嗓音疾病患者手术前后的自我评估、声学分析、喉镜检查及其相关性研究

目的:研究嗓音疾病患者手术前后的自我评估、声学分析、喉镜检查及其相关性.方法:对50例嗓音疾病患者手术前后分别进行自我评估、声学分析和喉镜检查3项内容.自我评估采用嗓音障碍指数(VHI)量表中文版,包括功能(F)、生理(P)、情感(E)3个方面,其总和记为T.声学分析通过嗓音分析软件Dr. Speech对患者的声音样本进行分析,选取基频微扰(J)、振幅微扰(S)、标准化噪声能量(NNE)3个参数.喉镜检查为客观的形态学检查,主要观察声带的闭合情况.结果:VHI量表中除E外,F、P、TVH(TVH=F+P)之间的相关性良好,声学分析J、S、NNE 3个参数之间相关性良好,VHI量表中除E外,F、P、TVH与声学分析参数J、S、NNE之间有良好的相关性,闭合程度与VHI量表中除E外的F、P、TVH以及声学分析参数J、S、NNE之间有良好的相关性,以上均应用Pearson相关检验.结论:VHI量表中文版以患者的主观感受为中心,对嗓音疾病的生活影响进行自我评估,受东西方文化差异、年龄、教育程度等影响,存在一定的局限性.声学分析则从客观方面详细地分析了患者的嗓音质量,评估手术疗效.喉镜检查从形态学方面提供了极好的佐证.三者结合的一致性能对嗓音疾病起到综合评估作用.     

The expression and preliminary evaluation of HPV6bL2△N360E7E6 fusion protein in E.coli for genital warts

Objective To express HPV6bL2△N360E7E6 fusion protein in E.coli and preliminarily evaluate its immune effect.Methods Three HPV6b gene fragments,which were L2(1-360 bp),E7 and E6,were fused by overlapping PCR,then were inserted into a prokaryotic expression vector and expressed in E.coli.C57BL/6 mice were immunized with purified fusion protein plus Al(OH)3 and/or CpG adjuvants through intramuscular route,the cellular and humoral immune responses were detected by IFN-γ ELISPOT and ELISA respectively.Results Protein plus CpG adjuvant could induce the strongest cellular immune response to E7 and E6,high antibody titer against L2 could be detected in all immunized groups but there were no significant difference among these groups.Conclutions HPV6bL2△N360E7E6 gene was successfully cloned into pQE30 vector and expressed in E.coli,the fusion protein was also purified and proved that could induce strong cellular and humoral immune responses with appropriate adjuvant in C57 BL/ 6 mice and could be used for future research.     

HPV16E7E6重组腺病毒的构建及免疫效果评价

目的 构建用于宫颈癌治疗的HPV16E7E6重组腺病毒并评价其免疫效果.方法 根据哺乳细胞使用密码子的偏嗜性设计HPV16E7E6融合蛋白表达优势密码子基因序列并合成.将合成的E7E6基因插入腺病毒重组穿棱质粒pCD316后,与Ad5腺病毒骨架质粒共转染293细胞,重组病毒经单斑纯化并进行目的基因插入及表达的鉴定.扩增纯化重组病毒后免疫小鼠,评价其免疫活性.结果 PCR试验证明E7E6密码子优化基因成功插入Ad5病毒;Western blot检测结果表明重组腺病毒中E7E6优化基因能高效表达,该重组腺病毒免疫C57小鼠后,可诱发强特异性T细胞免疫应答,在小鼠体内能完全抑制5×104 TC-1移植瘤细胞的生长.结论 重组HPV16E7E6腺病毒可作为治疗HPV慢性感染或宫颈癌的候选疫苗.     

西妥昔单抗联合术后同步放化疗治疗晚期复发性头颈癌的初步观察

目的 评价西妥昔单抗联合术后同步放化疗治疗晚期复发性喉癌及下咽癌患者的近期疗效和不良反应。方法 晚期复发性头颈癌患者6例,其中喉复发癌2例,下咽复发癌1例,下咽癌伴肺转移1例,气管造瘘口复发癌2例。分别予以手术治疗后3周,西妥昔单抗与同步放化疗,用法：西妥昔单抗第1周初始剂量为400mg/m2,以后每周维持剂量为250mg/m2,共3周。所有患者均采用直线加速器放疗,常规分割调强放疗,总剂量60Gy,6周完成。在放疗的同时给予化疗,方案是：DDP 80mg/m2/d1,5 Fu 800mg/m2,120h持续化疗泵静滴。化疗1次/3周,共3次。结果 所有患者均顺利完成治疗计划。西妥昔单抗主要不良反应为皮疹、口腔炎、疲乏等。中位随访10个月,病例均存活且肿瘤无进展,未发生远处转移。结论 西妥昔单抗联合术后同步放化疗治疗晚期复发性头颈癌安全有效,治疗计划顺利进行,尚需进行进一步临床试验研究。     

嗓音障碍指数对嗓音外科手术效果评估的价值

目的运用改良中文嗓音障碍指数量表,结合客观检查手段,评估嗓音障碍指数对嗓音疾病患者临床疗效分析的价值。方法 50例嗓音疾病患者手术前后分别进行自我评估、声学分析和喉镜检查。自我评估采用嗓音障碍指数(voice handicap index,VHI)量表中文版,包括功能(F)、生理(P)、情感(E)三方面评分,其总和记为T,其中,P+F=TvH;通过Dr.Speech嗓音分析软件对患者的嗓音样本进行声学分析,观察基频微扰(jitter)、振幅微扰(shimmer)、标准化噪声能量(normalized noise energy,NNE)三个指标。纤维喉镜检查主要观察声带闭合情况,记为C。结果 VHI量表中剔除了情感(E)方面后的嗓音自我评估分数,F、P、TvH之间的相关性良好,F、P、TvH与jit-ter、shimmer、NNE之间有良好的相关性,声带闭合程度(C)与VHI量表中的F、P、TvH以及jitter、shimmer、NNE之间有良好的相关性。结论改良的中文VHI量表,可有效地评估嗓音疾病严重程度及临床疗效,有较高的临床应用价值。     

用于治疗尖锐湿疣的HPV6型L2△N360E7E6融合蛋白的原核表达及其免疫效果的初步评价

目的 原核表达人乳头瘤病毒（HPV）6型L2AN360E7E6融合蛋白并对其免疫效果进行初步评价.方法 用重叠PCR将HPV6b 12（1～360 bp）、E7、E6三个基因片段融合,原核表达HPV6bL2△N360E7E6融合蛋白,蛋白纯化后与Al（OH）3、CpG佐剂配伍肌内注射免疫C57BL/6小鼠,使用IFN-γ ELISPOT与ELISA分别对其细胞免疫和体液免疫效果进行评价.结果 蛋白＋CpG佐剂组与其他免疫组相比,针对E7与E6均有明显较强的细胞免疫反应;各免疫组均能检测到高滴度的抗L2的抗体,但各组之间无明显差异.结论 利用pQE30原核表达系统成功克隆、表达和纯化了HPV6bL2△N360E7E6融合蛋白,且该蛋白与合适佐剂配伍能在C57BL/6小鼠体内诱发强的细胞免疫和体液免疫反应,为该蛋白的后期研究奠定了基础.     

人乳头瘤病毒18型E6、E7蛋白T细胞表位筛选

目的 筛选人乳头瘤病毒18型E6、E7蛋白在小鼠中的T细胞表位.方法 以重组痘苗病毒rVVJ18 E7、E6分别免疫C57BL/6和BALB/c小鼠,利用覆盖E6和E7蛋白全长序列的肽库或截短的多肽,用酶联免疫斑点方法 （ELISPOT）和细胞内因子染色检测其所诱发的细胞免疫反应.结果 重组痘苗病毒rVVJ18 E7、E6免疫的两种品系小鼠均可检测到E6肽库刺激产生的特异性细胞免疫反应,经筛选确定E667-75（KCIDFYSRI）为C57BL/6小鼠、E660-68（IPHAAGHKC）为BALB/c小鼠识别的CD8＋的T细胞表位.两种小鼠中均未检测到E7蛋白诱发的细胞免疫反应.结论 筛选到分别被BALB/c和C57BL/6小鼠识别的两条针对E6蛋白的不同T细胞表位,为今后评价HPV18疫苗中E6蛋白的细胞免疫效果提供了实验依据.     

P糖蛋白与Survivin在喉鳞癌中的表达及临床意义

目的 探讨P糖蛋白、Survivin在喉鳞癌及喉黏膜正常上皮中的表达差异;两者在喉鳞癌中的表达与临床病理特征的关系;两者表达间的相关性.方法 应用免疫组化染色技术检测P糖蛋白和Survivin在86例喉鳞癌及32例喉黏膜正常上皮组织中的表达.结果 P糖蛋白及Survivin在喉鳞癌组织中阳性表达率均高于喉黏膜正常上皮组织(P<0.05);喉鳞癌组织中P糖蛋白、Survivin阳性表达率与肿瘤临床分期、组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05);P糖蛋白与Survivin在表达水平上呈正相关(r=0.411,P<0.01).结论 P糖蛋白和Survivin的高表达可能在喉鳞癌病情进展中起一定作用,均可作为评估喉鳞癌临床病理特征的有效生物学标志.     

The expression and preliminary evaluation of HPV6bL2△N360E7E6 fusion protein in E.coli for genital warts

Objective To express HPV6bL2△N360E7E6 fusion protein in E.coli and preliminarily evaluate its immune effect.Methods Three HPV6b gene fragments,which were L2(1-360 bp),E7 and E6,were fused by overlapping PCR,then were inserted into a prokaryotic expression vector and expressed in E.coli.C57BL/6 mice were immunized with purified fusion protein plus Al(OH)3 and/or CpG adjuvants through intramuscular route,the cellular and humoral immune responses were detected by IFN-γ ELISPOT and ELISA respectively.Results Protein plus CpG adjuvant could induce the strongest cellular immune response to E7 and E6,high antibody titer against L2 could be detected in all immunized groups but there were no significant difference among these groups.Conclutions HPV6bL2△N360E7E6 gene was successfully cloned into pQE30 vector and expressed in E.coli,the fusion protein was also purified and proved that could induce strong cellular and humoral immune responses with appropriate adjuvant in C57 BL/ 6 mice and could be used for future research.