CCR6通过上皮间质转化促进结直肠癌肝转移的机制研究

目的检测人趋化因子受体6(CCR6)、人趋化因子配体20(CCL20)、E-钙黏着蛋白和波形蛋白在结直肠癌及肝转移组织中的表达,探讨CCR6参与结直肠癌肝转移的可能机制。方法选取山西医科大学第一医院及山西省肿瘤医院2009至2017年资料齐全的62例原发性结直肠癌患者(结肠癌54例、直肠癌8例)手术切除存档蜡块,其中包含同期切除结直肠癌伴肝转移病灶的标本20例。采用免疫组织化学法检测结直肠癌及肝转移组织中CCR6、CCL20、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达情况,分析CCR6、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达与患者临床病理特征之间的关系,采用logistic多因素回归分析肝转移与患者临床病理特征及CCR6、E-钙黏着蛋白和波形蛋白表达的关系,采用Spearman相关分析CCR6与E-钙黏着蛋白和波形蛋白的相关性。结果CCR6在结直肠癌组织中的阳性表达率为66.1%(41/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为85.0%(17/20),在肝转移组织中的阳性表达率为70.0%(14/20)。CCL20在结直肠癌中的阳性表达率为83.9%(52/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为90.0%(18/20),在肝转移组织中的阳性表达率为90.0%(18/20)。E-钙黏着蛋白在结直肠癌中的阳性表达率为67.7%(42/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为50.0%(10/20),肝转移组织中的阳性表达率为65.0%(13/20)。波形蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率为79.0%(49/62);在伴有肝转移的结直肠癌组织中的阳性表达率为85.0%(17/20),在肝转移组织中的阳性表达率为90.0%(18/20)。CCR6的表达与淋巴结转移(χ^2=11.142,P=0.001)、肝转移(χ^2=4.694,P=0.030)、TNM分期(χ^2=21.785,P<0.001)密切相关;E-钙黏着蛋白的表达与患者淋巴结转移(χ^2=4.694,P=0.030)、肝转移(χ^2=4.253,P=0.039)、TNM分期(χ^2=7.867,P=0.005)密切相关;波形蛋白的表达与患者淋巴结转移(χ^2=7.293,P=0.007)、TNM分期(χ^2=5.712,P=0.017)密切相关。CCR6、E-钙黏着蛋白、波形蛋白均与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及分化程度无关(均P>0.05)。logistic多因素回归分析发现,CCR6(OR=6.812,95%CI为1.206~38.474,P=0.030)、E-钙黏着蛋白(OR=0.256,95%CI为0.069~0.945,P=0.041)是结直肠癌患者肝转移的独立影响因素。Spearman相关分析显示,在20例晚期结直肠癌患者肝转移组织中,CCR6与E-钙黏着蛋白表达(r=0.454,P=0.044)、波形蛋白表达(r=0.509,P=0.022)相关。结论CCR6可能通过上皮间质转化机制促进结直肠癌的进展和肝转移。     

胶原膜治疗Ⅱ～Ⅲ度根分叉区病变的临床观察

目的:对引导组织再生术(GTR)治疗Ⅱ～Ⅲ度根分叉区病变的短期临床疗效进行评价,分析影响其疗效的因素.方法:选取Ⅱ～Ⅲ度根分叉区病变的患牙21颗,胶原膜治疗11颗,翻瓣术治疗10颗,术后3月通过观察牙龈指数、附着水平、根分叉垂直与水平探诊深度的变化;实验室检测龈沟液量(GCF)及龈沟液碱性磷酸酶(GCF-ALP)活性水平的变化;计算机测量分析根尖片,对2种手术方法的临床疗效进行比较.结果:术后3月①自身前后比较,2组的牙龈指数均无显著性差异(P＞0.05),根分叉垂直与水平探诊深度与GTR组的牙周附着水平,均有明显改善,且有显著性差异(P＜0.05),翻瓣组临床附着水平变化则无显著性差异(P＞0.05);胶原膜组与翻瓣组相比较,除牙龈指数外各项临床指标均具有显著性差异(P＜0.05).②实验室观察:自身前后对照比较.2组GCF量均无显著性差异(P＞0.05),GCF-ALP浓度均减少,且有统计学意义(P＜0.05).胶原膜组与翻瓣组相比较,GCF-ALP浓度减小幅度较大,有显著性差异(P＜0.05).③根尖片的测量:2组根分叉区骨密度均增高,GTR组与对照组相比较,垂直向骨高度增加明显,具有显著性差异(P＜0.05).结论:胶原膜治疗Ⅱ～m度根分叉区病变,可获得良好的短期临床疗效.     

犬IGF-I编码区cDNA克隆及其序列分析

目的：克隆犬胰岛素样生长因子(IGF—Ⅰ)编码区基因，构建重组真核表达载体。方法：从犬左心室组织中提取总RNA，通过RT—PCR获取IGF—1 cDNA编码区全序列，将其与pcDNA3．1( )质粒载体连接，构建重组真核表达载体pcDNA3．1( )／IGF—1，转化大肠杆菌DH5α后，随机挑选数个克隆，提取质粒DNA，通过限制性酶切和核苷酸序列鉴定阳性克隆。结果：重组质粒pcDNA3．1( )／IGF—1的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到IGF—1编码区基因，成功构建重组真核表达载体pcDNA3．1( )／IGF—1。     

肌性血管周细胞瘤临床病理观察

目的 报道1例肌性血管周细胞瘤的临床病理学特征，复习近年来血管周肌样细胞来源肿瘤的概念。方法 对1例肌性血管周细胞瘤进行临床病理分析及免疫组化研究并复习相关文献。结果 肌性血管周细胞瘤临床病理特点为具有嗜酸性的圆形、卵圆形细胞围绕血管腔形成的典型的同心圆状结构，可伴有间质透明变性、骨化和巢状淋巴组织增生。免疫组化结果提示血管周同心圆状排列的肌样细胞平滑肌SMA、actin（＋），desmin部分（＋）。CD34、CD99和bcl-2（- ）。结论肌性血管周细胞瘤是新列入WHO软组织肿瘤病理分类的肿瘤，其特点是嗜酸性的圆形、卵圆形细胞围绕血管腔形成典型的同心圆状结构，瘤细胞常表达肌源性标记。它和血管球外皮细胞瘤及成人的婴儿型肌纤维瘤病均属于血管周肌细胞瘤的范畴。     

人角化细胞生长因子-1的克隆及其在骨髓基质细胞中的表达

目的 从人胚肺成纤维细胞中克隆人角化细胞生长因子-1（KGF-1）编码区序列,构建真核荧光表达载体.方法 从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,通过反转录 PCR获取KGF-1 cDNA编码区序列,将其与pIRES2-EGFP质粒载体连接,构建重组表达载体pIRES2-EGFP/KGF-1,测序鉴定.将pIRES2-EGFP/KGF-1瞬时转染骨髓基质细胞（marrow stroma cells,MSCs）48 h后,免疫荧光法检测骨髓基质细胞是否存在KGF-1蛋白的表达.结果 构建的重组质粒pIRES2-EGFP/KGF-1经序列分析示与国外文献报道一致.KGF-1免疫荧光法激光共聚焦检测结果证实,pIRES2-EGFP/KGF-1转染骨髓基质细胞后,存在KGF-1蛋白的表达,定位于细胞浆内.结论 成功构建重组真核荧光表达载体pIRES2-EGFP/KGF-1,初步探讨了该基因在骨髓基质细胞中的表达,为其在皮肤组织工程的运用奠定了基础.     

波形蛋白、NF-κB在桥本甲状腺炎中的表达

采用免疫组织化学方法，检测波形蛋白（vimentin）、NF—κB在26例桥本甲状腺炎（HT）及9例正常甲状腺组织中的表达。结果显示桥本组中波形蛋白表达较对照组明显增强，表明HT甲状腺滤泡上皮细胞存在上皮间叶转化，而NF—κB与波形蛋白表达增加有密切关系。     

凋亡相关蛋白Apr-2的克隆、测序及初步表达

目的: 从HL-60细胞凋亡模型中克隆凋亡相关蛋白Apr-2编码区基因,并对其进行表达,为进一步研究Apr-2的结构功能及多克隆抗体的制备奠定基础.方法: 建立HL-60细胞凋亡模型,提取HL-60凋亡细胞总RNA,以RT-PCR方法获取Apr-2 cDNA编码区全序列,将其与PGEM-T Easy载体连接,转化E.coli DH5α,构建重组克隆载体PGEM-TEasy/apr-2,测序正确后,将目的片段亚克隆入PGEX-4T-2原核表达载体,并转化大肠杆菌, IPTG诱导重组蛋白质表达,分析蛋白质在细菌中的表达分布,进行凝胶自动扫描分析. 结果:序列分析表明,与GenBank中已登录的Apr-2 cDNA编码区序列比较,完全一致.表达的融合蛋白占菌体总蛋白质的40%以上,主要以包涵体的形式存在. 结论:成功的获得了细胞凋亡模型HL-60中Apr-2 cDNA编码区的克隆及其融合蛋白表达产物.     

核因子-κB、波形蛋白在自身免疫性甲状腺炎中的表达及相关性研究

目的探讨核因子-κB（NFκ-B）在桥本甲状腺炎（HT）中的表达以及与vimentin表达的相关性。方法采用免疫组织化学方法,检测28例桥本甲状腺炎及9例正常甲状腺组织中NFκ-B及vimentin的表达。并从17例HT免疫组化阳性标本中选择3例作免疫荧光双标记染色,用激光共聚焦显微镜分别检测CK8和vimentin、NFκ-B和vimentin的共表达。结果在正常及桥本甲状腺炎的滤泡上皮中,均可见CK8的阳性表达。vimentin在桥本甲状腺炎组（68.9±39.87（）和正常甲状腺组（22.4%±34.63%）的阳性细胞百分数比较,两者差异显著（P=0.004）。NFκ-B在桥本甲状腺炎组和正常甲状腺组的阳性表达率分别为64.29%（18/28）和11.11%（1/9）,两者差异显著（P=0.008）;NFκ-B的阳性表达且与vim entin的阳性表达有正相关（r=0.662,P〈0.01）。免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察发现,CK8和vimentin、NFκ-B和vimentin明确共定位于HT滤泡上皮细胞的胞质中。结论桥本甲状腺炎滤泡上皮存在vimentin表达的明显增强,表明HT甲状腺滤泡上皮细胞存在上皮-间叶的免疫表型转化,而NFκ-B与vimentin表达增加关系密切。     

棉酚对髓系白血病细胞凋亡的影响

目的：本实验拟通过棉酚对3种经典髓系白血病细胞系的研究，探索其治疗白血病的可能。方法：用细胞培养、四唑盐比色试验、形态学、DNA电泳等方法观察棉酚对白血病细胞的凋亡效应。结果：棉酚在浓度〉6μmol／L时可选择地抑制白血病细胞的增殖、促进其凋亡，并表现出浓度依赖效应。结论：棉酚对髓系白血病细胞具有选择杀伤作用，表明其可能是一种高效低毒的抗白血病药物。     

中心体扩增在结直肠癌中作用的研究进展

结直肠癌的发生、发展大多遵循"腺瘤—癌"序列,从癌前病变进展至癌一般需要5～10年.但结直肠癌早期常无自觉症状,大部分患者出现典型症状就诊时已发展至中晚期,而中晚期结直肠癌5年生存率相对较低.因此,早期诊断并及时治疗对提高结直肠癌预后至关重要.染色体不稳定性(CIN)是结直肠癌中最常见的基因组不稳定类型,它通过在同一肿瘤内形成不同遗传组成的细胞亚群,产生肿瘤内异质性(ITH),促进肿瘤细胞适应和进化,导致结直肠癌耐药率和复发率增加.近年研究发现,中心体扩增的发生率是动态变化的,随着"腺瘤—癌"序列进展而逐渐升高.在结直肠癌细胞中,中心体扩增通过聚集中心体来避免多极有丝分裂产生,从而避免肿瘤细胞死亡,并通过促进非整倍体和CIN发生,使肿瘤细胞获得ITH和耐药性,从而进化为更具侵袭性的表型.针对中心体聚集、数量扩增或结构扩增能够靶向治疗CIN或高ITH结直肠癌,但目前国内外针对中心体扩增的靶向治疗鲜有报道,亦缺乏相关的临床研究数据,尚需进一步研究.