人IgE Cε2-4蛋白稳定表达细胞株的建立与鉴定

目的 建立稳定高表达人IgE Cε2-4蛋白(E24)的工程细胞株,考察E24蛋白与膜受体(FceR Ⅰ)的结合.方法 从SKO-007细胞中钓取E24基因,分别克隆人真核表达载体PcDNA3.1(+)(需要在E24基因前加信号肽序列)和pCMV-L载体;瞬时转染293T细胞,利用双夹心ELISA法鉴定转染上清中的目的 蛋白;选择表达量相对高的质粒转染CHO细胞,G418筛选获得稳定细胞株;RT-PCR法在转录水平上检测E24基因,ELISA法鉴定稳定株上清中的E24蛋白,流式细胞术检测E24蛋白与FceR Ⅰ的结合.结果 成功构建了3种真核表达质粒SP-E24-P3.1、SP Ⅱ.E24-P3.1和E24-PL,瞬时转染293T细胞,上清中的目的 蛋白表达量分别为19.1、19.4和8.7μg/ml.以质粒SPⅡ-E24-P3.1转染CHO细胞,经3轮亚克隆获得了2株稳定高表达E24蛋白的细胞株,表达量均超过25 μg/ml.RT-PCR可扩增出细胞株中的E24基因;流式细胞术显示E24蛋白可以与FceR Ⅰ呈剂量依赖性的结合.结论 经筛选获得了2株表达E24蛋白的工程细胞株,且E24可以特异性的结合FceRⅠ.     

抗人重组IL—1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株 ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定，抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ＩｇＧ１，免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带，ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α，ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无     

FKBP12/BAX双聚体诱导细胞凋亡模型的建立

目的：建立FKBP12／BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型,并利用阳性药物对其进行鉴定。方法：RT-PCR扩增鼠源性BAX全长基因,插入pUC18载体进行测序鉴定。将鉴定正确的mBAX插入载体pC4FV1E中,构建pC4FV1E／BAX表达质粒。将表达质粒与pcDNA3．1共转染HEK293细胞,建立pCAFV1E／BAX-neo和neo基因稳定表达的细胞模型。利用形态学方法、流式细胞术等对化学药物诱导FKBP12／BAX双聚体介导的细胞凋亡进行定性及定量的分析。结果：RT-PCR、Westem blot法分别从mRNA及蛋白水平检测到FKBP12-mBAX融合基因的整合及表达;阳性化合物AP20187作用4～6h后,Giemsa染色可见明显的凋亡小体;钙依赖核酸内切酶亦被激活,出现典型的“DNA ladder”;天然产物FK506可竞争性地抑制这种阳性药物诱导的细胞凋亡。结论：FKBP12／BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型的建立,为FK506类小分子化合药物的高通量筛选提供可应用的技术平台。     

CD4小分子拮抗剂的筛选及功能测定

目的筛选靶向CD4 D1功能表位的小分子化合物，并对其介导的免疫抑制功能进行初步评价。方法分别利用MqT以及^3H-TdR掺人法，检测小分子化合物对混合淋巴细胞反应（MLR）的抑制作用，筛选出具有一定剂量依赖抑制效应的小分子化合物；并进一步通过C57BL／6→BALB／c小鼠同种异体皮肤移植模型，对筛选出的小分子化合物的抗移植排斥作用进行初步评价。结果在筛选的19个小分子化合物中，J2呈现出良好的剂量依赖性地抑制T淋巴细胞增殖的作用。进一步抗小鼠皮肤移植排斥反应实验发现，J2能够有效延长皮肤植片的存活时间。结论小分子化合物J2具有良好的免疫抑制作用。     

IL—6诱导人骨髓瘤细胞表达CD45

目的：研究髓瘤细胞系Sko-007中IL－6信号途径活化与CD45诱导表达之间的关系。方法：首先采用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法检测参与IL－6信号转导功能的转录因子STAT3和NF－IL－6在Sko-007细胞中的诱导活化情况并确定该细胞中IL－6信号转导途径;进而采用RT－PCR和FACS方法检测CD45mRNA和蛋白在IL－6刺激作用下的诱导表达情况;最后采用以上两种方法观察CD45诱导表达与I－6信号途径活化之间的关系。结果：①两种主要的IL－6信号转导途径JAK／STAT和Ras/NF-IL-6都能够在Sko-007细胞中诱导激活;②CD45mRNA和蛋白的表达量在IL－6刺激作用下明显增加;③STAT3反义表达质粒导入Sko-007细胞后JAK／STAT途径活化信号减弱,同时CD45mRNA诱导表达量下降。结论：Sko－007细胞中JAK／STAT途径的诱导激活介导了CD45的诱导表达。     

干扰素-α及其在重症肌无力治疗中的应用(综述)

重症肌无力 (MG)是T细胞依赖、抗体介导的自身免疫性疾病。寻找一种副反应少、疗效好、特异性抑制免疫系统的治疗方法势在必行。IFN α是其中一种具有多种生物学效应的细胞因子 ,具有较强的免疫双向调节作用。近来在治疗实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)及MG的研究中显示有效。本文就IFN α的分子结构特点、生物学作用及其在EAMG动物和MG患者中的临床应用等方面作一综述。     

蛋白激酶ERK活化介导IFN-α在人骨髓瘤细胞系U266上的增殖促进效应

目的：研究IFN－α在人骨髓瘤细胞系U266上生物学效应及其分子机制。方法：采用MTT方法检测IFN－α对U266细胞生长的影响；采用FACS方法检测IFN－α作用下U266细胞生长周期及其表面IL－6R、gp130等分子表达水平的改变情况；采用免疫印迹方法检测能够介导细胞生长的Ras／MAPK途径中蛋白激酶ERK在IFN－α刺激作用下的活化情况，并同时观察Ras/MAPK途径特异性抑制剂PD98059作用后ERK激酶活化和细胞生长所发生的变化。结果：IFN－α能够促进U266细胞周期行进，同时表现出细胞增殖促进效应；但它不影响U266 细胞上IL－6R和gp130分子的表达。IFN－α可明显激活蛋白激酶ERK，PD98059作用后ERK活化受抑，同时IFN－α在U266细胞上的生长促进效应明显下调。结论：IFN－α通过激活蛋白激酶ERK介导其在U266细胞上的增殖促进效应。     

保留胸长神经的乳腺癌改良根治术的临床效果分析

目的 探讨保留胸长神经的乳腺癌改良根治术的临床效果.方法 选取2016年1月至2019年6月延安市人民医院收治的乳腺癌患者112例,随机分为A、B两组,每组56例.A组行保留胸长神经的乳腺癌改良根治术,B组行传统乳腺癌改良根治术;比较两组围术期各项信息、并发症发生情况、生存质量,局部复发、远处转移和生存情况.结果 A组引流时间、住院时间、术中出血量、总引流量均明显少于B组,手术时间明显长于B组,差异有统计学意义(P＜0.05);两组淋巴结清扫时间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);A组皮下积液、皮瓣坏死、上肢水肿发生率均低于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05);A组胸大肌重度萎缩发生率、腋窝和上臂内侧感觉障碍发生率均明显低于B组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组术后8周FACT-B各维度评分均明显高于B组,差异有统计学意义(P＜0.05);经随访,两组腋窝淋巴结复发率、锁骨上淋巴结转移率、远处转移率和总生存率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 保留胸长神经的乳腺癌改良根治术可有效减轻术中创伤,减少并发症发生,提高患者生存质量,但肿瘤控制效果未受明显影响,值得临床应用.     

抗Erbin特异性单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗Erbin单克隆抗体.方法:应用基因工程技术构建含Erbin PDZ序列的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)以获得重组蛋白的表达;采用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白;通过质谱鉴定重组蛋白;利用纯化的重组蛋白免疫小鼠,通过细胞融合技术制备单克隆抗体.结果:构建了原核表达载体pET-28a(+)-Erbin PDZ,获得了重组蛋白在工程菌中的高效表达.通过对以包涵体形式存在的重组蛋白进行洗涤、溶解、复性和纯化,获得了纯度在90%以上的重组蛋白.经质谱鉴定确证表达的重组蛋白为Erbin PDZ.用重组蛋白免疫小鼠后,经细胞融合、筛选及鉴定,获得了高效价的单克隆抗体.讨论:该抗体可识别天然状态下的Erbin蛋白,可用于ELISA、免疫荧光和免疫沉淀实验.抗Erbin单克隆抗体的制备为研究Erbin的功能奠定了基础.     

异基因造血干细胞移植后早期和成熟T细胞亚群的恢复

对21例异基因造血干细胞移植病人移植后3个月内外周血T细胞CD3 CD5+和CD3+CD5+亚群的百分比进行了测定.CD3 CD5+细胞作为早期胸腺细胞的标志,在移植后3个月内均低于正常对照,CD3+CD5+细胞作为成熟T细胞的标志,在移植后2-3个月开始恢复,说明移植后早期(3个月内)T细胞数量的恢复主要依靠成熟T细胞的扩增.CD3+CD5+细胞在发生急性移植物抗宿主病的病人中明显升高.