细胞外信号调节激酶系统 (ERKs)在正常发育大鼠视皮层基因表达的研究

细胞外信号调节蛋白激酶 (ERKs)是皮层神经元生长、发育和分化的关键因子。本研究目的在于研究 ERKs(ERK1、ERK2和 ERK3 ) m RNA在视皮层各层的分布、表达量以及发育过程变化。实验用健康雄性 SD大鼠 ,于生后 (P) 14、2 1、2 8、45和 90 d(成年 )灌注固定 ,取全脑 ,切取视皮层。用 4%多聚甲醛固定 ,石蜡包埋 ,4μm厚切片。地高辛标记特异性寡核苷酸探针 (ERK1、ERK2 )和 c DNA探针 (ERK3 )。用原位杂交方法检测三种 ERKs亚型的 m RNA在各年龄组大鼠视皮层的表达。结果证明 :ERKs m RNA在出生后大鼠正常发育视皮层的表达 ,ERK1和 ERK2 m RNA的分布具有明显的层的特异性 ,表达于除 I层 (分子层 )之外的 II-VI层 ,ERK2较 ERK1m RNA的表达更广泛、信号密度更强。ERK1和 ERK2 m RNA的转录在发育敏感期增高 ,从 P2 1～P2 8逐渐增加 ,P45时达到高峰 ,到成年时降低为相当于 P2 1的水平。 ERK3 m RNA在大鼠出生后视皮层的信号表达强 ,比较恒定 ,无明显的层分布特异性。本研究结果提示 ,出生后正常大鼠发育期视皮层 ERK1和 ERK2的 m RNA表达呈上调趋势 ,而 ERK3 m RNA在大鼠出生后视皮层的表达量中等 ,比较恒定 ,缺乏发育性变化特点。表明 ERK1和 ERK2可能是参与出生后在视觉环境刺激下视皮层发育可塑性调节的重要     

猫视皮层N-甲基-D-天门冬氨酸受体的基因表达

目的　检测 5种NMDAR亚基的mRNA在猫视皮层的表达情况 ,为NMDAR的功能多样性提供分子基础。方法　 3月龄猫 6只 ,采用地高辛标记的寡核苷酸探针 ,对猫视皮层切片进行原位杂交。结果　NR1的mRNA在视皮层的所有层均有强表达 ,NR2A在Ⅲ、Ⅳ层表达较高 ,而Ⅱ、Ⅴ层呈中等水平 ;NR2B的表达信号较弱 ,主要表达于Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ层 ;NR2CmRNA的信号很弱 ,表达Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ层 ;NR2DmRNA在视皮层各层呈中等表达 ,以Ⅴ和Ⅵ层的信号最强。结论　NMDAR各亚基在猫视皮层中的基因表达具有多样性 ,这可能构成了不同NR通道具有功能差异的分子基础     

细胞外信号调节激酶系统(ERKs)在正常发育和单眼剥夺大鼠视皮层蛋白表达的研究

为了研究正常发育和单眼视觉剥夺大鼠视皮层 ERK1/ ERK2基因蛋白质表达的变化 ,本研究建立了 SD大鼠单眼视觉剥夺模型 ,以多克隆抗 ERK1/ ERK2抗体和单克隆抗双磷酸化 ERK抗体检测出生后第 1、14、2 1、2 8、45 d和成年 (90 d)正常发育和单眼视觉剥夺 (14～ 45 d)视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达和活性改变。结果表明 ,出生后大鼠视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达逐渐增加 ,至 45 d达到高峰 ,此后下降至成年达稳定水平。磷酸化 ERK蛋白表达仅见于成年大鼠视皮层。单眼视觉剥夺导致ERK1/ ERK2蛋白表达减少。提示 ERK的蛋白表达依赖于正常的视觉输入信号的刺激 ,异常的视觉经验造成表达的明显下调 ,阻断正常的发育进程。说明 ERK1和 ERK2可能参与发育敏感期视皮层神经元可塑性的调节     

猫视皮层ERK mRNA表达的研究

丝裂原激活的蛋白激酶又称细胞外信号调节激酶,具有神经元信号传导功能,参与多种发育过程。它由细胞外特殊信号激活,将酪氨酸磷酸化过程转化为丝氨酸／苏氨酸磷酸化过程,后者进一步调节下游的蛋白激酶。因此,细胞外信号调节激酶在磷酸化的连锁反应过程中起着枢纽作用。本文应用地高辛标记寡核苷酸探针的原位杂交技术,研究了细胞外信号调节激酶的２ 种亚型 ＥＲＫ１ 和ＥＲＫ２ ｍ ＲＮＡ 在生后４ 周龄的幼猫视皮层各层的分布。结果表明,ＥＲＫ１ ｍ ＲＮＡ 在视皮层的表达层次明确,以第Ⅴ层和第Ⅲ层的表达为最强,Ⅱ层呈中等表达,Ⅳ层较弱,Ⅵ层最弱,即在视皮层的表达强度为Ⅴ、Ⅲ＞ Ⅱ＞ Ⅳ＞ Ⅵ。与ＥＲＫ１相比,ＥＲＫ２ 的表达普遍较强,但层次欠清晰,其表达强度为Ⅴ、Ⅱ＞ Ⅲ、Ⅳ＞ Ⅵ。ＥＲＫ 的２ 种亚型在视皮层的Ⅰ层即分子层均不表达。ＥＲＫ１ 和ＥＲＫ２ ｍ ＲＮＡ 在视皮层的这种特征性分布提示,在幼猫的视皮层发育过程中,ＥＲＫ 可能具有独特的信号传递作用。