PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值

目的:探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的临床价值。方法:选取2016年1月-2019年8月在中山大学附属第一医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶1 001例,受检夫妻双方均为地中海贫血基因携带者,适时抽取羊水等样本,提取基因组DNA,采用PCR-流式荧光杂交技术和传统多重Gap-PCR和PCR-RDB技术对样本进行α和β-地中海贫血基因平行检测,分析基因诊断结果,评估两者在地中海贫血基因诊断中的一致性。结果:2种方法均检出正常基因型389 (占38.86%,389/1001)例,异常基因型59种,共612 (占61.14%,612/1001)例,包括α-地中海贫血416例、β-地中海贫血162例和αβ-复合地中海贫血34例。α-地中海贫血基因型主要为--SEA、-α3.7和-α4.2;β-地中海贫血中检出Cd41-42突变频率最高,其次是IVS-Ⅱ-654和CD17。检出罕见型HKαα/--SEA1例。与Gap-PCR和PCR-RDB技术相比,PCR-流式荧光杂交法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,这2种检测方法结果一致性很好。结论:PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速,与传统技术联合平行检测有助于提高地中海贫血孕妇产前诊断的准确性。     

血液和尿液中巨细胞病毒DNA的检测研究

目的探讨血液和尿液不同类型标本中巨细胞病毒(CMV)-DNA的检测研究。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对52例患者4种不同类型的血液标本和85例患者3种不同类型的尿液标本的CMV-DNA载量进行检测,比较血液和尿液不同类型标本的CMV-DNA检出率和病毒载量的差异。结果 52例患者血清、全血、血浆和外周血单个核细胞(PBMC)的CMV-DNA检出率分别为48.08%、71.15%、57.69%和69.23%;全血和PBMC的CMV-DNA检出率较高,差异有统计学意义(P0.05)。PBMC的定量结果较高。85例患者混合尿、尿上清和尿沉渣的CMV-DNA检出率分别为72.94%、62.35%和84.71%,尿沉渣的CMV-DNA检出率较高,混合尿的定量结果较高。结论血液和尿液标本CMV-DNA的检测结果差异较大,在CMV感染的临床诊疗和监测中使用同一标本类型检测具有重要的临床意义。     

NIPT-plus筛查染色体MMS的应用评价

目的 探讨扩展性无创产前检测（NIPT-plus）在筛查染色体微缺失/重复综合征（MMS上的应用。方法 选取中山大学附属第一医院2018年1月至2020年12月3 860例孕妇及2022年10例室间质评样本的NIPT和NIPT-plus检测结果,其中24例孕妇进行染色体微阵列分析（CMA）产前诊断。结果 24例孕妇及10例质评样本NIPT-plus游离DNA浓度明显高于NIPT,总测序数据量提高了1.39～1.58倍,有效测序数据量提高了1.20～1.35倍;24例孕妇样本NIPT-plus提示1例18-三体,1例21-三体,2例MMS,NIPT提示1例18-三体,1例21-三体;10例质评样本NIPT-plus提示9例MMS且9号样本同时存在性染色体非整倍体（SCAs）,NIPT仅提示1例SCAs。结论 在本院系统检测范围内NIPT-plus能有效应用于MMS的筛查,减少出生缺陷。     

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的应用

目的探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的诊断效能。方法采用PCR-流式荧光杂交技术对381例疑似地贫患者标本进行α和β-地贫基因检测,同时以常用的多重Gap-PCR和PCR-RDB为对比方法,比较两者在地贫基因诊断中的结果是否一致。结果采用PCR-流式荧光杂交法对381例疑似地贫样本进行检测,检出地贫165例,检出率为43.31%,包括α-地贫115例、β-地贫43例和αβ-复合地贫7例。α-地贫中检出的基因型主要为--~(SEA)、-α~(3.7)和-α~(4.2);β-地贫中检出CD41-42突变频率最高,其次是IVS-II-654与CD17。PCR-流式荧光杂交法与Gap-PCR技术和PCR-RDB技术相比较,其灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%。两种方法检测结果一致性很好。结论 PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速、结果可靠,适合于地中海贫血的基因诊断。