基于数字切片的组织学实验翻转课堂教学

目的组织学是一门实践性很强的基础医学学科,实验课的教学效果对该门课程的教学质量影响极大。传统的实验授课方式以教师讲解示教为主,教学形式单一,学生被动学习,学习积极性差。本研究以组织学数字切片库为基础,在组织学实验教学中开展翻转课堂教学模式的探索和实践,旨在为组织学教学改革提供理论依据。方法应用数码显微互动系统、数字切片系统和微信在组织学实验教学中实施翻转课堂教学方式,通过计算学生成绩和发放调查问卷的方式评估教学效果。结果实验组学生的平时成绩和期末成绩均高于对照组。调查问卷结果显示翻转课堂教学能够提高学习成绩,增加学习的主动性。结论"翻转课堂"这种新型的教学模式秉承"以学生为中心"的教育理念,适应时代的需求,显著提升教学质量。     

组织学与胚胎学理论考试改革探索

<正>组织胚胎学属于医学基础课程,与病理、生理、生化等学科关系密切。该门课程的学习效果对学生以后的临床和科研工作有很大的影响[1]。考试作为教学过程中的重要环节,是评价教学的基本手段[2]。民办高校作为高等教育大众化的产物,其办学目标是培养一批适应地方经济发展的高素质应用型人才[3]。如何使考试这种评价体系更好地适应人才培养的需要,考试制度改革势在必行。为此,我们自2010年开始以组织胚胎学专业为试点进行了理论考试模式     

MMP-2、MMP-9和VEGF与乳腺癌侵袭转移关系的研究

目的 研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）,基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、MMP-9）在乳腺癌组织中的表达以及与乳腺癌侵袭转移之间的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测20例乳腺纤维腺瘤和12例正常乳腺组织及38例乳腺癌组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的表达.结果 乳腺癌组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的高表达率（63.2%,78.95%,71.1%）高于正常乳腺组织和乳腺纤维腺瘤组织（25.0%,30.0%,33.3%,35.0%,41.7%,45.0%,P＜0.05）.VEGF,MMP-2,MMP-9蛋白表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、ER及PR无关（P＞0.05）;有淋巴结转移组乳腺癌组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的高表达率[80.0%、85.0%,85.0%]高于无淋巴结转移组（44.4%、55.6%,55.6%,P＜0.05）,与组织学分级有关（P＜0.05）.乳腺癌组织中三种蛋白VEGF、MMP-2和MMP-9之间的表达呈正相关（rs=0.541,0.511,0.502,P＜0.01）.结论 VEGF、MMP-2和MMP-9在乳腺癌中有协同作用,促进肿瘤血管形成、细胞外基质的降解和癌细胞的侵袭转移.VEGF、MMP-2及MMP-9的高表达与乳腺癌的侵袭和转移密切相关,有可能成为判断乳腺癌侵袭和转移的有价值的指标.     

胶原蛋白复合壳聚糖支架的制备及生物学性状:壳聚糖及胶原比例筛选

背景:壳聚糖和胶原类支架已成为组织工程常用的载体材料.但是,现阶段如何能够通过调节二者比例而达到理想的细胞载体仍是目前需要解决的问题之一.目的:调节胶原与壳聚糖二者配制比例制备支架材料,检测及对比不同比例支架材料生物学性质.方法:制备1:1,1:2,1:3,1:4,1:5比例的壳聚糖、Ⅰ型胶原蛋白成分,经紫外线交联后冷冻干燥,再将其用NAOH与蒸馏水进行中和,二次冻干制备好支架.观察不同比例支架的材料性质、孔隙率、降解率、溶胀率;扫描电镜观察孔径的大小及形态.结果与结论:在壳聚糖含量固定,支架的大体孔径经统计比较差异有显著性意义(P<0.05).1:3比例制备的孔径最大,达到(298.0+36.0)μm;支架总体的孔隙率为93.9%～97.5%,胶原比例的增加对支架孔隙率的影响较轻微.各组支架的溶胀率可达到80%左右,支架的溶胀程度随胶原比例增加而减少.在支架的降解率随着胶原比例增加而增加,而壳聚糖含量越高,降解速度越慢.结果证实,通过紫外光交联法,按照1:3配比的胶原和壳聚糖的支架材料更加适合软骨组织工程的要求.     

金属蛋白酶-9在糖尿病肾病发病机制中的作用

目的:探讨大鼠糖尿病肾病发展过程中肾局部金属蛋白酶-9(MMP-9)与糖尿病肾病发生的相关性.方法:健康SD大鼠,随机分成糖尿病组和正常对照组,糖尿病组大鼠采用一次性腹腔内注射链脲佐菌素诱导制造糖尿病大鼠模型.分别于造模后第4、 8周通过免疫组织化学方法观察肾局部MMP-9的表达,测其肾小球阳性细胞表达率;应用免疫印迹法对MMP-9在肾组织不同时间点的含量进行定量检测.结果:MMP-9在正常肾小球呈强阳性表达,造模后4、 8周末,糖尿病组大鼠MMP-9在肾小球表达均下降.正常对照组MMP-9含量最高,糖尿病4、8周组大鼠肾脏MMP-9含量明显下降.结论:糖尿病肾病时肾组织中MMP-9表达水平降低,可能是糖尿病早期病理改变的重要原因之一.     

体外应用大鼠胰腺提取物诱导小鼠间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞

目的 探讨大鼠胰腺提取物(RPE)是否可以使小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为胰岛素产生细胞(IPCs),以及小鼠BMMSCs的分化条件,为糖尿病的干细胞治疗提供新的方法. 方法 传代纯化培养昆明小鼠的骨髓间充质干细胞,应用SD大鼠的RPE诱导分化小鼠BMMSCs为IPCs,首先取18瓶小鼠BMMSCs随机分为6组,每组3瓶,分别加入RPE 10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、100mg/L,筛选出最佳的分化剂量,然后用最佳的分化剂量(50mg/L)分化BMMSCs,免疫酶细胞化学鉴定细胞内胰岛素的表达;双硫腙染色检测胰岛素产生细胞的分化和纯度.放射免疫分析检测C肽片段表达. 结果 50mg/L RPE可以使间充质干细胞分化良好,形态较规则,1周后细胞分化成熟,双硫腙染色呈现猩红色;免疫酶细胞化学和免疫荧光细胞化学显示:胰岛素表达阳性,C肽放射免疫学显示有C肽释放. 结论 RPE可以使小鼠的骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞.     

小鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化过程中调控PDX-1基因表达miRNAs的鉴定

目的实现小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化并对分化过程中可能调控胰十二指肠同源异型盒基因-1(PDX-1)基因表达miRNAs进行鉴定。方法首先分离培养BMSCs,应用conophylline和尼克酰胺将其诱导分化为IPCs,采用双硫腙(DTZ)染色和免疫荧光检测胰岛素的表达。然后采用靶基因预测软件miRanda和Target Scan对调控PDX-1基因表达miRNAs进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测诱导分化过程中miRNAs及PDX-1的表达。结果诱导分化后的细胞双硫腙染色呈猩红色,免疫荧光化学显示有胰岛素表达。生物信息学方法预测得到4个可能调控PDX-1表达的miRNAs,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现其中的miR-149和miR-346能结合到PDX-1 mRNA的3’UTR并有效抑制其表达。Real-time PCR检测结果表明,miR-149和miR-346的表达水平与PDX-1表达呈负相关。结论 miR-149和miR-346能负性调控IPCs诱导分化过程中PDX-1的表达。     

胶原-壳聚糖支架材料与间充质干细胞的组织相容性

背景：近年来一些研究发现胶原蛋白-壳聚糖复合支架材料可作为神经组织工程的支架材料,但相关细胞相容性研究较少。目的：观察兔骨髓间充质干细胞在胶原蛋白-壳聚糖复合支架材料表面生长及分化情况。方法：分离培养兔骨髓间充质干细胞,无血清培养液培养,流式细胞仪检查细胞表型;然后,将其接种到凝胶支架材料表面（实验组）及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面（对照组）,神经诱导培养基内培养,倒置相差显微镜观察干细胞的生长及分化情况。结果与结论：细胞表型为CD29＋、CD44＋、CD166＋。倒置相差显微镜观察：实验组中,接种的骨髓间充质干细胞生长良好,7d后可见有突起神经细胞,细胞生长情况与对照组未见有明显差别。证实胶原蛋白-壳聚糖复合支架材料对骨髓间充质干细胞有良好细胞相容性。     

胶原蛋白复合壳聚糖支架的制备及生物学性状：壳聚糖及胶原比例筛选

背景：壳聚糖和胶原类支架已成为组织工程常用的载体材料。但是,现阶段如何能够通过调节二者比例而达到理想的细胞载体仍是目前需要解决的问题之一。 目的：调节胶原与壳聚糖二者配制比例制备支架材料,检测及对比不同比例支架材料生物学性质。 方法：制备1∶1,1∶2,1∶3,1∶4,1∶5比例的壳聚糖、Ⅰ型胶原蛋白成分,经紫外线交联后冷冻干燥,再将其用NAOH与蒸馏水进行中和,二次冻干制备好支架。观察不同比例支架的材料性质、孔隙率、降解率、溶胀率;扫描电镜观察孔径的大小及形态。 结果与结论：在壳聚糖含量固定,支架的大体孔径经统计比较差异有显著性意义(P < 0.05)。1∶3比例制备的孔径最大,达到(298.0±36.0) μm;支架总体的孔隙率为93.9%~97.5%,胶原比例的增加对支架孔隙率的影响较轻微。各组支架的溶胀率可达到80%左右,支架的溶胀程度随胶原比例增加而减少。在支架的降解率随着胶原比例增加而增加,而壳聚糖含量越高,降解速度越慢。结果证实,通过紫外光交联法,按照1∶3 配比的胶原和壳聚糖的支架材料更加适合软骨组织工程的要求。 关键词：壳聚糖;胶原蛋白;支架;紫外线交联;组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.29.012     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊内细胞浓度与胰岛素和C肽的释放**

摘要 背景：微囊化已经普遍应用于各种实验研究,微囊包裹的干细胞治疗糖尿病问题也成为当今的热点,但是囊内包裹的细胞浓度与胰岛素释放量的关系成为目前需要解决的问题之一。 目的：运用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹胰岛素产生细胞,观察细胞浓度对胰岛素和C肽释放情况的影响。 方法：制备大鼠胰腺损伤提取物,将小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素产生细胞。免疫荧光和双硫腙染色鉴定诱导后细胞内胰岛素的表达。然后将胰岛素产生细胞制成浓度分别为1×107 L-1,5×107 L-1,1×108 L-1,5×108 L-1,1×109 L-1,5× 109 L-1的细胞悬液,气体吹喷法制成微囊,用6-羧基乙二酸荧光素检测囊内细胞活力,用葡萄糖刺激微囊内细胞检查其胰岛素和C肽的分泌情况。 结果与结论：胰腺损伤提取物诱导后双硫腙染色和细胞免疫荧光鉴定出胰岛素产生细胞内有胰岛素的表达;胰岛素产生细胞制成的微囊直径约为400 µm,大小均一,6-羧基乙二酸荧光素检测到囊内细胞的活力很好。用葡萄糖刺激不同细胞浓度的微囊,发现细胞浓度为1×108 L-1时,胰岛素和C肽的分泌达到最高。 关键词：微囊化;骨髓间充质干细胞;胰岛素产生细胞;胰岛素;C肽 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.03.046