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目的预测和验证Has-miR-29a与盆腔器官脱垂(POP)相关的靶基因。方法应用miRBase、PicTar以及TargetScan三大数据库进行生物学信息分析,预测Has-miR-29a全部作用靶点,结合前期实验结果,筛选出与POP可能相关的靶基因为COL1A1、COL3A1;构建靶基因的3'UTR的表达载体,双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-29a对靶基因的靶向作用;将miR-29a对照组、miR-29a过表达组和miR-29a抑制组分别共转染离体培养的盆底组织成纤维细胞,免疫印迹法检测靶蛋白Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白的表达变化。结果在线预测结果提示,COL3A1 mRNA-3'UTR和COL1A1 mRNA-3'UTR均有与miRNA-29a完全互补的配对序列,确定二者均为miR-29a的靶基因。miR-29a的过表达和抑制均能够相应的引起Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量变化。结论COL1A1和COL3A1是miR-29a直接作用的靶基因,且主要结合位置在COL1A1和COL3A1的3'UTR区域,在转录后水平抑制COL1A1和COL3A1基因,即miR-29a可能靶向调控Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,参与POP的发生、发展过程。 相似文献
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