TLR2胞外段特异性抗体对TLR2激动剂诱导的炎症和促过敏反应的抑制作用

目的:观察小鼠TLR2胞外段抗原肽特异性抗体对TLR2激动剂诱导的炎症和促过敏反应的影响。方法:用小鼠TLR2胞外段单表位抗原肽(T20)免疫动物制备抗体(T20抗体);体外观察T20抗体对PGN和LTA刺激RAW264.7细胞生成TNF-α和IL-6的影响,用ELISA法检测各组TNF-α和IL-6量;体内观察T20抗体对OVA致敏小鼠PGN致死性攻击的影响,记录各组直肠温度变化和死亡率。结果:获得小鼠TLR2特异性T20抗体;该抗体可抑制TLR2激动剂(PGN和LTA)对相应靶细胞的刺激作用,使其生成的TNF-α和IL-6显著降低;体内实验证实T20抗体对PGN加剧的过敏反应具有抑制作用。结论:T20抗体可特异结合小鼠TLR2,抑制TLR2激动剂诱导的炎症及TLR2激动剂加剧的过敏反应。     

模拟肽聚糖表位的序列分析及其抗原性鉴定

目的:在线预测肽聚糖(PGN)模拟抗表原位并鉴定其抗原性。方法:利用抗PGN单克隆抗体从12线性噬菌体随机展示肽库中筛选模拟PGN表位的阳性克隆,对阳性克隆进行DNA测序和推导氨基酸序列,结合生物信息学分析阳性序列GRWxHxVxWAGL的抗原性以及T细胞表位,根据分析对阳性序列进行修饰与合成,ELISA法鉴定阳性序列的抗原性。结果:经对噬菌体12线性肽库的3轮筛选,夹心ELISA鉴定得到16个与抗PGN单克隆抗体结合的克隆,DNA测序并推导氨基酸序列,该序列与前期具有抗金黄色葡萄球菌活性序列No.31(ATWxHxLxSAGL)含有保守序列WxHx…AGL。在线分析(http://bio.dfci.harvard.edu/Tools/antigenic.pl,www.syfpeithi.de,http://www.darrenflower.info/mhcpred)表明,含保守序列的阳性序列GRWxHxVxWAGL包含与人和小鼠MHC结合表位(-WxHxVxW-),C端加入AGGS后具有T细胞表位(DNAstar),据此合成线性肽Biotin-GRWxHxVxWAGLAGGS(命名为SP39)。ELISA结果显示,SP39能与抗PGN单抗及抗S.aureus全菌多抗结合,PGN能抑制SP39与抗PGN单克隆抗体结合。结论:经噬菌体肽库筛选获得阳性序列GRWxHxVxWAGLAGGS,该序列可能模拟PGN抗原表位。     

晚期氧化蛋白产物模拟表位的初步研究

目的利用噬菌体展示肽库筛选技术获得模拟人晚期氧化蛋白产物（advanced oxidation protein products,AOPP）表位的序列,探索该表位的分布与表达。方法以抗晚期氧化蛋白产物多克隆抗体为靶,对噬菌体随机12肽库进行免疫亲和筛选,ELISA鉴定阳性噬菌体克隆特异性;对阳性克隆进行DNA测序并推导其氨基酸序列,利用生物信息学技术检索其分布与相似性。结果经3轮亲和筛选获得18株与靶分子特异结合的阳性噬菌体克隆,阳性率为62.07%。竞争ELISA结果表明,AOPP可有效抑制阳性噬菌体克隆与抗体结合,其中对No.6克隆的IC50达到0.2ug/ml,提示其能模拟AOPP表位。经DNA测序并推导氨基酸序列,得到LXDMLXD保守序列（X为任意氨基酸）;发现该序列不存在于正常人与哺乳动物的蛋白分子,但与某些真菌及寄生虫蛋白分子有同源性。结论通过噬菌体肽库筛选技术获得模拟AOPP表位并具良好抗原性的短肽序列;证实该结构不存在于正常人与哺乳动物蛋白分子,正如AOPP并非正常组织蛋白。     

在MRSA系统性感染模型中Pam3CSK4预处理降低小鼠肾组织的炎症反应

目的:在耐甲氧西林金葡菌(MRSA)系统性感染模型中,观察低剂量TLR2激动剂Pam3CSK4预处理对小鼠肾组织中炎症反应的影响并初步探讨其机制。方法:于感染前48 h、24 h对BALB/c小鼠行尾静脉注射Pam3CSK4(10μg/100μl/只);2×10~7CFU/只MRSA经静脉感染小鼠,ELISA和荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测细胞因子水平,Q-PCR检测TLR2、IRAKs等相对表达量,Western blot检测NF-κB p65磷酸化、IRAK-M及A20表达。结果:与对照组相比,预处理组在感染6 h后肾组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、CCL3和IFN-γ含量显著减少,i NOS表达量降低,IL-10和TGF-β表达量增高,TLR2表达下降;处理组肾组织在感染12 h后IRAK-1表达无明显增加,而IRAK-M表达量显著增加;Western blot结果显示Pam3CSK4预处理组NF-κBp65磷酸化降低,IRAK-M表达明显增高。结论:Pam3CSK4预处理降低MRSA系统性感染小鼠肾组织的炎症反应,这可能与诱导IRAK-M表达相关。     

干细胞样记忆性T细胞的研究进展

［摘要］干细胞样记忆性T细胞（stem like memory T cells, TSCM）是近年来发现的一种具有明显干细胞特性的记忆性T细胞亚群，除了具有记忆性T细胞快速高效的再次免疫应答的特点外，它还具有极强的自我更新、持续增殖分化等一系列干细胞特点。本文针对其分化、功能特点，在疾病发生发展中的作用和在制备预防性疫苗、肿瘤免疫治疗中的应用等方面进行综述，为其研究与应用提供相关的线索。     

硕士研究生免疫学实验教学改革初探

研究生教育在现代医学教育中占有举足轻重的地位,结合南方医科大学硕士研究生免疫学实验课的教学现状,从教学内容、教学方式等方面来进行实验课的教学改革,开展了以综合性、设计性实验为主的教学模式,提高了研究生实验课教学效果.     

八年制医学生自身因素影响PBL教学评价的研究

目的 PBL教学作为以"学生为中心"的教学方式,学生取代了教师为主的关键地位,然而学生自身因素成为PBL教学过程中的重要因素,文章分析医学八年制学生自身内在因素对PBL教学效果的影响。方法采取多中心调查方式,选取全国多所高校采取PBL教学方式的八年制医学生,通过网络问卷调查形式采集数据,并对其进行统计分析,确定影响教学效果最明显的因子。结果在各种学生自身内在因素中,自学能力、合作精神、PBL教学经验对PBL教学效果有显著影响,而性别,学生绩点并不影响PBL教学效果。结论通过本研究,发现多个影响教学效果的学生自身因素,导师可通过增强学生的自学能力,加强小组合作精神,提高学生团队协作能力,从而发挥PBL最大的教学优势。     

头颈部鳞状细胞癌巨噬细胞关键基因的筛选分析

目的 应用生物信息学的方法分析筛选头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)巨噬细胞中的潜在关键基因,为HNSCC的预后提供靶点。方法 基于在线数据库,利用一致流形近似与投影(UMAP)降维,捕获巨噬细胞群;进一步通过t-分布随机近邻嵌入(tSNE)聚类降维分析肿瘤组织与正常组织细胞群分布的变化并筛选差异基因的表达;运用Monocle包对关键风险基因在不同发育阶段细胞中的表达情况进行分析;利用Kaplan-Meier Plotter在线数据平台分析生存曲线;运用空间转录组技术验证关键基因在组织中的表达映射;多色荧光免疫组化进行临床样本的验证。结果 捕获得到7个巨噬细胞亚群,其中第1亚群仅存在于肿瘤组织中且分泌型磷蛋白1(SPP1)基因高富集。SPP1高表达趋向巨噬细胞M2型极化并处于细胞分化的终末阶段。SPP1+巨噬细胞糖酵解、缺氧、上皮间质化、血管生成等功能活跃,与HNSCC患者的预后呈负相关。结论 SPP1可能成为HNSCC中有价值的预后生物标志物。