尾型同源盒基因2过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的多药耐药性的影响。方法将SGC7901／DDP细胞分为实验组[Cdx2过表达重组慢病毒载体（pCMA-Cdx2-HA）处理]、空载体组[慢病毒载体（pCMA-HA）处理]、对照组（不做处理）3组。MTT法检测各组SGC7901／DDP细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测各组SGC7901／DDP细胞阿霉素的泵出蓄积量、细胞周期分布及凋亡情况;Westernblot技术进一步检测Cdx2蛋白和多药耐药基因1（MDRl）的蛋白表达水平。组间比较采用方差分析。结果SGC7901／DDP细胞感染慢病毒载体72h后,转染效率达90％以上。实验组Cdx2蛋白的相对表达量为0．374-0．06,较空载体组的0．12±0．02和对照组的0．11±0．03明显升高,3组比较,差异有统计学意义（F=82．37,P〈0．05）。实验组SGC7901／DDP细胞对阿霉素、5．氟尿嘧啶和顺铂的半数凋亡浓度分别为（1．10±0．08）mg／L、（4．81±0．12）mg／L、（3．81±0．15）mg／L,均高于空载体组的（0．59±0．05）mg／L、（3．71±0．14）mg／L、（2．20±0．15）mg／L和对照组的（0．63±0．04）mg／L、（3．92±0．15）mg／L、（2．92-4-0．11）mg／L,3组比较,差异有统计学意义（F=158．75,98．06,188．78,P〈0．05）。实验组阿霉素的泵出率为18．20％±0．12％,高于空载体组的7．22％±0．09％和对照组的8．79％4-0．11％,3组比较,差异有统计学意义（F=146．31,P〈0．05）。实验组G．期细胞的比例为52．2％±4．4％,明显低于空载体组的62．0％±5．O％和对照组的67．8％±3．3％;实验组S期的细胞比例为40．4％±1．5％,明显高于空载体组的25．6％±2．O％和对照组的21．8％±1．3％,3组细胞G．期和S期比较,差异均有统计学意义（F=17．08,236．83,P〈0．05）。实验组细胞凋亡率为7．6％±1．3％,明显低于空载体组的11．1％±1．1％和对照组的10．8％±1．0％,3组比较,差异有统计学意义（F=16．29,P〈0．05）。实验组中MDRl蛋白的表达量为1．854-0．18,高于空载体组的1．124-0．08和对照组的1．024-0．09,3组比较,差异有统计学意义（F=76．22,P〈0．05）。结论Cdx2基因的过表达可降低胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性,降低化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,增强胃癌多药耐药细胞的耐药性。     

转录因子CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响*

 目的： 探索CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、生长和细胞周期的影响及其分子机制。方法: 采用携带CDX2基因的重组慢病毒颗粒（LV-CDX2-GFP）感染SGC-7901细胞,作为实验组（LV-CDX2-GFP组）;以对照慢病毒颗粒（LV-GFP）感染SGC-7901细胞,作为阴性对照组（LV-GFP组）;空白对照组常规培养,不做任何处理。分别采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞周期的分布,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting技术检测细胞中CDX2、Bax、Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达。结果: 与LV-GFP组和空白对照组比较,LV-CDX2-GFP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),G0/G1期所占比例上升(P<0.05),Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达降低（P<0.05）,Bax mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,而LV-GFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论: 慢病毒介导的CDX2过表达抑制胃癌细胞增殖和生长,使细胞周期停滞在 G0/G1期,其机制可能与CDX2过表达使胃癌细胞Bcl-2、cyclin D1、survivin表达下调和Bax表达上调有关。     

基于生物信息学分析结直肠癌STIM1高频突变介导的免疫抵抗模式及其分子机制

目的 探讨结直肠癌（colorectal cancer，CRC）基因突变频谱及其介导的CRC免疫抵抗的分子机制。方法 选择2019年1月至2020年1月广西医科大学附属肿瘤医院收治的CRC患者36例，采用新一代测序（NGS）技术检测组织和血液样本中的基因突变情况。对突变频谱进行分子网络事件描述，采用TIMER和CancerSEA数据库对核心分子进行免疫浸润和组织单细胞分布分析，用Reactome数据库对核心分子进行功能聚类分析，利用STRING数据库分析核心免疫抵抗事件网络。结果 组织和血液样本检测结果显示，基质相互作用分子1（stromal interaction molecule 1，STIM1）为筛选的高频突变基因（突变频率为97.2%）。免疫浸润和单细胞分布显示STIM1与RELA、JUN共同参与免疫反应，STIM1、RELA与JUN mRNA在结肠癌患者中的表达与CD4+T细胞的浸润水平显著相关（r=0.554，0.565，0.319，均P<0.05），且RELA、JUN均与STIM1呈正相关 （r=0.579，0.223，均P<0.05）。Kaplan-Meier分析结果显示，CD4+T细胞和巨噬细胞浸润水平越高，结肠癌患者生存预后越差。功能聚类分析显示，STIM1与适应性免疫系统、固有免疫系统、免疫系统中的细胞因子信号转导以及免疫反应蛋白类泛素化修饰相关，PPI网络分析显示，STIM1与RELA、JUN相关。结论  STIM1可能与RELA、JUN共同参与免疫抵抗网络形成，是CRC免疫抵抗中的重要调控因素及潜在的治疗靶点。     

E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响

目的 探讨E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响及作用机制。方法 HCT116/L细胞分为HCT116/L+E2F1组、HCT116/L+NC组和HCT116/L组，HCT116/L+E2F1组和HCT116/L+NC组分别转染E2F1过表达重组慢病毒载体（pCMA-E2F1-HA）及其阴性对照慢病毒载体（pCMA-HA）。Western blot检测E2F1蛋白的表达水平；MTT法检测各组对化疗药物（阿霉素、5-FU和顺铂）的敏感性；流式细胞仪检测各组细胞内阿霉素的泵出率和细胞凋亡情况；细胞划痕实验检测细胞迁移情况。Western blot进一步检测耐药相关基因MDR1蛋白的表达水平。结果 HCT116/L+E2F1组的E2F1蛋白表达水平明显高于HCT116/L+NC组和HCT116/L组（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组对阿霉素、5-FU和顺铂的IC₅₀值分别为（1.61±0.21） μg/mL﹑（5.22±0.12） μg/mL﹑（3.52±0.15） μg/mL，高于HCT116/L+NC组的（0.61±0.11） μg/mL、（3.93±0.54） μg/mL、（2.31±0.45） μg/mL和HCT116/L组的（0.69±0.13） μg/mL、（4.19±0.51） μg/mL、（2.51±0.42） μg/mL（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组阿霉素的泵出率为（22.51±0.12）%，亦高于HCT116/L+NC组的（10.92±0.09）%和HCT116/L组的（8.45±0.11）%（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组细胞凋亡率为（6.42±0.52）%，低于HCT116/L+NC组的（12.81±0.69）%和HCT116/L组的（11.45±0.31）%（P＜0.05），HCT116/L+E2F1组能增强细胞迁移能力（P＜0.05），并阻滞细胞于S期。HCT116/L+E2F1组中MDR1蛋白表达量为0.41±0.08，高于HCT116/L+NC组的0.19±0.08和HCT116/L组的0.15±0.07（P＜0.05）。结论 E2F1 基因过表达可降低人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L 对化疗药物的敏感性，上调MDR1基因表达，使化疗药物在结肠癌细胞内的蓄积浓度降低，从而增强人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L的多药耐药性。