胶质瘤干祖细胞可诱导宿主脑胶质细胞癌变

目的 探讨可移植性人癌组织重构过程中,肿瘤干细胞植入方与宿主受体间的关系.方法 将红色荧光蛋白(RFP)基因稳定转染于已建株的胶质瘤干祖细胞SU3,再将建立的SU3-RFP细胞接种于表达绿色荧光蛋白(GFP)的裸小鼠脑内.取移植瘤组织,筛选高增殖力GFP细胞,单克隆化后,鉴定细胞类型,测定其DNA含量,行染色体显带分析.并将建系的GFP细胞H1和H9分别接种于裸小鼠腋下和颅内,观察致瘤率和癌性表型.结果 在可移植性肿瘤组织中,RFP、GFP和RFP/GFP细胞的比例分别为(88.99±1.46)％、(5.59±1.00)％和(4.11±1.02)％.经2次单克隆化的宿主GFP细胞株H1和H9,在体外表现出无限增殖、接触抑制消失、超四倍体等癌细胞特征,并表达少突胶质细胞特异性标志蛋白2’,3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶(CNP).H1和H2细胞的体内致瘤率均为100％,肿瘤均向接种周围组织呈广泛侵袭性生长.结论 在可移植性胶质瘤模型中的肿瘤细胞,并非像传统观点那样均由移植的肿瘤干祖细胞产生,被接种的肿瘤干细胞侵袭的宿主脑细胞也可以转化为肿瘤细胞.     

脑膜瘤组织中HIF-1α、EphA2蛋白的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducing factor-1α, HIF-1α)与上皮细胞激酶(epithelial kinase A2, EphA2)在脑膜瘤组织中的表达,及与脑膜瘤分级、预后的关系。方法采用免疫组化SP法和Western blot法检测脑膜瘤中EphA2和HIF-1α的表达,分析HIF-1α、EphA2表达与脑膜瘤临床病理特征的关系。结果 68例脑膜瘤中,HIF-1α蛋白高表达32例(47.1%),低表达36例(52.9%);EphA2蛋白高表达35例(51.5%),低表达33例(48.5%);且HIF-1α和EphA2表达与脑膜瘤分级和复发相关(P0.01)。结论脑膜瘤组织中HIF-1α、EphA2蛋白高表达可能与脑膜瘤患者预后较差相关。     

肿瘤荧光示踪研究新进展——荧光蛋白示踪在肿瘤研究中的应用

荧光示踪细胞的方法有2种：一种是荧光染料给细胞染色，如CM．DiI、BrdU、DAPI、Hochest等。染料能直接标记细胞，但是对于增殖细胞来讲，因染料不是基因依赖，不能遗传给子细胞，因此随着细胞增殖，被标记的细胞会越来越少，只能用于短时间观察。另一种是通过载体转染荧光素酶／蛋白基因到目的细胞，     

胶质瘤干祖细胞诱导裸小鼠脉络丛细胞癌变的研究

背景与目的：探讨胶质瘤干祖细胞经荧光裸小鼠脑内移植后定居在脉络丛细胞并诱导其上皮细胞癌变的可能性及细胞融合在其中发挥的作用。方法：将人胶质瘤干细胞SU-3和标记红色荧光染料CM—Dil的鼠脑胶质瘤细胞系C6移植于表达绿色荧光蛋白（GFP）的裸小鼠脑内,用传统病理、分子免疫病理和荧光示踪技术对肿瘤细胞在宿主脑内侵袭对不同部位形成的肿瘤团块进行病理学分析。结果：接受尾状核移植的35只鼠和小脑移植的15只鼠全部致瘤．有6只尾状核移植鼠在侧脑室和第三脑室脉络丛见到肿瘤,有5只尾状核移植鼠在第三脑室脉络丛见到肿瘤,有5只小脑移植者在第四脑室脉络丛见到肿瘤。传统病理：肿瘤细胞和组织结构异形十分明显-细胞高度增生,一类是脉络丛结构基本保留,另一类是完全消失。荧光示踪：肿瘤团块中的细胞成分分为源于接种的肿瘤细胞（红色）、源于宿主的细胞（绿色）和两者的融合细胞（黄）。分子病理：肿瘤细胞高表达Nestin、Ki一67、角蛋白和GFAP。结论：根据癌干细胞（cancer stem cells,CSCs）定居于不同部位的形态学特征,尤其在脉络丛上形成的能表达相关标志蛋白的脉络丛癌样结构肿块,表明胶质瘤干细胞在特定环境下可诱导宿主细胞癌变．这一过程可能是通过细胞融合实现的,这对进一步研究胶质瘤干细胞分化走向和与宿主组织重构受定居地微生态环境影响有重要意义。     

荧光蛋白示踪在肿瘤研究中的应用

荧光示踪细胞的方法有2种:一种是荧光染料给细胞染色,如CM-DiI、BrdU、DAPI、Hochest等.染料能直接标记细胞,但是对于增殖细胞来讲,因染料不是基因依赖,不能遗传给子细胞,因此随着细胞增殖,被标记的细胞会越来越少,只能用于短时间观察.另一种是通过载体转染荧光素酶/蛋白基因到目的细胞,如荧光素酶(luciferase,Luc)基因、β-半乳糖苷酶基因(β-galactosidas,由大肠杆菌LacZ基因编码)、人胎盘碱性磷酸酶(human placental alkaline phosphatase,hPLAP)或者荧光蛋白(fluorescent protein,FP)基因等.Luc、LacZ和hPLAP的显像不仅需要固定样本,还需要外源性底物,因此不太适合活体下实时动态观察[1],因此非侵袭性非酶荧光蛋白报告基因应运而生.     

同源导入近交系绿色荧光裸小鼠Foxn1nu.B6-CAG-EGFP/SU的建立

目的建立一个能稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecence protein,EGFP)的裸小鼠近交新品系,供包括人脑胶质瘤在内的所有人类肿瘤移植实验用。方法将雌性C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)转基因小鼠和雄性Foxn1nu裸小鼠,按同源导入方法进行杂交和回交,用荧光手电筒和匹配的眼镜、多功能活体成像仪、荧光显微镜对是否表达EGFP进行鉴别,传至F10后进行遗传学检测。结果所建品系命名为Foxn1nu.B6-CAGEGFP/SU(Soochow University),14个遗传生化位点中13个表型与BALB/c(Foxn1nu)吻合,唯Pep3(肽酶-3)的电泳为b型,而标准的BALB/c近交系为a型;外周血淋巴细胞占全部有核细胞15%,T淋巴细胞仅占0.3%,与亲本的Foxn1nu一致。结论成功地建立了一个既与亲本C57BL/6-Tg N(CAG-EGFP)-样稳定表达EGFP,又与Foxn1nu裸小鼠(BALB/c背景)一样具有T细胞缺乏的荧光裸小鼠新品系-Foxn1nu.B6-CAG-EGFP|SU,Pep3为b型是有别于Foxn1nu裸小鼠的生化遗传标记位点。     

胶质瘤干/祖细胞诱导宿主巨噬细胞癌变的实验研究

目的 探讨进展期肿瘤组织中的巨噬细胞是否癌变并对肿瘤生长起促进作用. 方法 将转染红色荧光蛋白(RFP)的人脑胶质瘤干/祖细胞(SU3)接种于12只表达绿色荧光蛋白(GFP)的裸小鼠腹腔,致瘤后取腹水或肿瘤结节培养,从GFP+细胞中克隆可传代的SU3细胞诱导的宿主腹腔肿瘤细胞株(SU3-ihCTC),并进行体外生长特性检测和分子表型试验、分子遗传学检测和致瘤试验. 结果 SU3-RFP/GFP荷瘤鼠腹水为血性,在肠系膜等腹腔脏器上长出许多肿瘤结节,取其培养细胞中RFP+和GFP+细胞,发现它们都具有增殖潜能,经单克隆的SU3-ihCTC细胞,具有生长接触抑制消失,增殖速度快,高集落形成率,染色体异倍体、端着丝粒等体外生长的癌细胞表型,而且在裸小鼠体内具有高致瘤率(12/12),同时表达巨噬细胞标志蛋白CD68. 结论 胶质瘤中被肿瘤细胞征集来的巨噬细胞不但能促进肿瘤细胞生长,而且自身已癌变.