志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(DnaK)多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备小鼠抗志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(Dna K)的多克隆抗体,并鉴定其特异性和效价。方法 PCR扩增M90T中的基因dna K插入到原核表达载体p ET-24a中,获得p ET24a-dna K重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和柱纯化融合蛋白Dna K-His。将纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清。用免疫印迹法、ELISA和免疫荧光技术鉴定抗血清的特异性和效价。结果重组质粒p ET24a-dna K在大肠杆菌BL21(DE3)中可以高效表达。用纯化的融合蛋白Dna K-His免疫小鼠制备得到的多克隆抗体能特异性低检测志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白,能有效地用于免疫印迹法、ELISA和免疫荧光等试验。结论成功制备了抗志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白的小鼠多克隆抗体。     

福氏志贺菌5a型M90T株GAPDH蛋白多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备高效的福氏志贺菌5a M90T3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的多克隆抗体,并对其特异性进行评价。方法提取M90T的全基因组,采用PCR法扩增M90T中的基因gapA克隆到原核表达载体pET-24中,重组质粒转入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,条件优化后纯化GAPDH-His融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体。Western blot法、ELISA鉴定获得的抗血清。结果成功构建了原核表达载体pET24a-gapA,通过一系列诱导条件的优化,确定可溶性条件为30℃、1 mmol/L IPTG诱导2 h。用纯化的融合蛋白GAPDH-His作为抗原免疫小鼠制备多克隆抗体,Western blot法、ELISA证明多克隆抗体制备成功。结论成功制备了福氏志贺菌5a M90T特异性的小鼠多克隆抗体。     

高致病性禽流感H5N1NP蛋白与NIK蛋白相互作用初步研究

目的 研究高致病性禽流感H5N1(A/goose/Jilin/hb/2003)核蛋白(NP)与NF-κB 诱导激酶(NIK)是否存在蛋白质相互作用,探讨H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.方法 从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的总RNA中经逆转录和PCR获得NIK的全长cDNA双链片段,分别以其和pcDNA3-Flag-NP载体为模板,pCMV-Myc-N和pGEX-4T-1为载体,构建真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP (GST-NP),并通过免疫共沉淀及GST pull-down实验检测H5N1 NP和NIK之间是否存在相互作用,利用双荧光素酶报告基因系统检测H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.结果 免疫共沉淀及GST pull-down实验表明,构建的真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP(GST-NP)均能正确表达,H5N1 NP与NIK之间存在相互作用;报告基因结果显示,H5N1 NP蛋白能明显抑制NIK诱导的NF-κB转录活性.结论 H5N1 NP与NIK之间存在蛋白质相互作用,并抑制NIK诱导的NF-κB转录活性,为进一步研究H5N1的致病机制打下基础.     

门诊治疗科雷氏骨折116例分析

目的：：观察门诊采用手法复位后给予高分子夹板固定治疗科雷氏骨折的临床效果。方法：回顾分析我院外科门诊于2009年1月-2014年1月治疗的116例科雷氏骨折患者的临床资料,采用手法复位治疗,复位后给予高分子夹板固定6周。结果：116例科雷氏骨折患者全部复位成功,治疗优良率为100%(116/116),与治疗前比较患者的掌倾角、尺偏角明显改善。结论：门诊采用手法复位及高分子夹板固定的方法治疗科雷氏骨折简单易行,临床治疗效果良好,值得推广应用。     

嗜麦芽寡养单胞菌L1基因克隆及其结构功能关系

目的：建立临床分离嗜麦芽寡养单胞菌L1酶的三维空间结构,并预测其活性基团。方法：PCR法扩增L1基因,通过克隆、测序、序列比对获得其基因序列和氨基酸残基;应用InsightⅡ软件构建L1酶的三维结构。结果：野生型L1酶的分子整体形状为“αβ／βα“丝带状”,活性中心由15个残基组成。结论：Asp74在酶活性中心外,但与酶活性中心的残基His105及His110之间存在相互作用,可能对酶活性产生影响。     

一种基于卷积神经网络的大肠杆菌和志贺菌基因组鉴别方法

目的 利用深度学习方法,鉴别基因组相似度很高的大肠杆菌和志贺菌,为临床诊断和疫情防控提供参考依据。方法 提出一种迁移学习大规模预训练蛋白质语言模型的卷积神经网络（CNN）,用于细菌类型鉴别,该方法可在属水平上实现对细菌类型的快速准确鉴别。为了验证模型的可靠性,该研究从美国国家生物技术信息中心（NCBI）下载相关细菌的全因组数据,并选择相似度很高的大肠杆菌和志贺菌的全基因组蛋白质序列作为实验样本。结果 在2960个高组装质量和4945个包含低组装质量的菌株上进行分类实验时,该方法在属水平上的分类准确率分别达到97.13%和95.56%,优于现有的其他方法。结论 这种基于深度学习的细菌类型鉴别方法通过自监督预训练技术与迁移学习相结合,可以学习到人类无法直观统计和观察的高维特征差异,表现出巨大潜力。此外,该方法对所用菌株的基因组序列的拼装完成度要求较低,适用范围广,更具实际应用价值。     

比较经皮微创与开放椎弓根钉内固定术治疗脊柱骨折的效果

目的 比较经皮微创与开放椎弓根钉内固定术治疗脊柱骨折的效果.方法 选取2017年7月至2020年5月本院收治的102例脊柱骨折患者作为研究对象,按照随机数字表法分为实验组(n=52)与对照组(n=50).实验组采用经皮微创椎弓根钉内固定术治疗,对照组采用开放椎弓根钉内固定术治疗,比较两组治疗效果、围术期指标、影像学指标、NRS评分及并发症发生率.结果 实验组治疗总有效率为96.15％,明显高于对照组的82.00％,差异具有统计学意义(P<0.05).实验组手术时间、住院时间、切口长度均短于对照组,术中出血量、术后引流量少于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组Cobb's角均降低,椎体前缘高度、椎体矢状面指数均升高,且实验组Cobb's角低于对照组,椎体前缘高度、椎体矢状面指数高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组NRS评分均降低,且实验组低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).实验组并发症发生率为5.77％,明显低于对照组的22.00％,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 与开放椎弓根钉内固定术比较,经皮微创椎弓根钉内固定术治疗效果更显著,术中出血量更少,住院时间更短,能显著改善椎体情况,降低术后并发症发生率,患者康复更快,安全性较高,值得临床推广应用.     

手术治疗科雷氏骨折58例临床分析

目的:探讨手术治疗科雷氏骨折(Colles1骨折,伸直型桡骨远端骨折)的临床效果.方法:回顾分析我院于2009年1月-2014年1月手术治疗的58例科雷氏骨折患者的临床资料,经皮闭合克氏针内固定术治疗3例、切开复位钢板内固定术治疗48例、外固定支架固定术治疗7例.结果:58例患者全部痊愈出院,随访3-12个月.治疗后优良率为100％,与治疗前比较患者的掌倾角、尺偏角明显改善.结论:对在门诊不能治疗的科雷氏骨折患者,采用手术治疗的方法能取得满意的临床效果,值得临床推广应用.     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定

目的：构建肠出血性大肠杆菌（ EHEC） O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备NleB1的抗血清。方法从EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因组中PCR扩增出编码nleB1的990个碱基序列,构建原核表达载体pET24a-nleB1,将构建的重组表达载体的质粒pET24a-nleB1转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,利用异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白His-NleB1表达,并利用镍柱进行亲和层析纯化和切胶纯化,以纯化后的融合蛋白His-NleB1为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清。 Western印迹和ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建了pET24a-nleB1原核表达载体,纯化得到融合蛋白His-NleB1,进而免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,Western印迹和ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗体,为研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基础。