CRE对多粘菌素B的敏感性及两种检测方法的差异

目的采用两种不同方法分析耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)对多粘菌素B的敏感性,为实验室选择药敏方法和临床合理用药提供依据。方法收集昆明医科大学第一附属医院2018年1—12月分离的230株CRE菌株,分别采用E-test法和微量肉汤稀释(BMD)法检测CRE对多粘菌素B的敏感性,分析两种药敏方法之间的差异性。结果菌株主要来源以痰为主,占70.87%(163株),其次是血(33株,14.35%)和分泌物(15株,6.52%),病原菌分布以肺炎克雷伯菌为主(205株)。CRE菌株E-test方法的敏感率为96.52%,耐药率为3.48%;BMD法的敏感率为95.65%,耐药率为4.35%。两种方法的基本一致率为95.65%,分类一致率为99.13%,极重大误差为0.87%。结论多粘菌素B对CRE有较好的抗菌活性,E-test法操作简便,和BMD法一致性好,可应用于临床常规药敏试验。     

荧光PCR快速诊断21-三体综合征的研究

目的探讨用D21S1919、D21S263、D21S1914、D21S1255等4个杂合度较高的STR位点的荧光PCR诊断21-三体综合征的可行性。方法用荧光PCR扩增4个STR位点的DNA片段,分别检测了100例正常对照和6例患者,并将结果与传统的细胞遗传学方法进行对比,以验证该方法的有效性。结果在正常对照杂合子样本中,两个等位基因的峰高比值接近于1:1;在21-三体患者杂合子样本中,等位基因的峰高比值接近于2:1或1:1:1。结论荧光PCR是一种快速、准确的检测方法,而且只需要极少量的模板原料。这种方法可以用于21-三体综合征的无创、快速分子诊断。     

1个结蛋白基因新突变致扩张型心肌病家系的临床特点及遗传分析

摘要:目的对1 个扩张型心肌病的家系进行遗传学分析,探讨其致病性基因变异位点,为遗传咨询提供数据支持。方法收集该家系现存成员的临床资料和外周血,采用外周血DNA提取试剂盒提取白细胞基因组DNA,采用全外显子组二代测序技术筛选出与扩张型心肌病相关的可疑致病性变异,用Sanger 测序对变异位点进行验证,结合家系共分离分析及多种生物信息学方法(如UniProt、PolyPhen-2和Mutation taster 、ANTHEPROT PyM0L等)综合验证和预测该变异的有害性,并根据ACMG指南对该变异位点进一步解读。结果该扩张型心肌病家系符合常染色体显性遗传模式,患病成员均携带结蛋白基因(desmin,DES) ,是未曾报道过的一种杂合错义新突变DES c. 140G>T( p.Ser471le)。生物信息学预测结果显示,该突变可改变蛋白质的二级结构,增加其疏水性并使其抗原性下降，还可使该位点原有的氢键和潜在的磷酸化位点丢失。根据ACMG指南可将该突变解读为可能致病的变异。结论新发现的 DES基因c.140G>T(p.Ser47le)变异可能是该常染色体显性遗传家系的致病原因,该家系患者出现临床表型的时间相对较早且预后不良,突变的检测有助于患者早期诊断与个性化的临床管理及治疗。     

296例成人大肠埃希菌血流感染的危险因素及预后分析

目的探讨成人产超广谱β内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌血流感染的危险因素及对患者预后的影响。方法采用病例对照的研究方法,回顾性收集2017年1月—2019年8月大肠埃希菌血流感染患者296例,其中产ESBL大肠埃希菌血流感染患者191例为观察组,以同期非产ESBL大肠埃希菌血流感染患者105例为对照组,进行血流感染的危险因素分析。按预后分为预后不良组53例和好转组243例,进行预后的危险因素分析。结果296例患者检出的296株大肠埃希菌中产ESBL检出率为64.5%。所有菌株对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、哌拉西林、四环素、氨苄西林-舒巴坦、头孢噻肟、头孢曲松和头孢哌酮的耐药率均大于60%;除碳青霉烯类、阿米卡星、甲氧苄啶-磺胺甲■唑和四环素外,产ESBL菌的耐药率均高于非产ESBL菌,差异均有统计学意义(P<0.05)。产ESBL菌感染组患者预后不良率高于非产ESBL菌感染组(21.5%比11.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示留置导尿管是产ESBL大肠埃希菌血流感染的独立危险因素。感染性休克、入住ICU、低血红蛋白血症、低白蛋白血症是影响大肠埃希菌血流感染预后的独立危险因素。结论留置导尿管是产ESBL大肠埃希菌血液感染的独立危险因素。感染性休克、入住ICU、低血红蛋白血症和低白蛋白血症是影响大肠埃希菌血流感染预后的独立危险因素,应引起重视以改善预后。     

Car-R/Ceph-S的铜绿假单胞菌OprD基因突变分析

  目的  研究对碳青霉烯类耐药而对头孢菌素敏感（carbapenem-resistant but cephalosporin-susceptible ,Car-R/Ceph-S）的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）中OprD基因的突变类型。  方法   对2021年1月至2021年3月昆明医科大学第一附属医院临床分离的10株对碳青霉烯类耐药而对头孢菌素敏感的铜绿假单胞菌进行分离培养;使用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测该表型铜绿假单胞菌中OprD基因的携带情况,并测序分析OprD基因的突变类型。  结果   10株菌株均显示出明显的OprD扩增条带,测序分析显示有以下突变类型,分别是移码突变2株、氨基酸替代突变8株、提前终止密码子2株、大片段缺失4株。  结论   对碳青霉烯类耐药而对头孢菌素敏感（Car-R/Ceph-S）的铜绿假单胞菌中OprD基因的突变类型呈多样化,点突变频率最高,还有大片段的缺失以及提前终止密码子。这些突变导致OprD结构发生改变,从而使得耐药现象的发生。     

2017年—2021年云南地区无菌体液细菌的分布特征及耐药性分析

  目的   探讨云南省无菌体液标本（不含血液）细菌的分布及耐药情况。  方法   选取2017年至2021年云南省9家三级综合医院无菌体液标本,排除同一患者重复株,使用WHONET5.6软件对药物敏感性数据进行统计分析。  结果   腹水是菌株分离率最高的标本类型,占32.7%。所有标本中共分离出5305株菌,革兰阳性菌占53.3%,分离率第一为表皮葡萄球菌;革兰阴性菌占46.7%,以大肠埃希菌为主。耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药情况二者相当。屎肠球菌对于常用抗菌药耐药率呈下降的趋势。肺炎克雷伯菌对美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为35.6%、40.3%,均高于2021年我国CHINET水平,且耐药率呈逐年升高的趋势。鲍曼不动杆菌仍保持耐多药的形式,尤其对碳青霉烯类药物耐药率高达82%。  结论  监测无菌体液病原菌来源广泛,不同菌属间碳青霉烯耐药形势严峻。仍需重点监测耐第三代头孢菌素的肠杆菌和耐碳青霉烯的肠杆菌、鲍曼不动杆菌。     

ISO15189在临床微生物学检验技术教学管理中的应用

目的探讨ISO15189质量管理体系在临床微生物学检验技术专业进修医生教学管理中的应用,以提高检验医学专业的教学质量,培养高素质、复合型检验医学专业人才,不断持续改进检验医学教学质量。方法参照国内外医学实验室广泛认可的ISO15189质量管理体系培训和管理进修医生。首先,通过鼓励教师间经验交流、参加讲课比赛,提高教学质量;鼓励教师参加相关学术会议,并参与检验新项目的开展与科研项目的申报,强化师资队伍建设。其次,完善进修医生管理制度,优化进修医生档案管理细则,定期组织培训学习,进行问题式教学和立体化教学,完善导师带教制,规范结业鉴定。结果本科室培养的进修医生工作能力均较强,临床微生物学专业教学质量得到明显提高。结论应用ISO15189质量管理体系的进修医生能够掌握ISO15189的各要素,可以发现并解决临床工作中常见的专业问题,同时具备一定的科研能力。     

胶体金免疫层析法在碳青霉烯酶检测中的价值及应用

目的 系统性评价胶体金免疫层析法在耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)碳青霉烯酶型检测中的价值及性能情况, 为实验室进行CRE碳青霉烯酶快速检测提供可靠依据。方法 对收集的70株无菌部位分离的CRE菌株同时使用PCR扩增、基 因测序和胶体金免疫层析法进行碳青霉烯酶型检测,以测序结果为参考标准,评价胶体金免疫层析法的实验室检测性能。结 果 检出碳青霉烯酶基因69株,其中KPC型49株,OXA-48型12株,IMP型1株,NDM型3株,同时检出KPC和OXA-48型2株, 同时检出OXA-48和NDM型1株,同时检出KPC和NDM型1株,未检出以上5种基因型1株。胶体金免疫层析法结果与测序结果相 比灵敏度100%,特异度97.1%。不符合2株,其中1株为测序结果同时存在KPC和OXA-48两种型,胶体金检测结果为KPC型;1 株为测序结果同时存在KPC和NDM两种型,胶体金检测结果为KPC型。结论 胶体金免疫层析法作为一种新的CRE碳青霉烯酶 型检测方法,操作简单,结果容易判读,能够短时间内检测出CRE中的产KPC、OXA-48、VIM、IMP和NDM型碳青霉烯酶的 情况,灵敏度和特异度能够满足临床需求,可作为实验室进行碳青霉烯酶型快速检测的方法,指导临床诊治CRE。     

CRE对多粘菌素B的敏感性及两种检测方法的差异

目的 采用两种不同方法分析耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）对多粘菌素B的敏感性，为实验室选择药敏方法和临床合理用药提供依据。方法 收集昆明医科大学第一附属医院2018年1—12月分离的230株CRE菌株，分别采用E-test法和微量肉汤稀释（BMD）法检测CRE对多粘菌素B的敏感性，分析两种药敏方法之间的差异性。结果 菌株主要来源以痰为主，占70.87%（163株），其次是血（33株，14.35%）和分泌物（15株，6.52%），病原菌分布以肺炎克雷伯菌为主（205株）。CRE菌株E-test方法的敏感率为96.52%，耐药率为3.48%；BMD法的敏感率为95.65%，耐药率为4.35%。两种方法的基本一致率为95.65%，分类一致率为99.13%，极重大误差为0.87%。结论 多粘菌素B对CRE有较好的抗菌活性，E-test法操作简便，和BMD法一致性好，可应用于临床常规药敏试验。