微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向心肌样分化及其移植的可行性

背景：骨髓间充质干细胞通过再生心肌细胞在心肌损伤性疾病治疗方面突显较大潜力,但目前仍未找到一种理想的诱导方式。 目的：探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的潜能,并分析其移植的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察及体内移植实验,于2008-07/2009-02在重庆市神经病学重点实验室完成。 材料：清洁级二三月龄健康雄性SD大鼠16只,购自重庆医科大学实验动物中心 方法：孔径0.4 µm的transwell小室,置入培养板孔构成双室培养体系。取SD大鼠1只,Ficoll密度梯度+贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,组织块法分离培养微血管内皮细胞。培养瓶中融合至50%生长良好的微血管内皮细胞,每3 d更换培养液,收集更换液过滤即制成条件培养液。体外实验分为4组：直接接触组、双室培养组、条件培养液组、培养液对照组,观察各种培养条件对骨髓间充质干细胞的心肌诱导效应。取SD大鼠15只建立心肌梗死模型,冠状动脉结扎后第6天任取1只大鼠明确心肌梗死建模是否成功,其余大鼠随机分为细胞移植组8只、模型对照组6只。造模1周后,细胞移植组将在双室模型中与微血管内皮细胞共培养5 d的骨髓间充质干细胞调整浓度为109 L-1,通过鼠尾静脉缓慢注入1 mL,模型对照组予等量DMEM,观察4周。 主要观察指标：体外实验通过免疫荧光染色检测心肌标志物TnI、α-actin的表达;采用心电图、荧光镜检、苏木精-伊红染色等方式评价体内移植的安全性及可行性。 结果：直接接触组、双室培养组、条件培养液组部分骨髓间充质干细胞心肌标志物TnI、α-actin阳性表达,荧光镜下胞浆发绿光(或红光),前2组诱导率基本相似(P > 0.05),且均明显高于条件培养液组(P < 0.05);培养液对照组细胞未向心肌样细胞分化。细胞移植后两组大鼠均存活良好,未出现死亡及恶性心律失常,4周后细胞移植组心脏冰冻切片荧光镜检显示心肌内有少量胞核蓝染的细胞,提示干细胞成功归巢,结合苏木精-伊红染色,归巢细胞位于心肌梗死灶周边区域,呈单个或小团聚集;而模型对照组心肌切片未见胞核蓝染的细胞。 结论：微血管内皮细胞能够通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植入大鼠体内是安全的,可成功归巢到大鼠心肌梗死灶及周边区。     

微血管内皮细胞诱导骨髓间充质干细胞向心肌样分化及其移植的可行性

背景:骨髓间充质干细胞通过再生心肌细胞在心肌损伤性疾病治疗方面突显较大潜力,但目前仍未找到一种理想的诱导方式.目的:探讨微血管内皮细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的潜能,并分析其移植的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察及体内移植实验,于2008-07/2009-02在重庆市神经病学重点实验室完成.材料:清洁级二三月龄健康雄性SD大鼠16只,购自重庆医科大学实验动物中心方法:孔径0.4 μm的transwell小室,置入培养板孔构成双室培养体系.取SD大鼠1只,Ficoll密度梯度+贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,组织块法分离培养微血管内皮细胞.培养瓶中融合至50%生长良好的微血管内皮细胞,每3 d更换培养液,收集更换液过滤即制成条件培养液.体外实验分为4组:直接接触组、双室培养组、条件培养液组、培养液对照组,观察各种培养条件对骨髓间充质干细胞的心肌诱导效应.取SD大鼠15只建立心肌梗死模型,冠状动脉结扎后第6天任取1只大鼠明确心肌梗死建模是否成功,其余大鼠随机分为细胞移植组8只、模型对照组6只.造模1周后,细胞移植组将在双室模型中与微血管内皮细胞共培养5 d的骨髓间充质干细胞调整浓度为109L-1通过鼠尾静脉缓慢注入1 mL,模型对照组予等量DMEM,观察4周.主要观察指标:体外实验通过免疫荧光染色检测心肌标志物Tnl、α-actin的表达;采用心电图、荧光镜检、苏木精-伊红染色等方式评价体内移植的安全性及可行性.结果:直接接触组、双室培养组、条件培养液组部分骨髓间充质干细胞心肌标志物Tnl、α-actin阳性表达,荧光镜下胞浆发绿光(或红光),前2组诱导率基本相似(P>0.05),且均明显高于条件培养液组(P<0.05);培养液对照组细胞未向心肌样细胞分化.细胞移植后两组大鼠均存活良好,未出现死亡及恶性心律失常,4周后细胞移植组心脏冰冻切片荧光镜检显示心肌内有少量胞核蓝染的细胞,提示干细胞成功归巢,结合苏木精-伊红染色,归巢细胞位于心肌梗死灶周边区域,呈单个或小团聚集;而模型对照组心肌切片未见胞核蓝染的细胞.结论:微血管内皮细胞能够通过旁分泌途径诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,经微血管内皮细胞预处理过的骨髓间充质干细胞移植入大鼠体内是安全的,可成功归巢到大鼠心肌梗死灶及周边区.     

肝脏局灶性病变磁共振与多排螺旋CT临床应用效果分析

目的对肝脏局灶性病变磁共振与多排螺旋CT临床应用效果进行分析。方法选取在我院2017年3月至2018年12月的肝脏性疾病患者80例,将其随机分为两组,对照组和研究组,对照组采用多排螺旋CT诊断的方式,研究组采用磁共振诊断的方式,对两组诊断是否为肝脏局灶性病变、病变种类以及肿瘤性质的准确率进行比较。结果研究组诊断为肝脏局灶性病变、病变种类以及肿瘤性质的准确率显著优于对照组(P0.05)。结论在对肝脏性疾病患者诊断是否为肝脏局灶性病变、病变种类以及肿瘤性质的准确率时,应该采用磁共振的诊断方式,诊断的准确率较高。     

心肌梗死后单个核细胞促间充质干细胞迁移的作用

背景：心肌梗死后间充质干细胞定向心肌迁移的机制尚不甚明了。 目的：探讨基质细胞衍化因子1和趋化因子受体4生物轴在心肌梗死后单个核细胞促间充质干细胞迁移中的作用。 方法：分离培养SD乳鼠心肌细胞及SD大鼠间充质干细胞。12只SD大鼠其中6只建立心肌梗死模型,6只行假手术处理,分离循环血单个核细胞,采用三室共培养模型,分别将 DAPI 标记的间充质干细胞、心肌细胞和单个核细胞培养于三室模型的上、中、下室内,设立心肌梗死组、趋化因子受体4受体阻断剂AMD3100组、假手术组和空白对照组。培养48 h后,荧光显微镜下观察并比较迁移细胞数目,免疫细胞化学和免疫荧光染色分别检测心肌细胞基质细胞衍化因子1和迁移细胞趋化因子受体4的表达。 结果与结论：除空白对照组外,各组中室内均可见迁移细胞,迁移细胞阳性表达趋化因子受体4,心肌梗死组迁移细胞数目显著高于其他各组,加入肿瘤坏死因子α中和抗体和趋化因子受体4受体阻断剂AMD3100后,迁移细胞数目明显减少（P＆lt;0.05）。各组心肌细胞阳性表达基质细胞衍化因子1,心肌梗死组及AMD3100组心肌细胞基质细胞衍化因子1表达灰度值显著高于假手术组及空白对照组（P＆lt;0.05）。表明基质细胞衍化因子1/趋化因子受体4生物轴在心肌梗死后大鼠单个核细胞促间充质干细胞向心肌细胞迁移中发挥了一定作用。     

阿托伐他汀对冠心病患者心室重塑及其相关血清指标的影响

目的研究阿托伐他汀对冠心病患者心室重塑及其相关血清指标的影响。方法选取2011年12月~2013年6月86例冠心病患者为研究对象,将其随机分为对照组(常规冠心病治疗组)43例和观察组(常规治疗加阿托伐他汀组)43例,然后将两组患者治疗前和治疗后4、8及12周的心室重塑指标及其血清相关指标进行检测和比较。结果观察组治疗后4、8及12周时的心室重塑指标均好于对照组,且血清相关指标的检测水平也均低于对照组(均P<0.05);两组患者治疗后4、8及12周时,血清检测指标间均有显著性差异(P<0.05)。结论阿托伐他汀对冠心病患者心室重塑及其相关血清指标的影响较大,有助于改善冠心病患者的疾病状态。     

氧化低密度脂蛋白诱导人淋巴细胞活化及雷公藤多甙的干预作用观察

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导病理免疫的可能机制及雷公藤多甙(TG)的干预作用.方法 采集6例健康志愿者外周静脉血,密度梯度离心法分离单个核细胞,然后分为5组进行体外孵育:ox-LDL组(ox-LDL终浓度1mg/L)、TG高剂量组(TG和ox-LDL终浓度分别为1.5mg/L和1mg/L)、TG中剂量组(TG和ox-LDL终浓度均为1mg/L)、TG低剂量组(TG和ox-LDL终浓度分别为0.5mg/L和1mg/L)、对照组(不加ox-LDL和TG).采用流式细胞术检测各种淋巴细胞亚群比例,ELISA法检测细胞培养上清液中人氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)浓度.结果 对照组T细胞、Th细胞、Tc细胞和Treg细胞的活化率分别为2.04%±0.54%、1.12%±0.18%、1.58%±0.77%和13.04%±7.84%.与对照组比较,ox-LDL组T细胞活化率(4.37%±1.10%)、Th细胞活化率(2.61%±0.88%)和Tc细胞活化率(3.64%±1.96%)均明显升高(P<0.05),Treg细胞活化率(17.29%±9.88%)差异无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,ox-LDL组Tc细胞活化率升高幅度(2.07%±1.93%)与Th细胞活化率升高幅度(1.49%±0.74%)差异无统计学意义(P>0.05).TG中剂量组T细胞、Th细胞和Tc细胞的活化率分别为1.71%±0.48%、1.38%±0.22%和1.56%±0.28%,均显著低于ox-LDL组(P<0.05),而与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),Treg细胞活化率(20.01%±11.41%)显著高于对照组(P<0.05),与ox-LDL组比较差异无统计学意义(P>0.05).与ox-LDL组比较,TG中剂量组Tc细胞活化率降低幅度(2.09%±1.83%)与Th细胞活化率降低幅度(1.23%±0.95%)比较差异无统计学意义(P>0.05).ox-LDL组OLAb浓度(443.82±132.46μg/L)显著高于对照组(183.86±88.49μg/L,P<0.05).TG高、中、低剂量组OLAb浓度(分别为183.89±101.64、222.51±62.71、249.23±84.95μg/L)与对照组比较差异无统计学意义,且三个剂量组间差异也无统计学意义(P>0.05),但与ox-LDL组比较,三个剂量组OLAb浓度均明显降低(P<0.05).结论 人淋巴细胞受ox-LDL刺激后能产生自身免疫样反应,TG对这种反应具有调节作用.     

心肌梗死大鼠体外培养心肌组织对间充质干细胞迁移的作用

背景：间充质干细胞具有改善心脏功能的潜力,间充质干细胞移植后向心脏归巢的机制尚不完全清楚。 目的：观察心肌梗死大鼠体外培养的心肌组织对间充质干细胞迁移的作用及可能机制。 方法：建立大鼠心肌梗死模型,培养大鼠心脏组织块,密度梯度离心及贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,24只SD大鼠随机抽签法分为心肌梗死组、假手术组及正常对照组。假手术组只穿线不结扎,正常对照组不做任何处理。荧光染料DAPI标记间充质干细胞,利用transwell模型进行共培养,共培养48 h。荧光镜下计数迁移细胞数,CD34/CD44免疫细胞化学染色进行迁移细胞定性,免疫荧光检测迁移细胞CXCR4的表达情况,心脏组织切片行免疫组织化学染色检测基质细胞衍生因子1的表达情况并进行平均吸光度分析。 结果与结论：心肌梗死组单位视野迁移细胞数显著高于假手术组(P < 0.05),正常对照组未见迁移细胞。免疫细胞化学染色显示迁移细胞CD44阳性而CD34阴性,符合间充质干细胞特点,其膜受体CXCR4阳性表达。心肌梗死组及假手术组心脏切片基质细胞衍生因子1阳性表达,正常对照组心肌组织不表达基质细胞衍生因子1。心肌梗死组心脏组织基质细胞衍生因子1平均吸光度显著高于其他组别(P < 0.05)。提示心肌梗死后大鼠心脏组织能促进间充质干细胞迁移,这一效应的实现可能与基质细胞衍生因子1-CXCR4轴的作用有关。