小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag的构建及表达验证

目的构建含有生精细胞特异启动子Dazl的真核报告基因表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag,研究生精细胞特异启动子Dazl在生精细胞中的启动效果。方法通过同源重组的方法对腺相关病毒载体AAV-CMV-RFP-Flag进行改造,构建小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag。在体外,转染GC1-spg野生型细胞和HEK-293T细胞,通过免疫荧光、q-PCR、Western blot验证AAV-Dazl-RFP-Flag在体外的表达特异性。在体内,将AAV-Dazl-RFP-Flag进行腺相关病毒(AAV)包装,通过显微注射技术将AAV注射到小鼠睾丸内,通过q-PCR检测AAV-Dazl-RFP-Flag在体内的表达特异性。结果成功构建了AAV-Dazl-RFP-Flag表达载体,并在体内、外水平验证了AAV-Dazl-RFP-Flag的表达。结论小鼠生精细胞特异表达载体AAV-Dazl-RFP-Flag可以在生精细胞中特异性表达,为雄性生殖不育的基因治疗提供更高效的载体工具。     

Ks—5A型光热复合治疗仪治疗宫颈炎250例临床分析

宫颈糜烂是育龄妇女的常见病，长期性宫颈炎也是诱发宫颈癌的原因之一。我院1995年5月以来使用KS－SA型光热复合治疗仪治疗宫颈糜烂283例，复查250例（其余33例无来复查及未到复查时间）．现将其疗效作一分析。1材料与方法1.1临床资料，250例患者，年龄最小21岁，最大54岁，平均年龄34．9岁。均系妇科普查及门诊检查所发现的病人，治疗前曾做妇科检查及白带常规检查，宫颈糜烂分型是按照全国高校妇产科教科书的标准划分的。25O例宫颈糜烂分型见表1：1．2方法：治疗时间选择在停经后3～周内进行，白带常规检查无急性阴道炎症，患者排空膀味…     

甲状腺素及胰岛素抵抗与非酒精性脂肪肝关系研究

脂质代谢异常、氧化应激反应、瘦素、脂联素等与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的发生发展有相互作用,同时也影响着非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发生发展。由此可以推想,甲状腺素与IR和NAFLD有一定的关系。     

腺相关病毒介导的体内睾丸组织基因特异性敲除系统的建立

目的建立一套可用于体内睾丸组织特异性敲除基因的系统。方法利用同源重组技术将CRISPR/Cas9系统中sgRNA功能元件插入到AAV表达载体,将人源Wee1 2#sgRNA构建入改造的AAV-sgRNA(新版)载体中进行病毒包装,并感染稳定表达Cas9的HeLa-spCas9细胞验证该载体的基因敲除效率。筛选睾丸组织特异表达基因Sycp3的sgRNA靶点,构建入AAV-sgRNA(新版)载体中,进行病毒包装,利用显微注射技术将病毒注射入小鼠睾丸组织曲细精管内,通过T7E1分析体内细胞的基因敲除效果。结果构建成功的AAV-sgRNA载体能够进行病毒包装并在体外细胞水平上对人源Wee1进行基因编辑,与慢病毒介导的CRISPR/Cas9系统中的载体编辑效率相比无明显差异。同时,该系统能在体内水平对Sycp3进行基因编辑。结论成功建立一套可用于在体内睾丸组织中进行特异性敲除目标基因的系统,为生殖体内功能研究提供一个新的思路和方法。     

甲状腺素对非酒精性脂肪肝大鼠ANGPTL3表达的影响

目的 探讨甲状腺激素(TH)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)表达的影响,明确TH是否通过ANGPTL3途径影响NAFLD大鼠肝脏脂肪变性。方法健康3周初断乳SD雄性大鼠30只,随机分为5组:正常组、高脂组、甲状腺素预防组、甲状腺素治疗组、吉非罗齐组;所有大鼠除正常组外均以高脂饮食喂养,分别于0、4、8、12周断尾取血,12周末处死大鼠,取肝脏。苏木精-伊红法(HE)染色,进行肝脂肪变性程度评分,采用酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测血清ANGPTL3含量,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏中ANGPTL3 mRNA的表达水平。结果甲状腺素预防组及吉非罗齐组大鼠肝组织脂肪变性程度均低于高脂组及甲状腺素治疗组(P<0.01)。高脂组血清ANGPTL3水平在第8周后出现增高,呈时间依赖性,其肝组织中的ANGPTL3 mRNA表达亦较正常对照组明显升高(P<0.01)。甲状腺预防组大鼠在8、12周均出现血清ANGPTL3浓度降低,并可下调肝脏ANGPTL3 mRNA水平,与高脂组及甲状腺素治疗组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。甲状腺素治疗组与吉非罗齐组亦可一定程度下调血清ANGPTL3水平及肝组织中ANGPTL3 mRNA 表达(P<0.05),但其降低的程度少于甲状腺素预防组(P<0.05)。结论NAFLD形成过程中伴有ANGPTL3进行性增高,早期给予小剂量TH可通过ANGPTL3途径而改善NAFLD大鼠肝脂肪变性程度。     

基于奥马哈系统的个案管理在老年类风湿关节炎患者中的应用△

目的：探讨基于奥马哈系统的个案管理在老年类风湿关节炎患者中的应用效果。方法：采用随机数字法将2021年6月至2022年6月病房收治的84例老年类风湿关节炎分为对照组和观察组，每组各42例。对照组给予常规护理，观察组采用基于奥马哈系统的个案管理。比较两组患者干预3个月后的晨僵时间、疾病活动度、功能状态和心理状态变化。结果：干预3个月后，观察组晨僵时间、疾病活动度控制、功能状态改善优于对照组，焦虑和抑郁的发生率低于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：基于奥马哈系统的个案管理可以有效控制老年类风湿关节炎患者的晨僵症状、疾病活动度，改善患者的功能状态和心理状况，促进疾病康复。