脱细胞血管基质与血管平滑肌细胞的体外相容性

目的:酶-化学除垢剂制备脱细胞血管基质,检测其与平滑肌细胞的相容性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法:实验于2003-12/2005-12在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。①脱细胞血管基质制备:在37℃水浴振荡条件下,犬总动脉先后用1g/L胰蛋白酶 0.2g/L乙二胺四乙酸钠和1.0%TritonX-100进行脱细胞处理24h和176h,充分漂洗,冷冻干燥后备用。②平滑肌细胞的提取:应用组织块贴壁法体外培养扩增犬隐静脉的平滑肌细胞。③四甲基偶氮唑盐法测定脱细胞血管基质浸提液对平滑肌细胞的毒性:设浸提原液、75%、50%和25%浸提液组,阴性对照组(DMEM 体积分数为0.1的胎牛血清培养液)。以阴性对照组的吸光度作为100%细胞增殖率,增殖百分率(P%)=犤实验组A值/阴性对照组A值犦×100%,按ISO和医学生物材料标准评定材料毒性。④急性毒性试验:取成年大鼠8只,将备用脱细胞血管基质研磨成粉末,生理盐水配成2g/L的混悬液,无菌条件下向大鼠腹腔内注入1mL脱细胞血管基质混悬液,观察72h,记录动物有无死亡及不良反应。⑤亚急性毒性试验:取成年大鼠12只,随机分成2组。实验组用脱细胞血管基质混悬液灌胃,剂量为500mg/kg质量,隔日1次,共10次;对照组给等量生理盐水灌胃。实验期间观察记录体质量变化及动物活动情况。21d取血检查血常规。⑥溶血试验:取抗凝兔血8mL,加入生理盐水10mL,稀释备用。取脱细胞血管基质粉末,加生理盐水中,再加入稀释兔血离心后取上清测定545nm处的吸光度。阴性对照为生理盐水10mL加入稀释兔血;阳性对照为蒸馏水加入稀释兔血。溶血率=犤(试验材料的吸光度-阴性对照的吸光度)/(阳性对照的吸光度-阴性对照的吸光度)犦×100%。⑦凝血试验:血库健康献血员新鲜血浆,用自动血液凝固测定仪进行凝血酶原凝固试验、测定部分凝血活酶凝固时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原。取血浆2mL加入脱细胞血管基质粉100mg,混合后再测定上述指标。结果:①酶-化学除垢剂能使犬总动脉细胞几乎完全脱落,使基质纤维的三维结构变得疏松。苏木精-伊红、胶原染色和弹力纤维染色显示脱细胞血管基质无细胞残留,主要成分为胶原和弹力纤维。②动物实验表明材料无急性、亚急性毒性。体外实验脱细胞血管基质的溶血率为1.6%,符合医用生物材料生物性能测试所提出的溶血率<5%标准。材料混合前后,血浆中凝血酶原凝固试验、部分凝血活酶时间、凝血酶凝固时间和纤维蛋白原4项指标检测结果无明显变化,说明材料不引起凝血功能的改变。③四甲基偶氮唑盐显示75%脱细胞血管基质浸提液培养平滑肌细胞1,3和5d后,细胞增殖率均大于95%,材料毒性为0或1级。结论:TritonX-100和胰蛋白酶制备的脱细胞基质具有良好的生物相容性,能与异体犬平滑肌细胞结合到一起,并在体外生成血管移植物。     

血管组织工程中单根主动脉培养的内皮细胞和平滑肌细胞形态学和生长增殖

目的:探索体外培养及扩增同一来源内皮细胞和平滑肌细胞的有效方法,为研究内皮细胞和平滑肌细胞相互关系和体外构建组织工程血管提供理论和实践基础。方法:在体外用酶消化法和组织块贴壁法分别建立内皮细胞和平滑肌细胞的原代,并应用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠传代培养。应用光镜、透射电镜和细胞计数对内皮细胞和平附肌细胞的形态和增殖进行研究。结果:酶消化法和植块培养法可以有效的建立起内皮细胞和平滑肌细胞的原代。讨论:内皮细胞和平滑肌细胞作为血管构成的基本细胞,对于它们的形态学、体外培养和扩增以及相互关系的研究具有重要的意义。     

燃煤型砷中毒患者临床特征、多系统损害及其意义

目的 探讨燃煤型砷中毒的临床特征、多系统损害及其意义。方法 采用整群抽样与典型调查结合的方法进行现场调查，结合临床检查、生化分析和毒理学方法进行实验室检测。结果 砷进入人体的途径包括摄人富含砷食物和蔬菜以及吸入砷污染的空气；患者砷负荷、氧化损伤指标与正常人群比较差异均有统计学意义；砷中毒患者除慢性砷中毒的典型特征(皮肤角化过度、色素异常)外，肝脏、肾脏、神经系统、肺脏、心脏和球结膜微循环等损害亦很明显；多项特殊检查显示了砷的非临床早期损害。结论生活区煤砷含量高及敞灶燃煤致食物和空气砷污染是贵州省地砷病发生的主要原因；临床上以多系统损害为特点，肝硬化和皮肤癌是其主要死因；实验室特殊检查明确显示了病区非患者及中毒患者的临床前期损害，如肝、肾功能损害、氨基酸代谢异常、氧化损伤等；多指标、多检测方法的联合应用对于砷中毒的监测、诊断和防治具有重要实际意义。     

软骨微粒脱细胞基质微载体的制备及其特性研究

目的：制备以软骨微粒脱细胞基质为原料的微载体，为体外大量培养软骨细胞提供实验依据。方法：利用胰蛋白酶等试剂制备直径为0．100∽0．154mm的软骨微粒脱细胞基质并寻找胰蛋白酶的最佳含量及时间。取绵羊的新鲜膝、肘关节软骨600g，随机分为5组，每组8例，用不同含量的胰蛋白酶作用2∽36h。标本进行大体观察，苏木精-伊红、胶原染色，光镜及扫描电镜观察，密度、含水量测定。结果：微粒软骨脱细胞基质微载体无抗原性成分存在，主要含有胶原，氨基葡聚糖等混合细胞外基质成分。微粒呈不规则形，表面粗糙。软骨微粒脱细胞基质干重密度为0．6547g／mL，湿重密度为1.0627g／mL，含水量为72％。胰蛋白酶的最佳含量为0．25g／L，最适作用时间为(18．3&;#177;1．6)h。结论：以软骨微粒为原料的微载体具有天然细胞外基质成分，是一种体外培养软骨细胞的良好载体。     

燃煤型污染砷中毒与肝损害关系

目的 探讨燃煤型污染砷中毒与肝损害的关系,为砷致肝损害的"三早预防"提供依据.方法 采用临床内科、影像学、病理学及生物化学方法 对燃煤型污染砷中毒病区砷暴露人群进行临床症状体征、肝脏B超、病理形态学检查及血清学肝损害指标检测.结果 砷暴露者有不同程度的消化系统主观症状;轻、中、重度组砷中毒患者的B超异常率分别为12%,34%和64%(P<0.01);砷中毒患者肝脏病理学改变以肝组织纤维增生改变最为明显.血清学检查发现:谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)(20.42±11.10)U/L,羟脯氨酸(Hyp)(29.5±7.3)μg/mL,血清透明质酸(HA)(68.48±51.80)μg/L,轻、中、重度组皆明显高于对照组(P<0.01);总胆汁酸(6.84±4.45)μmol/L、γ-谷氨酰转肽酶(49.71±28.50)U/L,Ⅲ型前胶原(92.01±43.77)μg/L和Ⅳ型胶原(89.33±14.41)μg/L,在中、重度组明显高于对照组(P<0.01).结论 GSTs、Hyp、HA的联合检测对早期发现和诊断砷所致肝细胞损害及肝纤维化有重要参考价值;肝脏B超检查及选择性监测上述指标,对判断肝损害的发生发展及针对性治疗有实际意义.     

隆乳术后自杀者相关问题的分析与探讨

隆乳术是最常施行的美容外科手术之一，据报道2006年美国有329396例女性接受隆乳手术，人数还有呈持续增长趋势，日益受到欢迎。但自1992年以来大量研究考证了隆乳术的安全性和有效性]，发现近年有关隆乳者死亡率及其死亡原因的流行病学调查发现，隆乳似乎与自杀有关。现综述如下。     

外固定方法制作的大鼠股骨骨折模型

背景：外固定器抗旋转能力强,不影响局部血运,不固定关节,动物可以自由活动,适合用于骨折模型的制作。 目的：创立一种新型的股骨骨折动物模型。 方法：SD大鼠24只于大鼠右侧股骨截骨,以自行研究设计的微型单边外固定器为固定装置,制成骨折模型,术后通过大体观察、影像学观察及组织学方法观察股骨对位情况和截骨端的愈合情况。 结果与结论：术后外固定器保持正常位置,未见螺纹钉拔出,针孔松动,骨折等现象,大鼠股骨保持正常生理位置。固定后第2周骨断端已经有模糊的原始骨痂形成。第4周时已有连续性骨痂通过,但骨断端仍较清晰。第8周时,骨断端已经愈合,髓腔再通,出现骨性愈合。证实微型单边外固定器可以为股骨骨折模型大鼠提供可靠的固定,并且右侧股骨截骨骨折模型大鼠制作合理。     

燃煤污染型砷中毒患者血清叶酸与Vit B12的RIA及其临床意义

燃煤污染型砷中毒患者血清叶酸与VitB12含量测定目前国内外尚未见报道.为此,我们于2001年4月,对贵州交乐病区45例燃煤污染型砷中毒患者血清叶酸与VitB12进行了RIA,拟探讨其体内水平及其临床意义. 资料和方法 一、临床资料: (一)中毒组:45例(男30,女15)中毒患者均为贵州兴仁县交乐病区,有长期含砷煤接触史,年龄23～58岁,平均35.6岁.所有患者肢体与躯干均有程度不同的角化疹疣(砷疔),临床症状典型. (二)对照组:30例(男20,女10).选取远离病区15Km以外,从未接触与使用过高砷煤,并经临床排除心、肝、肺、肾等器官病变的健康体检者,平均年龄21.5岁.