出核因子CRM1及p27在胶质瘤中的表达

目的 探讨出核因子CRM1、p27 10位丝氨酸(Ser10)磷酸化及p27蛋白在胶质瘤中的表达、相互关系及意义.方法 免疫组织化学SP法检测70例胶质瘤和10例非肿瘤对照脑组织标本中CRM1、p27Ser10磷酸化形式及p27蛋白的表达,Western blot检测6例新鲜胶质瘤标本中相应蛋白的表达.结果 CRM1及p27Ser10磷酸化形式在对照脑组织中表达不明显,在低级别胶质瘤中表达较少,在高级别胶质瘤中表达较多,两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).p27在对照脑组织中表达明显,其表达水平随肿瘤级别增高而降低,差异有统计学意义(P<0.01).Western blot结果显示CRM1、p27Ser10磷酸化形式在胶质瘤中的表达水平与肿瘤细胞的恶性程度相关.相关分析显示:胶质瘤中CRM1蛋白表达与p27蛋白表达呈负相关(r=0.727,P<0.01),与p27Ser10磷酸化形式呈正相关(rs=0.954,P<0.01),与增殖指标Ki-67表达呈正相关(rs=0.799,P<0.01);p27Ser10磷酸化形式与p27蛋白表达呈负相关(rs=-0.744,P<0.01),与Ki-67表达呈正相关(rs=0.785,P<0.01).结论 在胶质瘤中高表达的CRM1可能通过识别并结合高表达的p27Ser10磷酸化形式,促进p27的出核降解,使p27表达降低,失去对细胞周期的调控,从而促进胶质瘤的恶性进展和增殖.     

全反式维甲酸对人白血病细胞系U937细胞生长的影响及其机制分析

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)作用于人白血病细胞系U937细胞后,对细胞生长的影响及可能的机制.方法 收集1 μmol/L ATRA作用后的U937细胞,利用流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测细胞周期相关蛋白(cyclinA、p16、021、027及p27相关分子skp2)表达水平的变化,采用免疫沉淀方法检测U937细胞中027与Skp2的结合情况.结果 流式细胞术分析显示,在1μmol/L ATRA作用72 h后,72%的U937细胞被阻滞在G0/G1期.Western blot分析显示,ATRA能诱导cyclinA、Skp2表达下凋,p21、p27表达上调.免疫沉淀法检测结果显示在U937细胞中p27与skp2存在相互结合的情况.结论 ATRA可能主要通过诱导p27表达上调引起U937细胞生长阻滞,其过程是由p27相关分子Skp2所介导的.     

人类S期激酶相关蛋白2表达质粒的构建

目的:克隆人类S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因,构建其表达质粒,为今后进一步研究Skp2的生物学功能提供基础。方法:采用RT-PCR技术扩增人类Skp2 eDNA全长序列,运用DNA重组技术将其重组于pcDNA3.1/myc- His A质粒,构建Skp2表达质粒。结果:通过酶切电泳分析及DNA测序分析证实,实验成功构建了Skp2表达质粒。结论:Skp2表达质粒pcDNA3.1/mye-His A-Skp2构建成功,为进一步研究Skp2的生物学功能及其在肿瘤发生、发展、诊断和预后中的作用奠定了基础。     

p27kip1及相关分子Jab1 CRM1在淋巴瘤细胞U937增殖过程中的表达变化及相互关系

目的探讨p27kip1及相关分子Jab1、CRM1在淋巴瘤细胞U937增殖过程中的表达及相互关系。方法采用血清饥饿合并释放处理淋巴瘤细胞株U937,通过细胞计数法检测该处理对U937细胞生长情况的影响;采用Western blot、免疫荧光双标法和激光共聚焦技术检测不同生长状态的U937细胞中p27kip1、Jab1的表达及亚细胞定位情况。结果血清饥饿造成U937细胞生长阻滞, p27kip1相关分子Jab1和CRM1表达下降,p27kip1蛋白总量增加,第10位丝氨酸磷酸化的p27kip1表达下降。与此同时,p27kip1也由胞浆高分布转变为胞核高分布。血清释放后上述分子呈现相反的变化,并且p27kip1的分布又主要集中在胞浆中。结论在刺激淋巴瘤细胞U937增殖过程中,Jab1和CRM1可能通过影响p27kip1的亚细胞定位与表达水平,参与调控淋巴瘤细胞的生长状态。     

p27kip1及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27kip1为CIP/KIP家族的主要成员,对细胞周期起负调节作用.由于p27kip1的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节,因此p27kip1降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要.Skp2为人类F-box蛋白家族成员,介导p27kip1的多聚泛素化及随后的蛋白水解[1].     

P27pl与出核因子CRMl在人淋巴瘤细胞系中的表达及相互关系

目的 研究P27kipl与出核因子CRMl在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系.方法 运用血清饥饿同步化处理淋巴瘤细胞株Jurkat和Raji,10%血清刺激细胞增殖.Western blot分别检测生长阻滞及增殖的淋巴瘤细胞中P27kipl与CRMl的表达.用核浆分离方法检测P27kipl与CRM1分别在胞核、胞质的定位.免疫沉淀检测P27与CRMl在淋巴瘤细胞中的结合.结果 在不同状态的淋巴瘤细胞中,P27kipl与CRMl蛋白水平的表达均表现为负相关,并且P27kipl的核内外分布与CRMl的核内外分布一致.免疫沉淀结果验证在淋巴瘤细胞中P27kip1与CRMl相互结合.结论 出核因子CRMl可能通过P27kipl结合而影响P27kip1的核内外分布及表达水平,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长.     

P27^kip1与出核因子CRM1在人淋巴瘤细胞系中的表达及相互关系

目的研究P27kip1与出核因子CRM1在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系。方法运用血清饥饿同步化处理淋巴瘤细胞株Jurkat和Raji,10%血清刺激细胞增殖。Western blot分别检测生长阻滞及增殖的淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1的表达。用核浆分离方法检测P27kip1与CRM1分别在胞核、胞质的定位。免疫沉淀检测P27kip1与CRM1在淋巴瘤细胞中的结合。结果在不同状态的淋巴瘤细胞中,P27kip1与CRM1蛋白水平的表达均表现为负相关,并且P27kip1的核内外分布与CRM1的核内外分布一致。免疫沉淀结果验证在淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1相互结合。结论出核因子CRM1可能通过与P27kip1结合而影响P27kip1的核内外分布及表达水平,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长。     

p27kip1及其出核相关分子激活蛋白1辅因子在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系

目的 探讨p27^kip1及其出核相关分子激活蛋白1（AP-1）的辅助因子Jab1在淋巴瘤细胞中的表达变化及相互关系。方法 采用血清饥饿合并释放方法同步化处理淋巴瘤细胞系Jurkat和Raji细胞，分别采用Western blot及RT—PCR技术检测p27^kip1、Jab1在淋巴瘤细胞中的蛋白表达水平和mRNA表达水平变化；采用来普霉素B（LMB）刺激增殖过程中的淋巴瘤细胞，检测p27^kip1、Jab1的表达变化；构建人Jab1基因的pcDNA3．1-myc-Jab1的真核表达质粒，脂质体转染Jurkat细胞，配合免疫荧光技术检测p27^kip1的亚细胞定位情况；免疫沉淀检测Jurkat和Raji细胞中p27^kip1与Jab1的结合情况。结果 血清饥饿导致Jurkat和Raji细胞生长周期停滞，p27^kip1蛋白总量增加，Jab1蛋白总量减少。血清释放后两者的蛋白水平呈现相反的表达变化，而p27^kip1mRNA水平无明显改变。LMB可以抑制由血清释放引起的细胞增殖，在此过程中p27^kip1表达上调，Jab1表达下调。转染Jab1真核表达质粒的Jurkat细胞p27^kip1定位有明显的改变。免疫沉淀结果显示在Jurkat和Raji细胞中p27^kip1与Jab1相互结合。结论 Jab1可能通过与p27^kip1结合来介导p27^kip1的核内外分布并影响其表达，进而影响p27^kip1的功能状态，从而参与调控淋巴瘤细胞的生长。     

GPR37在骨髓瘤细胞黏附介导的耐药中的作用及意义

目的：研究G蛋白耦联受体37（orphan G protein-coupled receptor 37,GPR37）在细胞黏附介导的多发性骨髓瘤细胞耐药过程中的表达变化及其生物学作用.方法：采用多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226与纤黏蛋白（fibronectin,FN）或骨髓基质细胞株HS-5共培养构建细胞黏附模型.Western Blot检测GPR37分别在悬浮和黏附状态的RPMI 8226细胞中的蛋白表达水平.钙黄绿素实验检测改变GPR37的表达对RPMI 8226细胞黏附的影响,并采用化疗药物多柔比星处理细胞,CCK-8试剂盒检测上述处理对RPMI 8226细胞活力的影响.结果：Western Blot结果显示GPR37在RPMI 8226细胞黏附模型中低表达.钙黄绿素实验结果显示RPMI 8226细胞过表达GPR37后其黏附能力显著降低.CCK-8实验结果表明GPR37过表达能显著增强RPMI 8226细胞对化疗药物多柔比星的敏感性.结论：GPR37可能通过影响骨髓瘤细胞与基质细胞的黏附能力从而影响其对化疗药物的敏感性.     

CREM-1蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:研究环磷酸腺苷反应元件调节蛋白(Cyclic AMP response element modulator 1,CREM-1)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达情况,结合临床病理资料初步探讨CREM-1的表达水平与食管鳞癌发生转移和侵袭的相关性。方法:采用免疫组化二步法测定98例食管鳞癌癌标本CREM-1的表达水平。Western blot检测4组转移性与非转移性食管鳞癌新鲜标本中CREM-1的蛋白表达水平。结果:Western Blot结果显示CREM-1在转移性食管鳞癌中表达明显低于非转移性癌组织,与上皮标记物E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达趋势一致。免疫组化结果显示CREM-1蛋白在转移性的食管鳞癌中低表达,在非转移性癌组织中高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。统计学分析显示CREM-1的表达高低与与肿瘤分期相关(P<0.05)。生存分析显示CREM-1高表达的患者预后不良(P<0.05)。Cox模型多因素分析提示CREM-1是独立的预后指标(P<0.05)。结论:CREM-1在转移性食管鳞癌中低表达,可能参与调控食管鳞癌转移及侵袭的发生发展过程。