芒柄花素抑制RANKL诱导破骨细胞分化的实验研究

目的:建立RANKL诱导的破骨细胞体外研究模型,阐述活血化瘀中药鸡血藤有效组分芒柄花素(formononetin,FO)调控小鼠骨髓单核-巨噬细胞(BMMs)向破骨细胞分化和功能的影响,探讨其抑制破骨细胞分化的分子机制。方法:取20只4~6周龄清洁级C57/BL6小鼠,雌雄各10只,体重(20±2)g,无菌条件下分离出股骨和胫骨内BMMs,用α-MEM培养基进行体外培养和增殖。BMMs在加入M-CSF和不同浓度的芒柄花素(5~50?滋M)分别培养4 d后进行细胞增殖与毒性的CCK8检测。将生长状态良好的BMMs依次加入M-CSF和RANKL诱导破骨细胞分化,对照组无特殊处理,DMSO对照组加入DMSO溶剂,各观察组分别加入不同浓度芒柄花素(1~20?滋M),分别进行培养6 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,对破骨细胞的进行计数和统计分析。分别在破骨细胞培养的1、2 d收取总蛋白和磷酸化蛋白,Western blot检测破骨细胞分化中关键转录因子NFATc1和c-Fos的表达以及磷酸化蛋白ERK表达;在培养的4 d提取RNA,Real-Time PCR检测破骨细胞相关基因CTSK、TRAP、MMP9和Car2的活性。结果:CCK8检测结果提示芒柄花素能够剂量依赖性地抑制BMMs的活性,在≤20?滋M的安全浓度范围内对BMMs细胞生长无明显毒性效应(P=0.278>0.05)。TRAP染色结果发现芒柄花素在(1~20?滋M)浓度范围内能够剂量依赖性的抑制破骨细胞的生成,尤其是10?滋M能够显著抑制破骨细胞的生成(P=0.000<0.05)。Western blot检测表明芒柄花素(10?滋M)能显著抑制破骨细胞分化关键蛋白NFATc1和c-Fos的表达,而对磷酸化蛋白ERK的表达未见明显的作用。在破骨细胞功能上,Real-Time PCR检测芒柄花素(10?滋M)能著抑制破骨细胞功能相关基因CTSK(P=0.000<0.05)、TRAP(P=0.000<0.05)、MMP9(P=0.000<0.05)和Car2(P=0.000<0.05)的表达。结论:鸡血藤有效组分芒柄花素能够抑制原代骨髓单核-巨噬细胞向破骨细胞增殖和分化,并下调破骨细胞骨吸收功能相关蛋白和基因的表达,可能是其防治股骨头坏死中骨破坏及塌陷的机制之一。     

围术期加速康复外科模式对超高龄患者股骨颈骨折预后的效果

目的 分析围术期加速康复外科(ERAS)模式对超高龄患者应用人工股骨头置换术治疗股骨颈骨折预后的效果.方法 选取行人工股骨头置换术治疗股骨颈骨折的超高龄患者118例为研究对象,随机分为对照组(n=59)和试验组(n=59).对照组进行常规手术评估及术前准备,试验组围术期以ERAS模式干预.比较2组围术期相关指标及术后并发症发生情况.采用视觉模拟评分法(VAS)、Harris髋关节功能评分及欧洲五维健康量表(EQ-5D)评估患者疼痛程度和术后1、3个月髋关节功能及生活质量.结果 试验组患者48 h内手术率高于对照组,输血率、住院费用低于对照组,术后进食时间、离床活动时间、住院时间短于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).术后3d,试验组VAS评分低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);术后1个月,试验组Harris评分高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).试验组并发症总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ERAS模式应用于超高龄患者股骨颈骨折人工股骨头置换术效果较好,可降低术后并发症发生率,有效促进患者术后恢复.     

Foxc2基因修饰骨髓间充质干细胞修复实验性兔股骨头坏死

BACKGROUND: Core decompression can delay early osteonecrosis of the femoral head, but cannot completely repair the necrotic femoral head. Eventually, femoral head collapse, even bone necrosis, will occur. OBJECTIVE: To explore the curative effect of implantation of gelatin sponge carrying Foxc2-transfected bone marrow mesenchymal stem cells on the repair of experimental femoral head necrosis in rabbits. METHODS: Forty New Zealand white rabbits were selected, and femoral head necrosis models were prepared successfully in 24 of 40 rabbits. Then, model rabbits were randomized into four groups: blank control group (n=4) with no treatment, core decompression group (n=4), GFP group (n=8) subjected to core decompression and implantation of gelatin sponge carrying GFP-transfected bone marrow mesenchymal stem cells, and Foxc2 group (n=8) subjected to core decompression and implantation of gelatin sponge carrying Foxc2-transfected bone marrow mesenchymal stem cells. At 1, 2, 4 weeks after implantation, ELISA was used to detect Foxc2 protein levels in the transplanted region. At 4, 8, 12 weeks after implantation, MRI scan of the hip was performed, and femoral head tissues were taken and sliced into sections for hematoxylin-eosin staining to observe bone growth. At 12 weeks after implantation, histomorphometry measurement and transmission electron microscope observation were carried out. RESULTS AND CONCLUSION: At 1, 2, 4 weeks after implantation, Foxc2 was highly expressed in the femoral head in the Foxc2 group, which was significantly higher than that in the GFP group. At 4, 8, 12 weeks, only a few of new bone formed in the core decompression group and GFP group; at 12 weeks, fibrous tissues formed in the decompression channel. New bone formation was evident in the Foxc2 group, and at 12 weeks, the necrotic region was repaired completely. MRI findings showed normal femoral head morphology and signals in the Foxc2 group at 12 weeks, but there were decreased signals of the femoral head in the core decompression group and GFP group. These findings indicate that Foxc2-transfected bone marrow mesenchymal stem cell transplantation via core decompression has good curative effects on experimental femoral head necrosis in animals.       

椎体成形术治疗胸腰椎骨质疏松性骨折骨不连

目的探讨经皮椎体成形术(PVP)和经皮椎体后凸成形术(PKP)治疗胸腰椎骨质疏松性骨折骨不连的疗效。方法对22例胸腰椎骨质疏松性骨折骨不连患者行PVP和PKP治疗。观察手术前后椎体前缘高度、矢状位Cobb角、疼痛VAS评分及ODI。结果 22例患者均获得随访,时间11～35个月。1例发生骨水泥渗漏至椎体上一椎间盘,但无明显不适。骨折椎体前缘高度(mm):术前、术后3 d、末次随访分别为15. 28±3. 38、20. 66±3. 02、19. 13±2. 91;椎体矢状位Cobb角(°):术前、术后3 d、末次随访分别为18. 2±0. 6、11. 2±0. 4、11. 6±0. 6;VAS评分(分):术前、术后3 d、末次随访分别为7. 5±0. 8、2. 3±0. 7、2. 4±0. 7;ODI(%):术前、术后3 d、末次随访分别为74. 3±3. 6、32. 1±3. 3、30. 5±2. 9;各项指标术后3 d、末次随访较术前明显改善(P 0. 05);末次随访时与术后3 d比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 PVP和PKP均能够有效治疗胸腰椎骨质疏松性骨折骨不连,但对于椎体高度恢复不满意或椎体严重压缩、后壁破裂并有骨块凸向椎管的患者可使用PKP。     

中药脊髓康对脊髓损伤大鼠Nogo-NgR基因表达的影响

目的 :观察中药脊髓康对急性大鼠脊髓损伤后Nogo-A,Ng R基因表达的影响,探讨其对急性脊髓损伤的治疗保护作用及机制。方法:180只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、强的松组及脊髓康高、中、低剂量组,每组30只。假手术组:切除T10节段椎板,不损伤脊髓;其余组采用改良Allen法建立脊髓损伤模型。强的松组:术后至处死前每日灌胃强的松0.06 g/kg,首次在术后30 min给药。脊髓康高、中、低剂量组:在同一时间分别给予脊髓康,每日50、25、12.5 g/kg。术后3、7、14 d分批处死动物,取损伤节段脊髓9例,分别利用Western Blot及Real-time PCR检测脊髓组织中Nogo-A、Ng R蛋白及m RNA表达水平。结果:假手术组在各时间点Nogo-A及Ng R的表达维持在基础水平。与模型组比较,各时间点假手术组、强的松组及脊髓康中剂量组Nogo-A、Ng R蛋白表达差异均有统计学意义,脊髓康高、低剂量组差异无统计学意义。术后3 d,各治疗组Nogo-A、Ng R m RNA水平均低于模型组;术后7 d,模型组Nogo-A、Ng R m RNA水平升至最高,14 d时有所下降,但仍高于其他治疗组,其中强的松、脊髓康中剂量组效果最显著,两者之间差异无统计学意义。结论:在Allen急性大鼠脊髓损伤后,脊髓康能调节Nogo-A及Ng R基因表达,激活Nogo-Ng R信号通路,促进脊髓损伤后神经细胞再生。     

有限固定结合外固定支架治疗Ⅲ型Pilon骨折的病例对照研究

目的：通过对33例Rüedi-Allgower Ⅲ型Pilon骨折的不同治疗方法进行疗效分析,探讨最佳治疗方案。方法：对2009年10月至2012年1月对采用3种治疗方法（单纯石膏外固定术10例,胫骨远端解剖钢板内固定术11例及有限固定结合外固定支架12例）治疗的Ⅲ型Pilon骨折患者进行回顾性分析,对其治疗效果进行综合评定和分析。单纯石膏外固定组男5例,女5例;年龄24～61岁;受伤至治疗时间4 h～15 d;高处坠落伤3例,车祸伤4例,2例摔伤,其他伤1例。胫骨远端解剖钢板内固定组男7例,女4例;年龄21～64岁;受伤至治疗时间为3 h～12 d;高处坠落伤4例,车祸伤5例,摔伤1例,其他伤1例。有限固定结合外固定支架组男7例,女5例;年龄23～67岁;受伤至治疗时间5 h～11 d;高处坠落伤4例,车祸伤6例,摔伤1例,其他伤1例。主要观察和分析指标包括：①骨折复位的影像学表现,观察骨折对位对线情况及关节面是否平整等;②根据Bourne踝关节功能评定标准对最近一次随访的病例进行踝关节功能评分;③患者早期并发症（皮肤坏死、感染、骨折再移位及行走痛）和晚期并发症（骨折延迟愈合、畸形愈合、创伤性关节炎、关节僵硬及肌肉萎缩）的发生率。结果：所有患者获随访,时间8个月～3年,有限固定结合外固定支架组及胫骨远端解剖钢板内固定组解剖复位分别为7例和8例,多于单纯石膏外固定组（2例）.术后随访踝关节功能评分：有限固定结合外固定支架组优8例,良3例,差1例;单纯石膏外固定组优3例,良4例,差3例;胫骨远端解剖钢板内固定组优5例,良4例,差2例;有限固定结合外固定支架治疗组疗效最佳。有限固定结合外固定支架组骨折早期并发症和晚期并发症的发生率低于其他两组。结论：有限固定结合外固定支架治疗Ⅲ型Pilon骨折能较好地恢复踝关节功能,减少并发症的发生,可作为首选治疗方法。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的时效性分析

目的：观察脊髓损伤后不同时间点骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）移植治疗后大鼠行为学变化、脊髓的病理改变及脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor,BDNF）和神经生长因子（nervegrowthfactor,NGF）表达变化,探讨BMSCs的最佳移植时间。方法：80只健康成年SD大鼠随机分为8组,每组10只。A组为假损伤组,暴露胸10段脊髓但不造成冲击伤,B、C、D、E、F、G、H组以改良Allen法建立脊髓损伤模型。造模成功后,C、D、E、F、G、H组分别于损伤后0h、6h、24h、3d、5d和7d,将lxl0。体外培养的BMSCs用微量注射器注入于脊髓损伤局部,B组为单纯造模组,用等量细胞培养液代替。各组分别于损伤后1、2、4周进行脊髓运动功能BBB（Basso,Beattie,Bresnahan）运动学评分;分别取各组脊髓损伤组织0．5cm,制作HE染色病理切片,观察其形态学改变;Elisa法检测各组大鼠脊髓BDNF和NGF表达情况。结果：假手术组1、2、4周大鼠脊髓功能BBB评分均明显高于其余7组（P〈0．01）;术后l周细胞移植各组评分与单纯造模组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;术后2周和4周细胞移植各组评分高于单纯造模组（P〈0．05）;损伤后2周BBB评分从高到低依次为F、E、G、D、H、C组,但6组组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;损伤后4周BBB评分,F组与其余5组（C,D,E,G,H组）比较差异有统计学意义（P〈0．05）,但其余5组组间差异无统计学意义（P〉O．05）。EUSA检测结果显示,F组BDNF和NGF含量均高于其他7组（P〈0．05）。大鼠脊髓标本切片HE染色,假手术组脊髓组织结构完整清楚,无中性粒细胞浸润;其余7组局部组织水肿明显,灰白质交界处模糊,周围可见不同程度胶质细胞增生及炎细胞浸润。结论：大鼠脊髓损伤后同种异体BMSCs移植对脊髓功能恢复有一定疗效,损伤后3d可能是BMSCs最佳移植时间。     

桡骨头骨折的临床研究进展

目的：对桡骨头骨折不同的治疗方法及结果进行综述,寻求一种合理、有效的桡骨头骨折的治疗方法。方法：通过查阅近十年的国内外参考文献,对各种方法进行评估。结果：桡骨头骨折的临床分型不同其选择的治疗方法及效果也不同。结论：对桡骨头骨折应尽量手术或非手术方法恢复其正常解剖关系,保持前臂矩形框架生物力学的稳定。     

锁定钢板联合玻璃酸钠治疗胫骨平台骨折34例疗效观察

目的探讨锁定钢板内固定术联合玻璃酸钠膝关节腔内注射治疗胫骨平台骨折的临床疗效。方法回顾性分析34例采用锁定钢板内固定术＋玻璃酸钠膝关节腔内注射治疗胫骨平台骨折患者的临床资料。结果患者术后伤口均一期愈合,无皮肤坏死、神经血管损伤及深部感染等并发症发生;术后随访9～24个月,骨折均获骨性愈合,愈合时间平均5个月;Rasmussen膝关节功能评分结果显示,疗效优24例,良7例,可3例,优良率91．2％。结论锁定钢板内固定术联合玻璃酸钠膝关节腔内注射治疗胫骨平台骨折固定可靠,可有效改善患膝关节功能,临床疗效满意。     

Nogo-A在脊髓损伤大鼠脊髓组织中的动态表达

目的:观察大鼠脊髓损伤后神经生长抑制因子Nogo-A在脊髓组织中的动态表达变化,探讨Nogo-A蛋白在神经再生过程中的意义和作用。方法:选用108只SD大鼠随机分成正常组、假手术组和模型组,每组36只,A组不做任何处理,B组咬除T_9-T_(11)棘突及椎板,避免损伤脊髓;C组按照改良Allen法造模。分别于干预后24h、第3天、第7天、第14天处死大鼠,每组9只,以免疫组化及Western Blot检测各组大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达变化,以荧光定量PCR检测Nogo-A mRNA表达变化。结果:正常组、假手术组各时间点Nogo-A蛋白和mRNA无显著变化(P0.05)。模型组在损伤后24h Nogo-A蛋白和mRNA表达较低,3d后下降至最低,7d后迅速上升达到高峰,至14d逐渐下降,但仍高于假手术组;与假手术组比较,模型组在损伤后7d、14d,Nogo-A蛋白和mRNA表达均明显增高,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:大鼠脊髓损伤后,Nogo-A蛋白在早期一过性下降后可持续保持高水平表达,可能是造成脊髓损伤后中枢神经系统神经再生困难的重要原因之一。