慢性牙周炎口腔变黑普雷沃氏菌分离鉴定及促进食管鳞癌演进

目的分离、鉴定口腔变黑普雷沃氏菌(Prevotella nigrescens,P.nigrescens),探讨其对食管鳞癌是否有促进作用。方法胰豆胨肝粉琼脂(GAM)培养基厌氧原代培养慢性牙周炎患者龈沟液,挑选黑色菌落分离纯化;革兰染色、16S rRNA基因测序鉴定分离的单克隆细菌;该细菌感染食管鳞癌细胞NE6-T后细胞生物学性状变化。结果慢性牙周炎患者龈沟液厌氧原代培养120 h后可见多个菌落,其中灰黑色菌落经连续划线法分离纯化为黑色、圆形光滑单克隆菌落。该细菌革兰染色阴性、串珠状排列,16S rDNA序列与P.nigrescens F0103同源性为99.78%(P.nigrescens LY01)。LY01感染促进NE6-T细胞体外增殖、迁移、侵袭和裸鼠皮下荷瘤生长,并诱导Ki67表达上调和p-STAT3激活。结论慢性牙周炎口腔P.nigrescens可能促进了食管鳞癌发展。     

直接PCR法在口腔牙龈卟啉单胞菌检测中的应用

目的为了便于食管癌大规模流行病学筛查工作的开展,探讨一种能快速敏感地检测口腔牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)DNA的免核酸抽提直接PCR方法。方法收集我院门诊100例体检人员的200份口腔拭子(每人双份),以TE buffer(10 mM Tris,0.1 mM EDTA,pH 8.0)、商品化裂解液以及核酸抽提试剂盒等作为基因组提取试剂,使用P.gingivalis特异引物探针进行直接定量PCR检测。结果与裂解液-直接qPCR法相比,TE-直接qPCR法的灵敏度为94.12%,特异性为100%;与试剂盒-qPCR法相比,TE-直接qPCR法的灵敏度与特异性均为100%;TE-直接qPCR法与裂解液-直接qPCR法以及与试剂盒-qPCR法检测P.gingivalis均具有高度一致性(分别为Kappa=0.954,Kappa=1);TE-直接qPCR法与试剂盒-qPCR法检测阳性P.gingivalis的Ct均值无显著差异(P=0.907)。结论TE-直接qPCR法检测口腔P.gingivalis灵敏度高、特异性强,是快速高效检测口腔P.gingivalis的理想方法,可用于食管癌大规模分子流行病学研究。