羊膜脱细胞基质的制备及其生物相容性

目的:羊膜是一种天然的细胞外基质,具有抗原性低、排异反应小特点.实验拟进行羊膜脱细胞基质的制备,观察其作为组织工程支架材料的生物相容性.方法:实验于2007-03/08在河北医科大学解剖教研室实验中心完成.实验材料:4～6周龄健康清洁级SD大鼠,体质量100～ 150 g,由河北医科大学实验动物中心提供.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.新鲜人羊膜取自石家庄市第四医院,采取前征得产妇知情同意,实验经医院伦理委员会批准.实验方法:①取新鲜人羊膜冲洗后以1%tritonX-100溶液振荡24 h,0.25%胰蛋白酶37 ℃振荡4 h,充分漂洗,冷冻干燥,环氧乙烷消毒,并进行苏木精-伊红染色和扫描电镜检测.②体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,并复合培养于羊膜脱细胞基质上,以不含细胞的培养基作为空白对照,以普通培养基培养作为阴性对照,倒置显微镜下观察生长情况,并进行苏木精-伊红检测.四甲基偶氮唑盐法测定羊膜脱细胞基质浸提掖对骨髓间充质干细胞毒性;将羊膜脱细胞基质植入SD大鼠背部皮下,检测其组织相容性.结果:①制备的羊膜脱细胞基质为白色菲薄、半透明的膜状物,柔韧性好,经苏木精-伊红和扫描电镜检测无细胞残留.苏木精-伊红染色可见羊膜表面细胞黏附生长良好,细胞伸展,形态与正常培养细胞无差异.②实验组第2、4、6、8天的吸光度值低于对照组,相对增殖率随培养时间延长而增加,平均相对增殖率为89.5%,细胞毒性评分均为1级.③皮下埋置术后动物全部成活,伤口无红肿、渗液等炎症反应,移植物均未见坏死、纤维化等.光镜下,术后1周移植物周围可见以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,羊膜卷尚完整;术后2周,淋巴细胞减少,偶见新生毛细血管;术后4周,部分移植物已经降解,基本未见淋巴细胞.结论:经去污剂和酶消化法制备的羊膜脱细胞基质生物相容性良好,是一种理想的组织工程支架材料.     

PDS Ⅱ线在治疗上肢骨折中的应用

PDS Ⅱ线是一种强度较高的可吸收缝线,我科自2000年8月至2004年12月,在一些上肢复杂的骨折中,普遍应用了此线,临床效果良好。本文通过对临床病例的回顾,总结该线的临床适应证及一些具体的应用方法。     

带锁髓内针闭合复位治疗股骨骨折的初步探讨

目的：观察用带锁髓内钉治疗股骨折的疗效。方法：1999年3月－2000年4月用带锁髓内针治疗股骨干骨折29例（31例次）。结果：所有病例术后均不用外固定，拆线后即允许扶拐下地负重行走。无切口感染，延迟愈合及骨髓炎发生，术后早期作关节锻炼，于3周左右膝关节恢复至术前活动度。结论：带锁髓内针具有适应证广、并发症少、愈合快，感染率低等优点，是治疗股骨干骨折一种较为理想的内固定方法。     

促红细胞生成素促进坐骨神经再生的实验研究

目的 探讨人重组促红细胞生成素(rh-EPO)对大鼠坐骨神经断裂后神经再生的作用.方法 选用健康雄性Wistar大鼠36只,制备大鼠左侧坐骨神经修复模型.实验动物随机分为2组,每组18只,EPO组:腹腔注射rh-EPO 3 000 U/kg;对照组:注射同体积的生理盐水.术后第4周、8周分别进行坐骨神经功能指数(SFI)、生物力学检测、组织学观察、电生理检测、有髓纤维密度密度测定、有髓纤维截面积测定.结果 术后第4周,EPO组和对照组SFI分别为-65.26±3.42和-70.83±4.12,最大抗牵拉强度分别为(3.86±0.29)N/mm2和(3.38±0.21)N/mm2,运动神经潜伏期延迟比分别为2.34±0.23和2.78±0.29,运动神经波幅恢复比分别为0.23±0.05和0.14±0.03;术后第8周,EPO组和对照组SFI分别为-51.34±2.98和-57.23±4.86,最大抗牵拉强度分别为(4.67±0.36)N/mm2和(4.13±0.32)N/mm2,运动神经潜伏期延迟比分别为1.32±0.15和1.62±0.21,运动神经波幅恢复比分别为0.41±0.09和0.26±0.07,神经纤维通过比分别为0.57±0.05和0.38±0.03,有髓纤维截面积恢复比分别为0.81±0.06和0.58±0.03,两组之间差异均有统计学意义(P＜0.05),EPO组均优于对照组.结论 rh-EPO能促进坐骨神经再生和功能恢复.

Abstract：

Objective To investigate the effect of recombinant human erythropoietin(rh-EPO) on the nerve regeneration of adult rats sciatic nerves. Methods Tirty-six healthy male Wistar rats were involved and left sciatic nerve repaired model was used.The experimental rats were divided randomly into two groups:the EPO group and the control group,18 rats in each group.rh-EPO 3 000 U/kg was injected daily into the abdominal in EPO group,and normal saline was injected into the abdominal every day after operation in control group.On 4 and 8 weeks after operation,these items were determined,the sciatic function index (SFI),biomechanics examination,histological observation,electrophysiological examination,myelinated fibers density and sectional area measurement.Results On weeks 4 after operation,the SFI of EPO group and control group were-65.26 ± 3.42 and-70.83 ± 4.12,respectively,the maximum tensile resistance were (3.86 ± 0.29)N/mm2 and (3.38 ± 0.21 )N/mm2,the delayed ratio of latency of motor nerve were 2.34 ± 0.23 and 2.78 ± 0.29,and the recovery ratio of wave amplitude were 0.23 ± 0.05 and 0.14 ± 0.03 respectively.On eight weeks after operation,the SFI of EPO group and control group were-51.34 ± 2.98 and-57.23 ± 4.86,respcetively,the maximum tensile resistance were (4.67 ± 0.36) N/mm2 and (4.13 ± 0.32) N/mm2,the delayed ratio of latency of motor nerve were 1.32 ± 0.15 and 1.62 ± 0.21,the recovery ratio of wave amplitude were 0.41 ± 0.09 and 0.26 ± 0.07,the nerve fibers cross ratio were 0.57 ± 0.05 and 0.38 ± 0.03,and the recovery ratio of sectional area of myelinated fibers were 0.81 ± 0.06 and 0.58 ± 0.03,respectively.Those items in EPO group were significantly superior to those in the control group (P ＜ 0.05 ＝.Conclusion rh-EPO can promote the injured nerve regeneration and improve the recovery of their function.     

羊膜脱细胞基质的制备及其生物相容性

目的：羊膜是一种天然的细胞外基质，具有抗原性低、排异反应小特点。实验拟进行羊膜脱细胞基质的制备，观察其作为组织工程支架材料的生物相容性。 方法：实验于2007-03/08在河北医科大学解剖教研室实验中心完成。实验材料：4～6周龄健康清洁级SD大鼠,体质量100～ 150 g，由河北医科大学实验动物中心提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。新鲜人羊膜取自石家庄市第四医院，采取前征得产妇知情同意，实验经医院伦理委员会批准。实验方法：①取新鲜人羊膜冲洗后以1%tritonX-100溶液振荡24 h，0.25%胰蛋白酶37 ℃振荡4 h，充分漂洗，冷冻干燥，环氧乙烷消毒，并进行苏木精-伊红染色和扫描电镜检测。②体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，并复合培养于羊膜脱细胞基质上，以不含细胞的培养基作为空白对照，以普通培养基培养作为阴性对照，倒置显微镜下观察生长情况，并进行苏木精-伊红检测。四甲基偶氮唑盐法测定羊膜脱细胞基质浸提掖对骨髓间充质干细胞毒性；将羊膜脱细胞基质植入SD大鼠背部皮下，检测其组织相容性。 结果：①制备的羊膜脱细胞基质为白色菲薄、半透明的膜状物，柔韧性好，经苏木精-伊红和扫描电镜检测无细胞残留。苏木精-伊红染色可见羊膜表面细胞黏附生长良好，细胞伸展，形态与正常培养细胞无差异。②实验组第2、4、6、8天的吸光度值低于对照组，相对增殖率随培养时间延长而增加，平均相对增殖率为89.5%，细胞毒性评分均为1级。③皮下埋置术后动物全部成活，伤口无红肿、渗液等炎症反应，移植物均未见坏死、纤维化等。光镜下，术后1周移植物周围可见以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，羊膜卷尚完整；术后2周，淋巴细胞减少，偶见新生毛细血管；术后4周，部分移植物已经降解，基本未见淋巴细胞。 结论：经去污剂和酶消化法制备的羊膜脱细胞基质生物相容性良好，是一种理想的组织工程支架材料。     

lncRNA ANCR调节骨质疏松大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制

目的探讨lncRNA ANCR调节骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠脂肪源性干细胞分化成骨细胞及对Wnt信号通路的作用机制。方法将lncRNA ANCR siRNA慢病毒载体及慢病毒空载体分别转染至脂肪源性干细胞,分为siRNA组、空载体组、干细胞组。分别通过碱性磷酸酶染色观察ALP染色效果、Western blot法检测Wnt/β-catenin蛋白水平、茜素红染色实验检测成骨染色效果、免疫组化法检测Wnt/β-catenin信号阳性表达的差异性。结果与空载体组、干细胞组相比较,siRNA组细胞中ALP染色显著加深(P均0.05),成骨染色更为显著(P均0.05);与空载体组,干细胞组相比较,siRNA组细胞Wnt/β-catenin蛋白表达显著上升(P均0.05),Wnt/β-catenin阳性数显著升高(P均0.05);空载体组与干细胞组比较,细胞中Wnt/β-catenin蛋白、ALP表达水平、Wnt/β-catenin阳性数相近,无显著差异(P0.05)。结论 lncRNA ANCR的表达水平与骨质疏松大鼠体内脂肪源性干细胞的分化存在显著相关性,下调lncRNA ANCR能够促进脂肪源性干细胞向成骨细胞分化,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin的表达有关。     

人脱细胞羊膜与体外培养大鼠血管平滑肌细胞的生物相容性

目的了解人脱细胞羊膜(HAM)的细胞相容性;观察以HAM为生长载体,复合大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)构筑组织工程膀胱的可能性。方法用物理和酶消化方法处理人羊膜,将大鼠VSMCs与HAM进行体外复合培养,分别进行组织学、相差显微镜和扫描电镜观察。将20只大鼠随机分为两组后行半膀胱切除术,实验组10只行半膀胱切除后用复合大鼠VSMCs的HAM进行修补,另外10只以单纯的HAM修补。分别于术后2、4、8周测定膀胱容量并取膀胱进行组织学观察。结果经物理和酶处理的HAM纯度高,孔隙多,胶原纤维未受损;VSMCs在HAM上可黏附生长,并能长入材料的孔隙内。应用HAM行大鼠膀胱重建术后,实验组与对照组膀胱最大容量(Volmax)比较无显著性差异。组织学观察显示,2周时HAM即已吸收降解,膀胱移行细胞和平滑肌细胞开始形成,炎性反应明显;实验组膀胱平滑肌比对照组厚且规则。4周和8周时实验组和对照组膀胱均与正常膀胱组织无明显区别。结论HAM的细胞相容性良好,不影响VSMCs的形态,作为膀胱移植物进行膀胱修补吸收降解迅速,可用做组织工程膀胱的支架材料进一步研究。     

氯化镁促进大鼠坐骨神经损伤修复的实验研究

目的：研究氯化镁是否对大鼠坐骨神经损伤修复具有促进作用。方法将60只SD大鼠随机分为3组,每组20只。制作1 cm坐骨神经缺损模型,分别以硅胶管桥接坐骨神经缺损,构成神经再生室。根据神经再生室中所注入介质不同分为：氯化镁组（MgCl2组）,神经生长因子组（nerve growth factor,NGF组）,0．9％氯化钠溶液组（ control group ,对照组）。于术后1、2、4、8周观察大鼠下肢溃疡、肌电图变化情况。并于12周测量大鼠小腿三头肌湿重。结果术后8周时,NGF组和MgCl2组的大鼠术侧后肢肌肉萎缩有不同程度恢复,僵直度有所减少,肢体及足趾伸展角度增大,而对照组的大鼠后肢肌肉萎缩无明显恢复。12周时,NGF组和氯化镁组大鼠的术侧肢肌肉外观饱满,僵直度进一步降低。而0．9％氯化钠溶液组大鼠术侧肢体僵硬度降低不明显。术后4周,2个实验组神经传导速度较对照组恢复较快,直到术后12周,仍保持较快的恢复速度,与对照组相比,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。其中NGF组恢复最快,但和MgCl2组差异无统计学意义（ P ＞0．05）。于术后12周处死动物,取双侧小腿三头肌进行称重,发现2个实验组三头肌湿重较对照组有显著恢复。 NGF组恢复最快,但和MgCl2组差异无统计学意义（ P ＞0．05）。MgCl2和NGF同样具有促进神经损伤修复的作用,其各项结果差异无统计学意义（ P ＞0．05）。结论氯化镁可促进大鼠坐骨神经损伤修复。     

膝关节前交叉韧带重建术后康复中应用本体感觉训练的效果研究

目的探讨膝关节前交叉韧带重建术后康复中应用本体感觉训练的效果。方法将前交叉韧带重建术后患者75例随机分为本体训练组(38例)和对照组(37例)。对照组采用一般的康复训练方法,本体训练组在一般康复训练方法的基础上加用本体感觉强化训练。手术后6个月进行患者位置觉测定、膝关节功能评分及关节稳定性检查。结果在被动角度重现测定中,本体训练组患侧膝的总偏差为(4.15±1.31)度,健侧膝总偏差为(3.80±1.28)度,两侧比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组患侧膝总偏差为(4.78±1.64)度,健侧膝总偏差为(3.52±1.48)度,患侧膝大于健侧膝(P<0.05)。本体训练组的Lysholm评分高于对照组(P<0.05)。2组前抽屉试验、Lachman试验及轴移试验均为阴性。结论前交叉韧带重建术后应用强化本体感觉训练对促进下肢功能恢复有重要意义。     

老年股骨粗隆间骨折内固定治疗方法分析

目的探讨不同内固定方法治疗老年股骨粗隆间骨折的疗效。方法对63例老年股骨粗隆间骨折患者分别进行动力髋螺钉、Gamma钉固定。结果随访63例,随访时间6~18个月,骨折愈合62例,总优良率为85.7%。其中动力髋加压螺钉固定39例,发生髋内翻2例,钉尖穿破股骨头并不愈合1例;Gamma钉固定24例,髋内翻1例。结论应用动力髋螺钉和Gamma钉治疗老年股骨粗隆间骨折,可取得较好疗效。