乳腺纤维瘤组织差异蛋白质组的研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳和质谱方法研究乳腺正常组织及纤维瘤组织蛋白质组的变化,探讨乳腺纤维瘤的发病机理。方法:提取乳腺正常组织及纤维瘤组织总蛋白,分别用Cy3或Cy5标记,与一个Cy2标记的内标等量混合后,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经De Cyder 6.5软件进行分析,筛选表达量差异超过两倍的蛋白质进行质谱鉴定。结果:15个蛋白质在乳腺正常组织及纤维瘤组织中有显著差异。其中,T细胞受体、钙磷脂结合蛋白A2、a-B crystallin、肌球蛋白轻链\T盒转录因子3、CDC16蛋白、血红素α链、RAB14、烯醇酶1表达量增加,Cu,Zn-超氧化物歧化酶、肽基脯氨酸异构酶、转甲状腺素蛋白、转甲状腺素蛋白突变体、阻抑素表达降低。结论:这15个蛋白质可能与乳腺纤维瘤的发生发展相关,可以作为乳腺纤维瘤早期检测和治疗药物筛选的候选指标。     

生物序列比对算法与图形硬件加速研究

探索准确、高效、低成本、通用性并存的生物序列比对方法.将点阵图算法、启发式算法等各种序列比对算法中准确性最高的动态规划算法在计算机中实现,并通过流模型将其映射到图形硬件上,以实现算法加速;通过数据库比对搜索实例,进行比对时间和每秒百万次格点更新(MCUPS)性能值评测.结果表明,该加速算法在保证比对准确性的同时,能较大地提高比对速度.与目前最快的启发式算法相比,比对平均加速为18倍,最高加速可达28倍.     

中医不同证型乳腺增生患者血清蛋白质组的研究

目的：应用凝胶内差异显示电泳和质谱技术研究不同证型乳腺增生病患者血清蛋白质组。方法：收集正常人及不同证型乳腺增生病患者血清,去除高丰度蛋白质后分别用Cy3或Cy5标记,每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCyder6.5软件进行分析,筛选表达量有显著差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果：与正常人相比,在乳腺增生患者血清中抗凝血酶lii、富含亮氨酸的α-2糖蛋白、HCCR结合蛋白2、结合珠蛋白2和转甲状腺蛋白及其变异体表达量增加。而SP40,40、Ras association and pleckstrin homology domains 1 iso-form3表达量下降。在不同证型乳腺增生患者血清中,抗凝血酶lii和SP40,40在肝郁气滞型表达量最高,痰瘀互结型次之,而冲任失调型表达量少;HCCRBP2在痰瘀互结型中表达量最高,在肝郁气滞型中表达量最低;转甲状腺素蛋白变异体在肝郁气滞型、冲任失调型和痰瘀互结型中表达依次降低。结论：这些蛋白质可能与乳腺增生病不同证型相关,可以作为乳腺增生病临床中医辨证论治的候选客观指标。     

黄连素抑制GRP78表达促进三阴乳腺癌细胞凋亡的研究

[目的]通过检测黄连素对三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)表达的影响,探讨黄连素抗TNBC的机制。[方法]以MTT法检测不同浓度黄连素对MDA-MB-231细胞增殖的影响,筛选黄连素的处理浓度。将MDA-MB-231细胞分为对照组、40μmol·L~(-1)黄连素组、60μmol·L~(-1)黄连素组、免疫球蛋白重链结合蛋白诱导剂X(immunoglobulin heavy chain binding protein inducer X,BiX)组,以及BiX联合40μmol·L~(-1)黄连素组、BiX联合60μmol·L~(-1)黄连素组。相应药物处理24h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以Western blot检测细胞GRP78和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。[结果]40μmol·L~(-1)以上浓度的黄连素可剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖。与对照组比较,BiX组细胞凋亡率降低(P0.05)、GRP78和Bcl-2表达增高(P0.01,P0.001)、Bax表达减低(P0.05)。与BiX组比较,BiX联合40、60μmol·L~(-1)黄连素组细胞凋亡率增加(P0.01),GRP78和Bcl-2表达减低(P0.01,P0.01),Bax表达增加(P0.01)。[结论]黄连素可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能是通过下调GRP78的表达,从而降低Bcl-2表达,并促进Bax的表达。     

温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

阳和汤化裁治疗炎性乳房病验案3则

正炎性乳房病是常见的乳房疾病,包括急性乳腺炎、非哺乳期乳腺炎、乳房外伤感染、乳房结核及炎性乳腺癌等炎性病变。导师楼丽华教授是国家级名中医、博士生导师、主任医师,潜心于中医药对乳腺病的临床与科研四十余载,对乳腺疑难病、多发病的中西医结合诊治有较深的造诣,运用温通法,选用阳和汤化裁治疗炎性乳房病。笔者有幸跟师学习,伺诊于侧,兹举验案3则,以飨同道。1副乳急性乳腺炎案赵某,女,37岁。2018年9月21日初诊。     

温补肾阳药对甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的:研究温补肾阳药对肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响.方法:12只SD大鼠,随机分为3组,每组4只.模型组和治疗组切除两侧甲状腺,正常组做相应的假手术,但不切除甲状腺.喂养7 d后模型组和治疗组大鼠出现拱背耸毛、大便稀溏等肾阳虚的症状.从第8天开始,治疗组每天喂饲温补肾阳药1次,给药剂量6.7 g·kg~(-1),其他2组喂饲等体积的生理盐水,连续6 d后,断头处死3组大鼠,分离提取其肝线粒体蛋白质,分别用荧光染料Cy3,Cy5标记,每个Cy3及Cy5标记的样品与等量Cy2标记的内标混合后在同一块凝胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder 6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:双向电泳后,平均每块胶检测到997个蛋白质点,其中所有图谱共有的点有687个,并从中筛选到22个差异蛋白,其中热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、氨甲酰磷酸合成酶I,ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白和类钙离子激活中性蛋白酶12在肾阳虚状态下表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和GTP结合调节蛋白在肾阳虚状态下表达量均降低.经温补肾阳药治疗后,热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶和GTP结合调节蛋白表达量均增加,而氨甲酰磷酸合成酶I和类钙离子激活中性蛋白酶12表达量减少.结论:温补肾阳药可能通过调节物质代谢、保护线粒体膜稳定性和维护细胞内信号传导而起到治疗肾阳虚的作用.     

肝郁气滞型乳腺增生组织蛋白质组的研究

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术进行肝郁气滞型乳腺增生组织的蛋白质组研究。方法：提取正常乳腺组织及肝郁气滞型乳腺增生组织总蛋白，分别用cy3或Cy5标记。每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合，上样于同一胶中进行电泳分离，经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCydcr6．5软件进行分析，筛选表述量有差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果：在肝郁气滞型乳腺增生组织中，有8个蛋白质表达水平具显著变化。其中S-腺苷谷胱甘肽水解酶、蛋白体5、超氧化物岐化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、过氧化物酶5、肽酰脯氨酰顺反式异构酶表达量增加，而三联组氨酸核酸结合蛋白1表达量显著下降。结论：8种差异蛋白质可能与肝郁气滞型乳腺增生疾病的发生与发展有关。     

衰老对外周血淋巴细胞蛋白质组影响的研究

目的：应用双向电泳和质谱技术，对不同年龄组外周血淋巴细胞蛋白质组进行分析，研究免疫衰老的本质，了解衰老在免疫细胞中的发生机制。方法：4组同一家族男性（祖父，父亲，儿子）血样，离心获得外周血淋巴细胞，提取细胞内全部蛋白质。用三种荧光染料标记后进行双向电泳，经不同激光扫描获得蛋白质图谱。经分析后得到差异蛋白质，挖取差异蛋白点经酶解后进行质谱测定及分析。结果：与青年组相比，老年组热休克蛋白70、波动蛋白、细丝蛋白、肌动蛋白、微管蛋白、肌球蛋白、α-烯醇化酶、Rho-二-磷酸鸟苷分离抑制因子以及干扰素调节因子4表达均明显降低。而中年组未见明显差异。结论：衰老时淋巴细胞自我保护功能和抗氧化功能衰退，免疫细胞的结构发生退行性改变，糖酵解功能降低促使免疫细胞运动能力减弱，导致吞噬功能减弱，同时老年人淋巴细胞的凋亡加速，衰老个体在缺少IRF-4时，抗原提呈细胞的发育分化受到影响，机体的整体免疫能力受到影响，最终导致综合免疫衰老效应。