一种灵敏的血清铁比色法测定

一种灵敏的血清铁比色法测定王丹，涂向东，胡望平（南京军区福州总医院，福州３５０００１）多年来，人们一直在寻找一种灵敏、准确、方便的血清铁测定方法。我们参考有关文献［１］，采用盐酸羟胺作还原剂，建立了以２－（５－溴－２－吡啶偶氮）－５－二乙氨基苯酚（５...     

人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

目的　构建基因工程菌株 ,以获得重组人II型丙氨酸氨基转移酶 (ALT2 )蛋白。方法　逆转录PCR法从人肌肉组织总RNA中扩增ALT2基因片段 ,插入原核表达载体pET - 2 8a ,构建成融合表达质粒pET2 8 ALT2 ,将其转化大肠杆菌BL2 1DE3,IPTG诱导表达。SDS PAGE、活力测定、活性染色及westernblot鉴定表达产物。结果　重组质粒pET2 8 ALT2测序和酶切结果与预期完全符合。IPTG诱导后 ,阳性菌体裂解物上清ALT2活性很高 ,PAGE出现一分子量 5 80 0 0蛋白条带 ,可被抗ALT1抗血清识别 ,酶活性染色显示有ALT活性。结论　已成功将ALT2基因克隆到pET 2 8a载体 ,ALT2蛋白得到可溶性高效表达。     

血清丙氨酸氨基肽酶和亮氨酸氨基肽酶的临床应用

目的：探讨血清丙氨酸氨基肽酶（AAP）和亮氨酸氨基肽酶（LAP）在肝胆疾病诊断中的应用价值。方法：采用速率法同时检测159例肝胆疾病患者血清AAP、LAP活性。结果：各种肝胆疾病患者血清AAP、LAP活性多有不同程度升高，升高幅度依次为：急性胆道疾病＞原发性肝癌＞急性黄疸性肝炎＞肝硬化＞转移性肝癌＞慢性乙型肝炎，两者显著相关，相关系数r为0．9762，P＜0．01。与常见的三种肝酶ALT、ALP、GGT相比，AAP、LAP与ALP、GGT呈正相关，与ALT没有相关关系。结论：AAP和LAP在肝胆疾病诊断中的临床意义十分相似，为鉴别肝胆疾病类型提供了新的、有效的诊断依据。     

人精子特异性乳酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达及其初步应用

目的 构建人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-CA)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,将重组hLDH-CA应用于抗精子抗体(ASA)的检测.方法 以人睾丸TripIEx cDNA文库为模板,PCR扩增hLDH-CA编码序列.PCR产物经Hind Ⅲ-Xho I酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BL21(DE3)中诱导His-Tag融合的重组蛋白表达.用免疫印迹、酶活性测定等方法鉴定表达产物.以纯化的重组hLDH-CA为基质,建立检测ASA的ELISA方法.结果 构建了hLDH-C4原核表达载体pET-28a(+).hLDHC.在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达相对分子质量35 000的产物,与预期大小相符.免疫印迹显示,重组蛋白可被抗His-Tag单克隆抗体和兔抗人LDH-C4抗体识别.重组菌在IPTG诱导后,其裂菌液的乳酸脱氢酶活性是诱导前的11.2倍.用基于hLDH-C4抗原的间接ELISA法,在一组不育症患者中检测血清抗hLDH-CA抗体,阳性率达30.51%.结论 成功地克隆了hLDH-C4编码序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效的表达,重组hLDH-C4在ASA检测中得到初步应用.     

连续监测法测定血清丙氨酸氨基肽酶

目的　建立血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)连续监测法。方法　以丙氨酰对硝基苯胺 (Ala pNA)为底物 ,研究AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP水平。结果　酶反应最适pH8 0 ,Tris HCl缓冲液的最佳浓度 15 0mmol/L ,Ala pNa浓度以 3mmol/L为宜 ,米氏常数 (Km) 0 74mmol/L ,在 8min观测时间内吸光度变化与时间成比例 ,线性范围可达 180 0U/L ,平均批内、批间CV分别为 1 0 4%和 2 0 2 %。 2 0mmol/L甘油三酯、2g/L血红蛋白、340 μmol/L胆红素对酶活力测定无干扰 ,正常成年人群参考范围 ( x± 2s) 4 1～ 77U/L。肝胆疾病组血清AAP明显高于健康对照组。结论　血清AAP活力是鉴别诊断肝胆疾病的一项特异、灵敏的指标 ;连续监测法适用于各种类型的自动化分析仪 ,便于临床推广     

染色体异常核型两家系

家系1 先证者,男,30岁.其妻妊娠3次,均在孕6个月左右B超发现胎儿复杂型先天性心脏病后引产.最近1次于我院引产后取脐带血行染色体检查.夫妇体健,表型、智力均正常,非近亲婚配,孕期无有害物质及放射线接触史.     

抗Sm抗体的测定对SLE的诊断价值

近年来对核抗原抗体的研究发现,盐水可提取性核抗原(简称ENA)中的Sm抗原及其检出的抗Sm抗体对诊断系统性红斑狼疮(SLE)有很强的特异性,由于抗Sm抗体几乎仅存在於SLE病人血中,一些学者甚至主张称它为SLE的“标记”抗体。本文报道55例SLE的抗Sm抗体测定的临床价值。一、材料与方法 (一)病例选择:按美国风湿病学会诊断标准确诊的SLE患者55例;其它结缔组织病9例,包括皮肌炎5例、混合结缔组织病4例。 (二)检测方法:ENA抗原为小牛胸腺提取物,采用琼脂糖加聚乙二醇(PEG)和染色法。同时与不加PEG的原法(对流免疫电泳法)对照,并作参比电泳。二、结果正常人30例抗Sm抗体、抗RNP抗体全部阴性。SLE55例中抗Sm抗体阳性24例,阳性率44％;抗RNP抗体阳性16例,阳性率29％.混合结缔组织病4例抗RNP抗体全部阳性,皮肌炎5例抗Sm     

男性染色体异常核型六例

例1 男,28岁,表型、智力正常,第二性征及生殖器无异常发现.结婚3年,妻子未育,精液常规检查3次未见精子.外周血染色体核型分析:46,X,t(Y;3)(Yqer→Yp11::3q13→3qter;3pter→3q13::Yp11→Ypter),见图1a.     

染色体异常核型六例

例1 女,24岁,结婚3年孕2次,每次均为2个月左右不明原因自发流产.夫妇双方体健,孕期无病毒感染及毒物接触史,妇科检查无异常发现.外周血染色体核型分析为46,XX,t(7;16)(7pter→7q11∷16q13→16qter;16pter→16q13∷7q11→7qter),见图1a.丈夫染色体核型正常.     

染色体异常核型五例

例1 女,31岁,表型及智力正常.结婚5年,怀孕2次,均于妊娠50 d左右胚胎发育停止而自发流产.清宫术刮出绒毛及完整胎囊,胎囊内未见胚胎.外周血染色体分析核型为46,XX,t(1;14) (1pter→ 1q42::14q22→ 14qter;14pter→ 14q22::1q42→1qter),见图1a;丈夫核型正常. 例2 胎儿,B超检查发现胎儿面部畸型,没有鼻子,唇裂.羊水染色体分析胎儿核型为45,XX,der(13) t(13;18)(13qter→13p13::18p10→ 18qter) mat,见图1b.母亲曾流产2次,均发生于50 d左右.母亲核型为46,XX,t(13;18) (13qter →13p13::18p10→18qter,18pter→18p10::13p13::→13pter);父亲核型正常.