DAB2IP基因沉默引起膀胱癌细胞辐射耐受与化疗抵抗

目的 观察DAB2IP基因对膀胱癌细胞放化疗敏感性的影响.方法 RNA干扰建立DAB2IP表达抑制的膀胱癌细胞,克隆形成实验比较不同DAB2IP表达的细胞对射线放射敏感性的差异,噻唑蓝方法检测不同DAB2IP表达的细胞对常用化疗药物敏感性的变化.结果 DAB2IP基因沉默造成细胞对射线与化疗药物均出现耐受.结论 DAB2IP可能用作预测膀胱癌患者放射或化学治疗预后的分子标志物.     

放射耐受性肝癌细胞亚株的筛选与建立

目的 诱导并筛选具有放射耐受性的单克隆肝癌细胞亚株,为进一步研究细胞抗放射生物学变化构建实验模型。方法 采用人肝癌HepG2细胞进行放射诱导,分次照射,累积吸收剂量为60 Gy。经细胞克隆筛选、建株。进行形态学和细胞超微结构观察,同时测定细胞生长特性以及放射敏感性变化与亲本HepG2细胞进行比较,并观察2 Gy照射后细胞内放射相关抗拒基因mRNA表达水平的变化,对该细胞亚株进行鉴定,定名为HepG2/R60细胞亚株。结果 通过2 Gy×30次分割照射诱导,成功建立HepG2/R60细胞亚株。细胞鉴定结果显示,与亲本HepG2细胞比较,细胞形态不规则,伪足伸展,折光度清晰,细胞间连接较为松散。透射电镜观察HepG2/R60细胞表面微绒毛明显增多,线粒体丰富,高尔基体发达。细胞生长延缓,倍增时间明显延迟为34.9 h,与HepG2细胞比较,放射敏感性显著降低,放射相关抗拒基因表达明显升高。结论 成功建立具有放射耐受性的人肝癌细胞亚株:HepG2/R60。经鉴定与其亲本的HepG2细胞比较,其放射敏感性显著降低。     

BSO增强MRP过表达肺癌细胞对顺铂敏感性的作用机制研究

目的：评价使用丁胱亚磺酰亚胺(BSO)克服肿瘤细胞由于高表达MRP而引起对顺铂耐药的可行性，并初步探讨其增敏的作用机制。方法：用基因转染的方法成功建立了一株mrp基因高表达的肺癌细胞株(SPC-A-1／MRP)的基础上，检测BSO作用前后转染细胞对顺铂敏感性的差异，从酶活性测定和转录水平观察了上述过程中谷胱甘肽解毒系统的变化。结果：实验表明同对照(转染不含目的基因的空载质粒)的SPC-A-1／MRP(一)细胞相比，SPC-A-1／MRP细胞对顺铂出现了明显的耐受，BSO可以有效增强MRP高表达的细胞对顺铂的敏感性。BSO通过显著抑制由顺铂引起的肿瘤细胞内GSH解毒系统的活化和MRP蛋白含量升高，有效的克服了肿瘤细胞接触顺铂后过表达MRP而引起的化疗耐受。结论：高表达MRP可以引起肿瘤细胞对顺铂的耐受，BSO针对MRP介导的顺铂耐药有很好的增敏效果。     

一氧化氮合酶对丝裂霉素C衍生物629细胞毒性的影响

目的评价一氧化氮合酶对丝裂霉素C(MMC)衍生物——5-氮丙啶基-3-羟基-1-甲基吲哚-4，7-二酮(629)的细胞毒性和乏氧选择性的影响。方法以人纤维肉瘤细胞株HT1080和其诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染的细胞克隆(iNOS9，iNOS12)为实验对象。四噻唑蓝(MTT)法检测MMC与其衍生物629的细胞毒性，比较乏氧和有氧条件下两种化合物半数抑制率(IC₅₀)的差异；琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术观察629作用后肿瘤细胞脱氧核糖核酸(DNA)的损伤情况，分析不同iNOS活性的肿瘤细胞对629敏感性的差异及原因。结果629的IC₅₀较MMC低数百倍，是高细胞毒性的化合物；随着细胞中iNOS活性的增加，629对乏氧细胞的选择性损伤作用显著增强，DNA电泳显示629引起细胞坏死，造成细胞周期G₂/M阻滞。结论MMC衍生物629是具有更高乏氧选择性的增敏化合物。     

诱导型一氧化氮合酶对乳腺癌细胞化学敏感性的影响

目的 分析可诱导一氧化氮合酶（iNOS）对乳腺癌细胞化学敏感性的影响，评价新型蒽醌类生物还原化合物RHl对乳腺癌细胞毒性和乏氧选择性。方法 实验以人乳腺癌细胞MDA-MB-231”和其转染空载体的对照组细胞（PEF-vector）及一氧化氮合酶基因转染的细胞克隆（iNOS10）为实验对象。噻唑蓝（MTT）法比较不同酶活性的细胞克隆对顺铂等抗肿瘤药物和丝裂霉素C（MMC）衍生物-2，5-二氮丙啶-6-羟甲基-3-甲基苯-1，4-二酮（RH1）的敏感性的差异。结果同对照组细胞相比，iNOS10细胞对顺铂等几种抗肿瘤药物呈现不同程度的耐受，而对阿霉素的敏感性有所增强（P〈0．05），用L-甲基盐酸精氨酸抑制细胞中NO的合成，则会降低iN-0S10细胞对阿霉素的敏感性，而对其他几种抗肿瘤药物的敏感性无显著影响；生物还原化合物RH1是高毒性的化合物，IC50较MMC下降577倍；乏氧条件下，细胞对RH1的化学敏感性显著增强，流式细胞术显示RH1可以引起iNOS10细胞周期的G2／M阻滞。结论 MMC衍生物RH1是高细胞毒性的化合物，可诱导一氧化氮合酶活性的增强，也可引起肿瘤细胞对部分抗肿瘤药物的敏感性降低，且对高表达iNOS的细胞具有乏氧选择性的损伤作用。     

转染结构性雄烷受体对丝裂霉素C和5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮的细胞毒性的影响

研究丝裂霉素C(MMC)及其衍生物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮［5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione，629］的细胞毒性，以及结构性雄烷受体(constitutive androstane receptor，CAR)转染对其生物学效应的影响。将质粒mCAR/pCR3转染HepG2细胞，经G418耐药性筛选获得转染CAR的g2car细胞，以转染空载体pCR3(HepG2/pCR3)作为对照。用RT-PCR检测质粒和CYP2B6 mRNA的表达，用MTT法评价MMC和629对g2car细胞和HepG2细胞在有氧和乏氧条件下的细胞毒性。RT-PCR检测到CAR和CYP2B6 mRNA在g2car细胞中有表达，在HepG2细胞中无表达；此外，在乏氧情况下，MMC和629的细胞毒性比在有氧情况下均有所增加(p<0.05)，并且转染CAR以后，两者的细胞毒性均增加，但对MMC的影响较明显(p<0.05),对629的影响不明显(p>0.05)。提示CAR可在转录水平调节药物的代谢，提高药物的毒性；CYP2B6可以主要代谢MMC，但不主要代谢629。转染CAR基因可以增加细胞CYP2B6 mRNA的表达，并可引起MMC和629毒性的改变。     

DAB2IP基因与肿瘤

DAB2IP是新发现的抑癌基因,是Ras-GTP酶激活蛋白家族的新成员。它通过介导多种肿瘤相关信号通路,如MAPK-ERK,PI3K-Akt,ASK1-JNK和GSK-3β-β-catenin等,影响细胞的增殖、存活和凋亡。研究发现DAB2IP在多种肿瘤中表达下调,包括前列腺癌、乳腺癌、肺癌、胃肠肿瘤、肝细胞癌以及成神经管细胞瘤等,并且与肿瘤的进展及预后密切相关。本文拟对当前关于DAB2IP与肿瘤相关性的研究文献进行汇总综述,讨论DAB2IP作为分子标志物判断肿瘤恶性进展以及治疗预后的可行性。     

诱导型一氧化氮合酶影响吲哚醌类化合物抗肿瘤活性的实验研究

观察诱导型一氧化氮合酶(iducible nitric oxide synthase,iNOS)对新型吲哚醌类生物还原化合物630和630Ac的抗肿瘤活性和乏氧选择性的影响。以人纤维肉瘤细胞HT1080及其iNOS基因转染的细胞克隆为研究对象,噻唑蓝法检测不同iNOS活性的细胞克隆对化合物630和630Ac化学敏感性的差异;比较乏氧和有氧条件下半数抑制浓度(IC50)的差异;流式细胞术观察化合物对细胞周期的影响。630Ac和630在实验中均显示出较强的抗肿瘤活性,且630Ac的细胞毒性强于630;而iNOS转染的细胞对630和630Ac敏感性较亲本细胞HT1080有所下降,IC50分别高1~7倍左右。氧对630的细胞毒性无显著影响,而630Ac则具有较好的乏氧选择性细胞毒作用,尤其是对iNOS转基因细胞,有氧和乏氧条件下IC50相差4~7倍。提示iNOS活性的增强会引起肿瘤细胞对化合物630和630Ac敏感性的降低。     

γ射线照射后乏氧诱导因子1α对肝癌细胞存活的影响

目的 研究辐射对肝癌细胞内乏氧诱导因子1α(HIF-1α)的调节作用以及HIF-1α的变化对肝癌细胞存活的影响。方法 采用CoCl₂化学模拟乏氧预处理人肝癌HepG2细胞,经不同剂量的γ射线照射后,通过细胞集落形成实验,比较有氧及化学模拟乏氧条件下细胞存活水平的差异。同时采用RT-PCR和Western blot方法检测照射后细胞内HIF-1α在转录和翻译水平上的变化。结果 在化学模拟乏氧条件下,细胞存活分数(SF)显著增加,与有氧对照组比较差异有统计学意义,且两种不同作用条件下的SF比值(SF_CO/SF_O2)随照射剂量逐渐增加,同时,经照射后细胞内的HIF-1α表达升高,并呈剂量依赖模式,HIF-1α的表达与照射后的细胞存活水平具有较强的关联性。结论 辐射可诱导肝癌细胞内HIF-1α的表达升高,HIF-1α的表达变化可能影响细胞的存活水平。     

多药耐药相关蛋白的生物学特性与作用机制的研究进展

多药耐药性相关蛋白（MRP1）是ATP结合的盒式（ABC）膜转运蛋白家族成员,基因敲除实验表明MRP1存在与否不影响小鼠正常的生存和各项生理指标,生理条件下,它可能作为耗能泵游离的谷胱甘肽和某种尚不了解的内源性代谢物一起泵出细胞外,维持细胞外的还原环境。MRP1通过介导细胞内药物排出,改变药物细胞内分布引起肿瘤耐药。