间充质干细胞具有极强的自我复制能力和多向分化潜能，但当体外分离培养的骨髓基质干细胞移植到体内后，其分布和定居情况不明，这关系到骨髓基质干细胞是否可以作为靶细胞治疗应用于临床。 目的：探索绿色荧光蛋白标记的大鼠骨髓间质干细胞（MSCs），经不同途径移植到同种异体大鼠，其定居于肝脏的能力。 设计：析因设计。 单位：广东省第二人民医院普外科／中山大学博士后科研基地，南方医科大学珠江医院普通外科，中山大学附属第三医院器官移植科。 材料：实验于2003—01／2004-12在解放军第一军医大学基础部药理教研室完成。选取清洁级成年SD大鼠36只，随机分为5组：CCL4＋门静脉移植组（6只）、门静脉移植对照组（6只）、CCL4＋尾静脉移植组（6只）、尾静脉移植对照组（6只）、混合组（12只）。 方法：①从大鼠骨髓中分离培养获取骨髓间充质干细胞，以绿色荧光蛋白进行标记，体外扩增后，以细针移植骨髓间充质干细胞悬液，移植量为0．5mL／100g。②CCL4＋门静脉移植组：骨髓间充质干细胞移植前3d，每天按20g／L的CCL4 2．5mL／kg体质量灌胃饲养，首次计量加倍，标记的骨髓间充质干细胞从门静脉移植。门静脉移植对照组：骨髓间充质干细胞移植前正常饲养，标记的骨髓间充质干细胞从门静脉移植。CCL4＋尾静脉移植组：骨髓间充质干细胞移植前3d，每天按20g／L的CCL4 2．5mL／kg体质量灌胃饲养，首次计量加倍，标记的骨髓间充质干细胞从尾静脉移植。尾静脉移植对照组：移植前正常饲养，标记的骨髓间充质干细胞从尾静脉移植。混合组：前4组条件下，各设2只大鼠移植未标记的骨髓间充质干细胞；另设CCL4喂养3d和正常喂养大鼠各2只，不行骨髓间充质干细胞移植。③于移植后的第3，7天，通过荧光定量     

转染癌基因的骨髓基质干细胞体外分化特征

目的:观察转染癌基因的骨髓基质干细胞在体外分化情况,为肝细胞癌的细胞源研究提供实验依据。方法:实验于2003-05/2004-06在南方医科大学药理教研室实验室完成。①两步法获取大鼠肝细胞,梯度离心法分离大鼠骨髓基质干细胞。②单基因转染是单独将c-myc或K-ras癌基因瞬时转染大鼠骨髓基质干细胞,6孔培养板中培养,24h后荧光显微镜下观察骨髓基质干细胞转染结果。双基因转染步骤相同,只是将c-myc和K-ras癌基因同时转染大鼠骨髓基质干细胞。③c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组常规培养,加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养基,于37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱培养,每24h半量更换培养液。④c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组将已转染癌基因的骨髓基质干细胞,置于叠加的培养板半透膜的上方(细胞密度均为1×105个/cm2),再将肝细胞置于半透膜的下方(每孔细胞密度为3×105/cm2)进行共培养,其余步骤同常规培养。⑤通过反转录聚合酶式反应和细胞免疫组化检测骨髓基质干细胞分化情况。结果:①癌基因转染24h骨髓基质干细胞检测结果:单独转染c-myc或K-ras癌基因的细胞,其绿色荧光蛋白呈均匀一致分布;双基因转染的细胞,绿色荧光蛋白呈点片状分布。②各组骨髓基质干细胞向肿瘤细胞分化检测结果:c-myc癌基因转染组、K-ras癌基因转染组、双癌基因转染组的骨髓基质干细胞,均未向肿瘤细胞分化;c-myc癌基因转染 肝细胞组、K-ras癌基因转染 肝细胞组、双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞,均向肝细胞癌发展;空白对照组骨髓基质干细胞细胞均为阴性。此外,双癌基因转染 肝细胞组的骨髓基质干细胞分化增殖迅速,反转录聚合酶式反应和免疫组化检测发现,培养第7天出现甲胎蛋白表达,并迅速增加,而第7天出现的白蛋白和细胞角蛋白18表达迅速减弱,第14天消失。结论:转染癌基因的骨髓基质干细胞,在向肝细胞诱导的条件下,部分癌基因可以使干细胞分化为肝癌细胞;多癌基因转染时,更易于使干细胞分化为肝癌细胞。     

携带小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的构建及对 RAW264.7 细胞增殖的影响

目的 构建小鼠 Krüppel 样因子 4（KLF4）慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7 细胞株。方法 采用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增目的基因 KLF4 后,构建重组质粒 pLVX-KLF4,并 通过 PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定。重组质粒与 pSPAX2、pMD2.G 辅助质粒通过 Lipofectamine® 3000 共转 染 293T 细胞,包装病毒并测定病毒滴度。将获得的慢病毒感染 RAW264.7 细胞,实时定量 PCR 法检测 KLF4 mRNA 的表达。分选流式细胞仪分选 GFP 阳性 RAW264.7 细胞。流式细胞术检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞周期的影响。 EdU 法检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞增殖的影响。结果 经 PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠 KLF4 基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR 证实 Lenti-KLF4 感染的 RAW264.7 细胞中 KLF4 mRNA 表达高于未感染的 对照组 RAW264.7 细胞（P＜0.05）。初次浓缩后测定小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的滴度为 2.05×108 TU/mL。分选出 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞。KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞周期变化显示为 S 期延长,G0/G1 期缩短。EdU 检 测显示 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞增殖活性增高。结论 成功构建了 KLF4 的慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞株,KLF4 过表达促进了 RAW264.7 细胞的增殖。