河北省野鼠立克次体感染调查

目的 调查河北省南部和东北部野鼠立克次体感染情况以及感染株的遗传进化特征.方法 采用粘鼠板和鼠笼在河北南部邯郸市及北部承德市进行捕鼠,提取鼠脾脏DNA,采用半巢氏PCR扩增立克次体的16S rRNA、ompA、gltA基因,对扩增阳性产物进行测序,并对获得序列进行同源性比较和系统发生树分析.结果 在邯郸市和承德市共捕获...     

旋毛虫原肌球蛋白的特性分析及原核表达北大核心CSCD

目的 分析旋毛虫(Trichinella spiralis)的原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)特性并制备重组旋毛虫TM蛋白。方法 在NCBI的Nucleotide数据库选取旋毛虫TM (GenBank:AF419300.1),利用在线分析工具分析旋毛虫TM的氨基酸组成、二级/三级结构、疏水性等特性。密码子优化后合成旋毛虫TM(GenBank:AF419300.1)的全长并插入到原核表达载体pET-28a(+),构建重组原核表达质粒pET-28a(+)-TM,转化至BL21(DE3)中,以终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导旋毛虫TM的表达,纯化后采用Western blot法对重组旋毛虫TM蛋白进行鉴定。结果 旋毛虫TM为亲水性不稳定蛋白,二级结构以α-螺旋为主,无复杂的空间结构。构建的重组原核质粒pET-28a(+)-TM经双酶切得到867 bp的基因片段,序列测定后证实重组原核质粒pET-28a(+)-TM构建正确。经IPTG诱导的菌体超声混悬液、离心后上清均检测到相对分子质量约40×10~3的目的蛋白,纯化后得到条带单一的旋毛虫TM。Western bolt显示纯化的重组旋毛虫TM具有良好的反应原性,能被相应抗体识别。结论 获得具有反应原性的纯化的重组旋毛虫TM,该蛋白为亲水性不稳定蛋白,无复杂空间结构,为进一步研究旋毛虫TM蛋白的生物学功能奠定了基础。     

LBH589对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖和凋亡影响的研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖和凋亡的作用。方法将25、50、100nmol/L不同浓度的LBH589处理SH-SY5Y细胞24h后,通过WesternBlot法检测组蛋白H4乙酰化水平,进一步用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞增殖能力;用流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡。结果 LBH589处理SH-SY5Y细胞后,组蛋白H4的乙酰化水平增强;LBH589呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖,增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,增加AnnexinV阳性细胞百分数。结论 LBH589可增强组蛋白H4乙酰化水平,对SH-SY5Y细胞具有抑制增殖、G1期阻滞以及促凋亡作用,对人神经母细胞瘤有潜在治疗价值。     

人博卡病毒1型的近似全基因组扩增及HBoV1-4重组分析

目的 扩增人博卡病毒1型的近似全基因组序列,分析HBoV1-4之间的基因重组关系.方法 以检出HBoV1单阳性的鼻咽抽吸物为原始标本,采用PCR的方法扩增HBoV1的5个片段并测序,Blast比对确定是HBoV1片段后用DNAMAN进行序列拼接,拼接序列与已提交的近似全基因组的HBoV1在不同编码区进行同源性分析,并构建进化树;对HBoV1-4的不同编码区进行序列比对和进化分析,揭示HBoV1-4间的基因重组.结果 得到近似全长为5287 bp的HBoV1-NC序列,同源性分析发现HBoV1-NC与重庆株进化关系最近,与广州株进化距离最远;HBoV3可能由HBoV1和HBoV4重组进化而来,HBoV4可能由HBoV2与HBoV3重组进化而来.结论 本研究成功获得近似全基因组的HBoV-NC,HBoV1-4间存在着基因重组关系.     

山羊无形体可视化等温扩增法的建立与应用北大核心CSCD

目的 山羊无形体(Anaplasma capra)是无形体属中近年来新发现的一种人兽共患无形体,可引起无形体病,严重威胁人类的健康。建立一种适用于现场快速检测山羊无形体的可视化环介导等温扩增(LAMP)方法,对无形体病的诊断与防控有重要意义。方法 用聚合酶链式反应(PCR)扩增山羊无形体的msp2基因,构建重组质粒。利用在线引物设计软件设计LAMP引物,优化其反应条件和反应体系;加入一定浓度的钙黄绿素,建立可视化LAMP方法,评价其敏感性和特异性,并与PCR方法比较。结果 建立的可视化LAMP反应可准确检测山羊无形体的重组质粒和样品中的山羊无形体基因,且不与其他无形体发生交叉反应,最低检测限为1 copy/μL,比PCR方法的灵敏度高100倍。用该方法检测已知山羊无形体阳性蜱的总DNA,结果均为阳性;检测承德市野外采集的蜱标本,山羊无形体阳性率为16.1%,PCR方法的阳性率为12.5%。结论 建立的可视化LAMP方法敏感性、特异,操作简单、快捷,可用于人感染山羊无形体的早期检测与蜱携带无形体的监测。     

肠道病毒71型感染UT-SCC-60A对细胞周期阻滞和细胞凋亡发生的研究

目的研究肠道病毒71型感染人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60A后对细胞周期阻滞和细胞凋亡发生情况。方法以人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60A为细胞模型,CCK8试剂盒和流式细胞仪检测Ev71感染UT-SCC-60A后细胞增殖抑制率、凋亡发生和细胞周期阻滞情况。结果EV71对UT-SCC-60A呈现感染时间依赖性抑制,感染48h后抑制率达92.6%;不同剂量的EV71感染均能够显著抑制UT-SCC-60A增殖。EV71感染使UT-SCC-60A以剂量依赖性发生以早期凋亡为主的细胞凋亡,EV71以感染复数为0.5和1感染12h后,早期凋亡细胞比例分别为21.4%和27.1%。EV71感染UT-SCC-60A后使细胞周期阻滞在S期且G0/G1比例下降,EV71以感染复数为1感染12h后,S期比例由对照组的19.0%上升至31.1%,G0/G1期比例由59.8%下降至45.9%。结论Ev71通过使UT-SCC-60A发生S期阻滞来抑制细胞增殖且诱导以早期凋亡为主的细胞凋亡。     

2022—2023年承德市呼吸道合胞病毒的暴发流行及其临床特征研究

目的确定呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)在承德市的流行情况及临床特征。方法收集2022年8月—2023年6月因呼吸道感染在承德市中心医院儿科住院治疗的患儿咽拭子478份及其临床信息, 实时定量PCR检测A亚型和B亚型RSV的分子流行情况, 对RSV感染患者的临床特征进行分析。结果 67.57%(323/478)的住院患儿为RSV阳性, RSV呈暴发流行且均为RSV-A型, 2022年11—12月和2023年5—6月为RSV-A型的2次感染高峰。RSV-A型阳性患儿中, 86.07%(278/323)为合并其他病原体检出病例, 其中与细菌共检出的例数最多, 以肺炎链球菌为主, 肺炎克雷伯菌次之。流感病毒A型是最常见的共检出病毒。与RSV-A型共检出患儿组相比, RSV-A型单独检出组的乳酸脱氢酶(Z=2.396, P=0.017)较高, 且高于正常高值;RSV-A型共检出组的白细胞计数(Z=2.417, P=0.016)、中性粒细胞比例(Z=3.218, P=0.001)、C-反应蛋白(Z=1.998, P=0.046)和肌酐(Z=2.1...     

动脉源性栓子与心源性栓子的比较转录组学研究

目的 探讨动脉源性栓子与心源性栓子的转录基因差异,以期确定潜在诊断性生物标志物的种类.方法 收集12例动脉源性栓子和14例心源性栓子并随机各自分成3组进行总RNA提取,采用高通量转录组学检测动脉源性栓子和心源性栓子的转录组、筛选和确定差异表达基因和转录本并进行GO和KEGG途径分析,CPAT和rMATS分别完成新转录本...     

旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响

目的 探讨旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响及其作用的可能机制。方法 将H446细胞与0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、1.2 mg/mL虫体蛋白分别培养并设为实验组,不处理的H446细胞设为对照组,采用噻唑兰(MTT)比色法检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对H446细胞增殖活性的抑制作用;采用流式细胞术(FCM)检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白诱导H446细胞株凋亡的情况;采用Real-timePCR及Western blot法检测细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)和凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1) mRNA及蛋白的表达。结果 MTT比色法结果表明虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性;流式细胞术结果表明虫体蛋白作用于H446细胞24 h后,有明显的促凋亡作用;Real-timePCR及Western blot法结果显示,与阴性对照组相比,促凋亡基因Cyt-C和Apaf-1表达均上调。结论 旋毛虫肌幼虫虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性,并诱导细胞凋亡,其作用可能与Cyt-C和Apaf-1表达上调有关。