中国广东人CYP2F1基因遗传多态性研究

目的检测广东地区正常人群和鼻咽癌患者中细胞色素P450酶系CYP2F1基因的多态性，并分析该基因遗传多态性与鼻咽癌易感性的关联。方法采用直接测序法检测40例鼻咽癌患者全血标本中CYP2F1基因全部10个外显子的多态性变化。对于等位基因频率较高的多态性位点，进一步采用错配聚合酶链反应．限制性片段长度多态性检测368例鼻咽癌患者和344名正常对照人群中该位点的等位基因频率。结果在40例鼻咽癌样本中，共检测到CYP2F1基因的35个单核苷酸多态性。其中，10个单核甘酸引起编码的氨基酸改变，1个移码突变，15～16bp之间插入C引起移码突变（15-16ins C），该等位基因频率为25％。但病例-对照分析却未能显示该位点突变与鼻咽癌易感的相关性（P〉0．05）。结论中国广东人的CYP2F1基因遗传多态性位点较多，但暂未发现与鼻咽癌的易感性关联的单一多态位点，多个多态性位点或不同基因多态性位点的协同互补作用可能才是鼻咽癌发生发展的关键影响因素。     

胃癌7号染色体长臂的杂合性缺失分析

目的:检测胃癌患者7号染色体长臂微卫星位点的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH),以初步确定7号染色体长臂上与胃癌相关基因连锁最密切的微卫星多态位点及LOH的临床意义.方法:在70例原发性胃癌中应用多重PCR技术扩增覆盖整个7号染色体长臂的9个微卫星位点(平均遗传距离为10cm),聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物,用GeneScan、Genotyper软件进行分析.结果:9个微卫星位点的LOH均可发生于原发性胃癌,总的LOH频率为34.3%(24/70),其中D7S486和D7S798位点的LOH频率较高,分别为24.0%(12/50)和19.2%(5/26);总的LOH频率随临床分期而显著增高(P=0.046),D7S486位点的LOH频率在淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P=0.015).结论:在7号染色体长臂D7S486和D7S798位点附近,可能存在与胃癌发展相关的抑癌基因.     

树突状细胞诱导的CIK细胞对肺癌生长的抑制作用

目的探讨树突状细胞诱导的CIK细胞对肺癌移植瘤细胞生长的抑制作用。方法建立肺癌皮下移植瘤模型;分离患者外周血单个核细胞,培养成熟的DC及CIK细胞;用反复冻融肺癌组织的方法制备肿瘤细胞裂解物并负载DC,诱导DC-CIK细胞;进行肺癌移植瘤内注射,比较两组裸鼠移植瘤体积及重量,观察其抑瘤情况。结果 DC-CIK细胞对肺癌皮下移植瘤细胞的抑制率为70.3%,抑制作用明显强于DC或CIK细胞的抑制作用(P0.05)。结论树突状细胞诱导的CIK细胞能够有效抑制肺癌移植瘤生长。     

CEQ8000遗传测序仪的日常维护和常见问题的解决方法

近几年来,随着分子生物学的发展,基因测序工作已越来越成为生命科学研究领域、临床工作等所要开展的重要环节.特别是随着基因组计划的顺利实施和完成,测序工作以及对基因组序列的了解已更成为科研人员所需的重要信息.……     

ASSOCIATION OF pIgR POLYMORPHISMS WITH NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

Objective： Epstein-Barr virus （EBV） associated nasopharyngeal carcinoma （NPC） is an important squamous cell cancer endemic in southern China and Southeast Asia. pIgR （polymeric immunoglobulin receptor） gene plays central roles during immune responses and EBV inflammatory and therefore is a good candidate susceptibility gene for NPC. This study is to evaluated potential associations between pIgR gene and NPC susceptibility. Methods： Sequencing was used to identify multiple single nucleotide polymorphisms （SNPs） within the exon regions of pIgR in Guangdong population. Four SNPs were genotyped in 528 NPC patients and 408 normal individuals to perform case-control study. Results： There was no statistical difference in the allele frequencies of each SNP （P〉0.05）. After categorized into 2 groups by age of 45 y, in the group of age below 45 the minor allele T frequency of C888oT was 7%, whereas 4% in controls, with significant difference （P〈0.05）. The Odds Ratio （OR=1.84） also showed higher risk of NPC with individuals carried the minor alleles. Conclusion： The result has proved that SNP C8880T is associated with NPC susceptibility and pIgR gene might play a certain role in oncogenesis and development of NPC.     

鼻咽癌全基因组杂合性缺失分析

目的：分析鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPS)全基因组染色体杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH),定位NPC发生高频率LOH的区域,为定位NPC相关基因提供分子遗传学依据。方法：用PCR微卫星多态性分析（335个位点）技术检测98例NPC肿瘤基因组DNA等位基因缺失。结果：在22对染色体中,19对染色体在所选取位点中有至少1个位点LOH频率≥30%,3对染色体（15号,20号和22号）无LOH频率大于30%的位点;在335个位点中,4个位点LOH频率≥60%,其中3个在3号染色体,1个在9号染色体;5个位点LOH频率介于50%-59%,其中3个在3号染色体,5号和11号染色体各1个位点;22个位点LOH频率介于40%-49%,52个位点LOH频率介于30%-39%,轼52个位点LOH频率低于30%,提示为背景缺失;LOH频率≥30%的位点主要集中于12个染色体臂,分布于：1p36-34,3p24-26,3p14-21,3q25-27,4q35-31,5q15-21和5q32-33,8p22-23,9p21-23和9q33-34,11p12-14,11q13-23,13q13-14和13q31-32,14q11-13,14q23-24,14q32。本研究新报道在染色体区带1p,5q和19q等发生高频率LOH,LOH精细图谱提示这些区域内可能存在与NPC相关的TSG。结论：NPC肿瘤细胞在多染色体区带发生高频率LOH是常见的分子事件,提示在这些缺失区,可能存在与NPC发生,发展过程中起重要作用的肿瘤抑制基因。     

人工骨成骨模型免疫组织化学染色方法的构建

目的以大鼠单纯胫骨骨折后加入骨粉复合物为模型,观察乙二胺四乙酸(EDTA)-2Na脱钙和混合酸脱钙后免疫组织化学检测的效果。方法将骨粉复合物放置于大鼠左侧胫骨的骨块缺损中建立人工骨成骨模型,将模型分为两组(每组标本10例),实验组用EDTA-2Na脱钙,对照组采取混合酸脱钙后分别观察两组的免疫组织化学检测效果。结果EDTA脱钙组骨小梁结构保存完整,阳性表达较多。混合酸脱钙后,骨结构破坏较多,抗原破坏较严重,阳性表达明显减少。结论EDTA脱钙优于传统的脱钙方法,更适合于骨组织脱钙和免疫组织学化制片。     

多聚免疫球蛋白受体基因的多态性与鼻咽癌易感性的关系

背景和目的:多聚免疫球蛋白受体(polymericimmunoglobulinreceptor,pIgR)基因在机体免疫应答过程中发挥重要作用,并且与EB病毒(Epstein鄄Barrvirus,EBV)的感染途径密切相关,因而是研究鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)遗传易感性的理想候选基因。本研究旨在探讨pIgR基因与NPC遗传易感性之间的关系。方法:针对预选的4个单核苷酸多态性位点(singlenucleotidepolymorphisms,SNPs),通过PCR产物直接测序,对广东地区的528例NPC患者及408例健康人血标本DNA进行基因分型,然后采用病例鄄对照的研究方法分析等位基因频率之间的差异。结果:4个SNPs总体的基因频率分布在病例鄄对照之间无显著性差异(P>0.05);按45岁年龄分组分析,在小于等于45岁年龄组,多态性位点C8880T(Gly199同义突变)的次要等位基因T的频率在NPC患者中为7%,在健康人中为4%,病例与对照之间具有显著性差异(P<0.05),OR值(1.84)也提示携带次要等位基因T的个体患病风险增加。结论:pIgR基因外显子区域多态性位点C8880T与NPC的易感性相关,pIgR可能在NPC的发生发展中起一定作用。     

多聚免疫球蛋白受体基因的多态与鼻咽癌易感性的关系

背景和目的多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)基因在机体免疫应答过程中发挥重要作用,并且与EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)的感染途径密切相关,因而是研究鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)遗传易感性的理想候选基因.本研究旨在探讨pIgR基因与NPC遗传易感性之间的关系.方法针对预选的4个单核苷酸多态性位点(single nucleotidepolymorphisms,SNPs),通过PCR产物直接测序,对广东地区的528例NPC患者及408例健康人血标本DNA进行基因分型,然后采用病例-对照的研究方法分析等位基因频率之间的差异.结果4个SNPs总体的基因频率分布在病例-对照之间无显著性差异(P＞0.05);按45岁年龄分组分析,在小于等于45岁年龄组,多态性位点C8880T(Gly199同义突变)的次要等位基因T的频率在NPC患者中为7%,在健康人中为4%,病例与对照之间具有显著性差异(P＜0.05),OR值(1.84)也提示携带次要等位基因T的个体患病风险增加.结论pIgR基因外显子区域多态性位点C8880T与NPC的易感性相关,pIgR可能在NPC的发生发展中起一定作用.     

SARS冠状病毒spike基因DNA疫苗的初步研究

目的　构建SARS病毒spike基因片段真核表达质粒DNA疫苗;检测spike基因片段的免疫原性;筛选SARS病毒疫苗构建的理想靶抗原。方法　采用RT PCR从SARS冠状病毒北京0 1(BJ0 1)株cDNA获取了spike基因cDNA的全长D12、编码N末端氨基酸的cDNA片段D14和编码C末端氨基酸的cDNA片段D2 3;构建重组真核表达质粒pcDNA3 /D12、pcDNA3 D14、pcDNA3 D2 /3;用3种重组质粒和pcDNA3空质粒载体(对照)DNA皮下注射免疫Wistar大鼠;ELISA检测免疫后大鼠血清S蛋白特异性抗体IgG的产生;同位素51 Cr实验检测特异性CTL应答;ELISPOT检测单细胞水平IFN -γ分泌。结果　pcDNA3 /D2 3疫苗免疫组大鼠血清有S蛋白阳性抗体IgG产生、抗体滴度>10 0 0 ;脾淋巴细胞可诱导特异的CTL应答和IFN γ分泌,pcDNA3 /D2 3疫苗组与其它组之间统计分析P <0 .0 5。结论SARS冠状病毒S蛋白的C末端具有较强的免疫原性,是疫苗构建的理想候选靶抗原,本研究结果为SARS病毒的疫苗研究提供了资料。