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目的: 评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的 ELISA法(抗-M2-3E ELISA)检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)IgG和IgA抗体在原发性胆汁化肝硬化(PBC)诊断中的敏感性、特异性。 方法: 分别用间接免疫荧光法(IFL)、以丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)为靶抗原的ELISA法(抗- PDC ELISA)、抗-M2-3E ELISA法检测107例PBC、31例自身免疫肝炎(AIH)、10例原发性硬化性胆管炎(PSC)、17例丙型病毒性肝炎(HCV)、29例乙型病毒性肝炎(HBV)患者和26例健康体检者。 结果: (1)107例PBC患者用IFL、抗-PDC ELISA和抗-M2-3E ELISA 3种方法检测AMA-M2 IgG的检出率分别为:87/107(81.3%)、78/107(72.9%)、97/107(90.6%)。特异性分别为98.1%、97.2%、98.3%。抗-M2-3E ELISA法AMA-M2 IgG的检出率(90.6%)显著高于IFL法(81.3%)和抗-PDC ELISA法(72.9%)(均P<0.01)。用抗-M2-3E ELISA法检测AMA-M2 IgA的检出率为59/107(55.1%),特异性为97.2%。而总体AMA-M2 IgG和/或IgA的检出率99/107(92.5%),特异性为95.2%。(2)IFL 和 抗-M2-3E ELISA的重叠度为85%,抗-M2-3E ELISA可以在超过一半的IFL阴性的患者中检出AMA-M2 IgG和/或IgA。 结论: 抗-M2-3E ELISA法具有比IFL和抗-PDC ELISA法更高的敏感性、特异性。但是,AMA-M2 IgG和IgA都不可以单独用于诊断PBC的标记。 相似文献
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人源性抗-HBc单链噬菌体抗体库的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 构建人源性单链噬菌体抗体库,为筛选人源性抗—HBc单链抗体奠定基础。方法 利用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)和噬菌体表面展示技术,直接从乙肝病毒核心抗体(抗—HBc)阳性患者淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA;合成全套人抗体可变区引物扩增抗体可变区基因,并将重、轻链可变区基因进行拼接装配成单链抗体(ScFv)基因,重组于噬菌粒载体叶pHEN1,转化抑制型大肠埃希菌E.coliTG1,以辅助噬菌体援救后,构建成人源性单链噬菌体库。结果 成功地构建了人源性抗—HBc单链噬菌体库,库容量达10^6。结论 利用RT—PCR和噬菌体表面展示技术可以成功构建人源性单链抗体库,并达到建库标准,可进一步从中筛选人源性单链抗体。 相似文献
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应答无显著差异,提示HBV基因型可能对ADV的疗效无影响. 相似文献
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60 min及术后30 min两组患者尿β2-MG和NAG水平均高于术前(均P<0.05).重型肝炎组术前血TBIL高于肝癌肝硬化组(P<0.05).重型肝炎组术后24 h、术后1周血Scr、BUN和TBIL均明显高于肝癌肝硬化组(均P<0.05).结论 重型肝炎患者在肝移植围手术期肾功能损伤较肝癌肝硬化组严重,肝移植围手术期应注意保护重型肝炎患者的肾功能. 相似文献
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目的观察护肝合剂对肝损害模型大鼠血清TGF-β1的影响及护肝合剂含药血清对HSC—T6细胞的增殖、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达的影响,探讨该复方对肝纤维化的可能作用及其机制。方法设立正常组、护肝合剂组、模型组,采用卡介苗和脂多糖进行肝损害造模,然后观察3组ALT、AST和血清TGF-β1的变化。制备各组大鼠的血清,进行HSC-T6细胞的培养,采用MTT方法观察该细胞的增殖情况.并用RT—PCR的方法观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结果模型组造模前后的ALT、AST及TGF-β1都显著升高(P〈0.01),护肝合剂组上述指标较模型组显著下降(P〈0.01),护肝合剂组的HSC-T6细胞增殖较模型组显著下降(P〈0.01),且没有Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结论护肝合剂能在一定程度上通过改善肝功能、降低TGF-β1水平抑制肝星形细胞的增殖,改善肝纤维化程度。 相似文献
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目的:通过比较血清HBV DNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究。 方法:采集了慢性乙型肝炎(CHB)患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定。同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBV DNA滴度。 结果: 本研究建立的一片段PCR法扩增成功需要的血清HBV DNA浓度高于两片段PCR法,两种方法扩增的效率比较为:一片段PCR法扩增的阳性率低于两片段PCR法(P<0.01)。一片段PCR法的保真性和灵敏度分析发现: 保真性:核苷酸的人为突变率为1.13 bp/kb;灵敏度:为102个初始模板。浓度大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低。结论: 血清HBV DNA水平对两种扩增方法的阳性率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据。HBV DNA滴度大于106copies/L的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBV DNA滴度小于106copies/L样本,则可选用两片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术。本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但还需进一步优化。 相似文献
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目的 探讨逆转录病毒载体介导的HBsAg抗原的表达及其稳定性。方法 将HBsAg基因插入逆转录病毒载体PLXSN中,构建成重组逆转录病毒载体。用电穿孔法转染PA317细胞,包装成假病毒颗粒,在不同温度下冻存。于不同时间用假病毒颗粒感染HepG2、NIH3T3及293细胞,用RT—PCR及ELISA法检测HBsAg表达;以感染后G418抗性克隆形成数确定假病毒颗粒的活力。结果 在各个时间段HBsAg表达量均差异无显著性。在-20℃冻存时,6个月后克隆数即下降过半,12个月后仅形成少数克隆,24个月后无克隆形成;在-40℃冻存时12个月后HepG2、NIH3T3、293形成的克隆数分别为121、332和89,24个月后分别为42、137和43,与冻存前比较差异有显著性;-70℃冻存时,24个月后克隆数分别为159、463和112,与冻存前比较差异无显著性。结论 HBsAg重组逆转录病毒颗粒在-70℃保存2年后,病毒活力未受明显影响,HBsAg表达量亦无明显改变。 相似文献
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目的建立一种乙型肝炎病毒(HBV)全基因组扩增及克隆的新方法。方法设计含SalⅠ、NotⅠ酶切位点的引物,用一片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切后将PCR产物克隆入pBlueScript-(SK-)载体,进行HBV全基因组序列测定。结果用此方法成功获得35例HBV全基因组DNA序列。同时以重组质粒为模板进行敏感性和保真性测定,其敏感性为102个初始模板,核苷酸的人为突变率为1.6bp/kb。结论此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析,为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法。 相似文献