MiR-30a-3p靶基因的预测与验证

目的:预测和验证miR-30a-3p的靶基因。方法:利用生物信息学方法预测miR-30a-3p的靶基因;扩增靶基因3'UTR区,与pmirGLO质粒连接构建靶基因融合表达载体后与miR-30a-3p mimics共同转染到人正常滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞中,利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-3p与靶基因的靶向关系;在HTR-8/SVneo细胞中转染miR-30a-3p mimics,利用Western Blot实验检测靶蛋白表达水平。结果:生物信息学方法预测结果显示胰岛素样生长因子-1(IGF-1)为miR-30a-3p靶基因之一;双荧光素酶报告基因实验显示,IGF-1基因3'UTR区中含有明确的miR-30a-3p结合位点;Western Blot实验结果显示HTR-8/SVneo细胞转染miR-30a-3p mimics后,IGF-1蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论:miR-30a-3p与IGF-1有确切的靶向关系,miR-30a-3p能够负性调控IGF-1蛋白水平的表达。     

miR-4279通过靶向Gli1调控宫颈癌的发生发展

目的探讨miR-4279在子宫颈癌的增殖过程中的作用及其作用靶点。方法利用q RT-PCR比较miR-4279在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞系He La和C-33A中的表达水平;通过转染miR-4279的模拟物或抑制物的方法来过表达或敲低miR-4279;通过miR-4279靶基因预测网站miRanda和Targetscan,寻找miR-4279的靶基因;通过免疫印迹来检测Gli1的蛋白水平,利用荧光素酶报告系统来检测Gli1 3’-UTR的活性,明确Gli1是否为miR-4279的靶基因。结果 (1)与正常宫颈上皮细胞(1.00±0.02)相比,miR-4279在宫颈癌细胞系He La(0.54±0.10)和C-33A(0.48±0.08)中表达显著较低(P0.001);(2)网站预测结果显示,Gli1为miR-4279的潜在靶基因;(3)过表达miR-4279下调Gli1的蛋白水平,抑制miR-4279上调Gli1的蛋白水平;(4)过表达miR-4279导致结合Gli1的3’-UTR的能力(1.30±0.03)显著高于对照组(1.00±0.01)(P0.01),抑制miR-4279导致结合Gli1的3’-UTR的能力(0.43±0.02)显著低于对照组(1.00±0.06)(P0.001)。结论 miR-4279能够通过Gli1调控宫颈癌的发生发展,是一种潜在的抑癌因子。     

胶原蛋白相关基因COL15A1多态性与盆腔器官脱垂的关联研究

目的:评估胶原蛋白相关基因COL15A1的单核苷酸多态性(SNPs)与中国女性盆腔器官脱垂(POP)的遗传关联。方法:选取POP-QⅢ期和Ⅳ期脱垂的病例组(48例)和没有脱垂的对照组(48例),进行候选基因关联研究。采用目标区域捕获测序方法鉴定胶原相关基因COL15A1的多态性。SNPs与POP之间的关联通过Fisher精确检验(未校正模型)和logistic回归分析(校正POP发生高危因素分娩和妊娠)进行检测。结果:在未校正模型和校正模型中,COL15A1的SNP位点rs2297603与POP之间存在显著相关性(未校正模型:OR=0.44,95%CI为0.21～0.92,P=0.027;校正模型:OR=0.37,95%CI为0.17～0.83,P=0.016)。在校正模型中,rs2075663和rs7854112与POP之间趋向显著相关(OR=1.80,95%CI为0.97～3.35,P=0.062;OR=1.79,95%CI为0.91～3.53,P=0.092)。结论:COL15A1基因多态性与POP的发生相关,并发现与脱垂显著关联的候选SNPs。本研究结果为进一步研究胶原相关基因在POP病因中的作用提供新的证据。     

miR-4279通过靶向Gli1调控宫颈癌的发生发展北大核心CSCD

目的探讨miR-4279在子宫颈癌的增殖过程中的作用及其作用靶点。方法利用q RT-PCR比较miR-4279在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞系He La和C-33A中的表达水平;通过转染miR-4279的模拟物或抑制物的方法来过表达或敲低miR-4279;通过miR-4279靶基因预测网站miRanda和Targetscan,寻找miR-4279的靶基因;通过免疫印迹来检测Gli1的蛋白水平,利用荧光素酶报告系统来检测Gli1 3’-UTR的活性,明确Gli1是否为miR-4279的靶基因。结果 （1）与正常宫颈上皮细胞（1.00±0.02）相比,miR-4279在宫颈癌细胞系He La（0.54±0.10）和C-33A（0.48±0.08）中表达显著较低（P〈0.001）;（2）网站预测结果显示,Gli1为miR-4279的潜在靶基因;（3）过表达miR-4279下调Gli1的蛋白水平,抑制miR-4279上调Gli1的蛋白水平;（4）过表达miR-4279导致结合Gli1的3’-UTR的能力（1.30±0.03）显著高于对照组（1.00±0.01）（P〈0.01）,抑制miR-4279导致结合Gli1的3’-UTR的能力（0.43±0.02）显著低于对照组（1.00±0.06）（P〈0.001）。结论 miR-4279能够通过Gli1调控宫颈癌的发生发展,是一种潜在的抑癌因子。     

miR-134 miR-17～92基因簇与卵巢癌耐药的关系

目的 检测并验证miR-134及miR-17～92基因簇在紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞中的差异表达并探讨两者参与卵巢癌耐药的可能机制。方法 2010年10月至2012年12月于中国医科大学附属盛京医院,用Affymetrix GeneChip miRNA 芯片对紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞miRNA基因表达谱进行分析。选取差异表达明显的miR-134 和miR-17～92基因簇,采用Real -time PCR方法进一步验证芯片结果。应用生物信息学分析软件预测miR-134 和miR-17～92基因簇各自潜在的靶基因并通过Western Blot对部分靶基因进行验证。结果 与敏感卵巢癌SKOV3细胞相比,耐药卵巢癌SKOV3-TR30细胞中miR-134低表达,miR-17～92基因簇高表达。软件预测得到miR-134 基因簇潜在靶基因c-Myc,MRP1/ABCC1等共128个, 软件预测得到miR-17~92 基因簇潜在靶基因BIM,PTEN,ABCA1等共30个。与敏感卵巢癌SKOV3细胞相比,耐药卵巢癌SKOV3-TR30细胞中miR-134潜在靶基因c-Myc蛋白高表达;miR-17~92 基因簇潜在靶基因BIM蛋白低表达（[WTBX]P[WTBZ]均﹤0.05）,PTEN蛋白虽表达增高但差异无统计学意义。结论 MicroRNA表达谱基因芯片可筛查出紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞的差异表达基因。低表达miR-134和高表达的miR-17～92基因簇可能分别通过调节其潜在靶基因c-Myc及BIM蛋白表达参与卵巢癌化疗耐药。     

miR-186通过下调EGFR表达对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨miR-186与EGFR在宫颈癌组织和细胞中的表达及作用机制。方法:RT-PCR与Western blot法分别检测30例宫颈癌组织与30例正常宫颈组织中miR-186与EGFR表达,分析其与宫颈癌临床病理之间的关系。增殖侵袭实验检测SiHa和HeLa细胞增殖与侵袭;双荧光素酶实验明确EGFR的3'-非翻译区(3'-UTR)是否为miR-186的直接靶点。结果:与正常宫颈组织比较,宫颈癌组织中miR-186呈低表达,EGFR呈高表达,两者均与宫颈癌分化程度、淋巴转移密切相关。宫颈癌组织中miR-186表达与EGFR表达均呈负相关(EGFR mRNA:R~2=0.865,P0.001;EGFR蛋白:R~2=0.832,P0.001)。上调miR-186表达能抑制SiHa和HeLa细胞的增殖与侵袭。双荧光素酶实验明确miR-186靶定了EGFR的3'UTR并影响了EGFR的蛋白表达。EGFR过表达逆转了miR-186抑制的细胞增殖和侵袭。结论:miR-186通过靶定EGFR的3'-UTR抑制EGFR表达进而抑制宫颈癌SiHa和HeLa细胞的增殖与侵袭。     

下调microRNA-205表达对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和侵袭的作用

目的:探讨下调microRNA-205(miR-205)表达对人子宫内膜样腺癌细胞系Ishika-wa增殖和侵袭的作用及可能的机制。方法:将miR-205抑制剂(miR-205 inhibitor)瞬时转染Ishikawa细胞,下调miR-205的表达;应用实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测miR-205的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力。qRT-PCR和Western blot分别检测miR-205的预测靶基因ESRRG mRNA和蛋白表达水平。应用双荧光素酶分析方法鉴定miR-205和ESRRG 3'UTR的表达调节关系。结果:miR-205在Ishikawa细胞中呈高表达;转染miR-205 inhibitor的Ishikawa细胞中,miR-205表达降低了86.9%,细胞增殖和侵袭能力下降,同时细胞ESRRG mRNA和蛋白表达升高;miR-205通过直接与ESRRG mR-NA 3'UTR结合负调节其表达。结论:下调miR-205表达可抑制Ishikawa细胞增殖、侵袭能力;miR-205的生物效应可能与调节潜在抑癌基因ESRRG有关。     

miR-217靶向调控TLR4对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-217靶向调控TLR4对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用双荧光素酶试验验证TLR4为miR-217的下游靶基因,在卵巢癌细胞中转染NC mimics和miR-217 mimics,并设立mock对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测TLR4 mRNA的表达量、Western blotting检测TLR4蛋白的表达量。然后通过CCK8、划痕和Transwell小室法检测卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 miR-217靶向调控TLR4的3'-UTR,降低了荧光素酶的表达活性。与NC mimics组比,miR-217 mimics组TLR4 mRNA和蛋白表达水平明显降低,且miR-217 mimics组细胞的增殖、迁移、侵袭能力也均降低。结论 miR-217通过靶向调控TLR4抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

LncRNA MALAT1靶向miR124-3p/STAT3对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探究LncRNA MALAT1靶向miR124-3p/STAT3对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法采用RT-PCR检测Ect1/E6E7、Hela、SiHa和C33a细胞中LncRNA MALAT1的mRNA表达水平;构建慢病毒稳定细胞系,采用双荧光素酶报告基因分析LncRNA MALAT1和miR-124-3p-OE的靶向关系;采用MTT法检测细胞的增殖活力;采用Transwell分析细胞的侵袭情况;采用Western blot检测细胞中STAT3的蛋白表达。结果与Ect1/E6E7细胞比较,Hela、SiHa和C33a细胞中LncRNA MALAT1的mRNA相对表达水平明显上升(P 0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示LncRNA MALAT1靶向作用miR-124-3p并下调其表达水平(P 0.05)。LncRNA MALAT1敲降或miR-124-3p过表达均可显著抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭,并下调STAT3的蛋白表达(P0.05)。结论 LncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p/STAT3分子轴促进宫颈癌细胞的增殖和迁移,有望为宫颈癌的早期诊断和临床治疗提供新的思路。     

microRNA-99b表达调控对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。方法:利用转染试剂将Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor转染宫颈癌HeLa细胞,荧光实时定量PCR方法检测miR-99b表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测其靶基因CDC-25A蛋白的表达。结果:转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor的HeLa细胞,miR-99b表达增高86.45倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,同时细胞CDC-25A蛋白表达降低。结论:上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC-25A表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-99b可能成为治疗宫颈癌的靶基因。     

miR-223-3p靶向NLRP3调控子痫前期胎盘中炎性反应的机制研究

目的:探讨miR-223-3p能否通过靶向NLRP3参与调节子痫前期(PE)胎盘中的炎性反应。方法:选取2018年12月至2020年01月在江苏省苏北人民医院住院行剖宫产分娩的60例孕妇,其中PE组30例,正常对照组30例。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹、免疫组化法对胎盘组织中NLRP3和miR-223-3p的表达模式进行评估。通过生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验探究miR-223-3p与NLRP3的靶向关系。利用脂多糖(LPS)诱导HTR8/SVneo细胞构建PE胎盘滋养细胞炎症模型。在炎症模型中转染miR-223-3p过表达或miR-223-3p阴性对照质粒,评估miR-223-3p过表达对NLRP3炎性小体相关基因及下游因子的调控作用。结果:与正常对照组相比,PE胎盘中NLRP3在mRNA和蛋白水平上表达均显著上调(P<0.05),而miR-223-3p表达明显下调(P<0.05)。NLRP3是miR-223-3p的一个靶基因。在LPS诱导的HTR8/SVneo细胞炎症模型中,过表达miR-223-3p可有效抑制NLRP3炎性小体的激活(P<0.05)、下游炎性因子的分泌(P<0.05)和细胞焦亡(P<0.05)。结论:miR-223-3p可能通过靶向NLRP3抑制PE胎盘中的炎症反应和细胞焦亡,为PE的治疗提供了一个新的潜在治疗策略。     

基因表达谱芯片在盆腔器官脱垂发病相关基因检测中的应用

目的 应用基因表达谱芯片检测绝经后盆腔器官脱垂(POP)患者与绝经后非POP患者子宫主韧带组织中差异表达的基因,探讨POP发生的分子机制.方法 选择2007年1-5月在北京协和医院妇产科手术的绝经后POP患者3例为POP组,同期因妇科良性疾病行子宫全切除术的绝经后非POP患者3例为对照组.获取两组患者的子宫主韧带组织,进行组织来源确定及形态学观察;应用基因表达谱芯片筛选两组子宫主韧带组织中的差异表达基因,并进行功能分析;采用实时荧光定量PCR技术验证所筛选的差异表达基因的表达水平.结果 POP组患者子宫主韧带组织中胶原纤维与平滑肌束失去正常的排列,形态紊乱,可见胶原纤维断裂,平滑肌束细碎.采用基因表达谱芯片共筛选出179个差异表达的基因,其中包括加个功能未知的基因.107个基因在POP组中表达上调,72个基因在POP组中表达下调.差异基因涉及多种功能蛋白和代谢通路,其中Wnt信号传导通路的变化最显著(P=0.000).实时荧光定量PCR技术检测证实,COL1A1、DKK1、SFRP1、FZD5、WNT16b基因在POP组中的表达水平分别为2.98±1.40、3.03±0.48、8.13±4.42、5.19.4±3.50和12.40±3.88,均明显高于对照组(分别为1.09±0.08、1.20±0.18、0.41±0.51、0.87±0.24和1.40±0.47,P<0.05),与基因表达谱芯片的检测结果一致.结论 POP的病理牛理过程复杂,涉及多种功能蛋白和代谢通路,其中Wnt信号传导通路拮抗剂DKK1、SFRP1介导的神经退行性病变可能与POP的发病密切相关.     

miR-630在子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及其机制

目的探讨miR-630对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法将体外培养的Ishikawa细胞分为miR-630 mimics组、mimics-NC组、miR-630 inhibitor组和inhibitor-NC组,采用实时荧光定量PCR检测miR-630表达,MTT实验和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移。双荧光素酶报告基因实验检测miR-630和BMI1的靶向关系,免疫印迹法检测BMI1蛋白的表达。结果与相应对照组相比,转染miR-630 mimics可使Ishikawa细胞中miR-630表达水平明显升高,细胞OD值和BMI1蛋白的表达水平明显降低,克隆数、侵袭细胞数和迁移细胞数明显减少(P0.05);而转染miR-630 inhibitor引起Ishikawa细胞的变化与转染miR-630 mimics的结果正好相反(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实BMI1是miR-630的靶基因。结论 miR-630可抑制Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向调控BMI1表达有关。     

MMP-9、TIMP-1与Ⅲ型胶原在压力性尿失禁患者阴道壁组织中的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1)与Ⅲ型胶原与压力性尿失禁(SUI)发病的关系。方法选择宁夏医科大学附属医院妇产科收治的SUI患者67例为研究组,并分为SUI组(36例)和SUI+盆腔器官脱垂(POP)组(31例)。选择同期非SUI和POP患者20例作为对照组。采用免疫组化方法测定阴道前壁组织中MMP-9、TIMP-1及Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果SUI组、SUI+POP组及对照组MMP-9的阳性表达率分别为75.0%、77.4%和15.0%,TIMP-1的阳性表达率分别为19.4%、25.8%和90.0%,Ⅲ型胶原的阳性表达率分别为25.0%、22.5%和90.0%。SUI和SUI+POP组MMP-9、TIMP-1和Ⅲ型胶原的表达均明显高于对照组(P0.01)。但SUI组与SUI+POP组三者的表达比较,差异均无统计学意义(P0.05)。MMP-9与Ⅲ型胶原呈负相关(r=-0.523,P0.01);TIMP-1与Ⅲ型胶原呈正相关(r=0.626,P0.01)。结论MMP-9与TIMP-1的共同作用可能使胶原分解增加,盆底组织中胶原蛋白的减少是SUI发病的重要原因。     

HPV18阳性宫颈癌患者组织中miR-124和HOXB8蛋白的表达及其机制研究

目的探讨miR-124和同源盒B8(HOXB8)蛋白在人乳头瘤病毒18型阳性患者宫颈癌组织中的表达及作用机制。方法选取2015年4月至2017年4月于广西南宁第一人民医院就诊的HPV18阳性与阴性宫颈癌患者各60例,采用定量PCR检测患者宫颈癌组织中miR-124表达;通过免疫组织化学的方法检测宫颈癌组织中HOXB8蛋白的表达;采用Pearson法分析HPV18阳性患者中miR-124与HOXB8表达之间的相关性,利用Target Scan和mi Rbase预测mi R-124靶基因;在细胞水平上通过培养人宫颈癌细胞系Si Ha细胞株,观察mi R-124mRNA和HOXB8表达的相关性。结果 HPV18阳性患者宫颈癌组织中mi R-124的表达显著低于HPV18阴性患者,而HOXB8蛋白在宫颈癌组织中表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05);对miR-124靶基因进行预测发现,其可能通过结合HOXB8 5’UTR区域调控HOXB8的表达;在SiHa细胞中上调miR-124的表达水平, HOXB8表达显著降低,细胞增殖活力显著增强,与对照组比较差异有统计学意义(P 0.05);而抑制细胞内源miR-124的表达时,HOXB8表达水平则显著升高,细胞增殖活力显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P 0.05)。结论在HPV18阳性宫颈癌组织中,miR-124表达下调,而miR-124可能通过靶向调控HOXB8基因在蛋白水平中的表达,参与HPV18阳性宫颈癌的发生与发展过程。     

弹性蛋白基因变异与盆腔器官脱垂的相关性

目的探讨弹性蛋白(elastin)基因突变与盆腔器官脱垂(POP)的关系。方法收集2007年9月至2009年9月在河北医科大学第二医院因POP或主因其他妇科疾病同时伴有POP住院患者血标本30例,采用聚合酶链式反应对Ⅰ、Ⅱ期POP患者9例,Ⅲ、Ⅳ期患者21例,对照组20例的elastin基因16、17、26号外显子扩增,对产物测序。结果外显子16发现846T/A和853G/A两个变异位点,846T/A在Ⅲ、Ⅳ期POP组5例,对照组1例,两组846T/A变异率为23.8%、5.0%,二者比较差异无统计学意义。其优势比(OR)值为5.94(95%CI0.63～56.20)。853G/A在Ⅲ、Ⅳ期POP组10例,对照组1例,两组853G/A变异率为47.6%,5.0%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。其OR值为17.27(95%CI1.94～153.66)。Ⅰ、Ⅱ期POP组16号外显子未发现变异。17号与26号外显子未发现变异。结论 846T/A可能不是Ⅲ、Ⅳ期POP的发病因素。853G/A可以增加Ⅲ、Ⅳ期POP患病风险。853G/A可能是Ⅲ、Ⅳ期POP的一个发病因素。     

miR-200a靶向雌孕激素受体抑制子宫内膜癌细胞生长的作用研究

目的:探讨miR-200a对子宫内膜癌细胞雌孕激素受体的靶向作用及生长的影响。方法:选取两种人子宫内膜癌细胞株KLE和Ishikawa,q PCR法检测miR-200a、ESR1和PGR含量,Western blot法检测ER和PR表达。分别在Ishikawa、KLE细胞株中敲除、过表达miR-200a,检测miR-200a对Ishikawa细胞中ESR1和PGR mRNA含量,以及ER和PR表达水平的影响。采用MTT、流式细胞仪、细胞划痕实验和Transwell实验检测miR-200a对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:Ishikawa细胞中miR-200a、ESR1和PGR含量及ER和PR表达水平均高于KLE细胞(P0.01)。敲除miR-200a后,可降低Ishikawa细胞中ESR1和PGR含量及ER和PR表达水平(P0.01)。敲除miR-200a后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强,细胞凋亡水平下降,过表达miR-200a则呈相反效应(P0.01)。给予他莫昔芬和RU-486后,上述效应均被一定程度逆转(P0.01)。结论:miR-200a可靶向作用于子宫内膜癌细胞雌孕激素受体,进而抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,有效促进细胞的凋亡。     

微小RNA-101在子痫前期胎盘组织中表达及调控机制研究

目的探讨微小RNA-101(miR-101)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达和作用及可能的调控机制。方法收集2012年1月至2015年12月咸宁市中心医院收治的40例PE患者和40例正常孕妇胎盘组织,采用荧光定量PCR分析胎盘组织中miR-101的表达情况。体外转染miR-101抑制物至人滋养层细胞系(HTR-8/SVneo),并观察其对细胞侵袭及凋亡的影响。通过生物信息学,双荧光素酶报告基因试验及蛋白质印迹分析miR-101靶基因。结果 miR-101在PE患者胎盘组织的表达量明显高于正常胎盘组织(P0.05),而基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在PE患者胎盘组织的表达量明显低于正常胎盘组织(P0.05),二者表达水平呈明显负相关(P0.05)。体外敲低miR-101可明显促进HTR-8/SVneo细胞的侵袭(P0.05),并抑制细胞凋亡(P0.05)。MMP-1是miR-101的靶基因,miR-101可通过与MMP-1信使RNA的3’-非编码区(3’-UTR)结合并抑制其翻译。体外敲低miR-101可显著增加MMP-1的蛋白表达水平(P0.05)。结论 miR-101在PE患者胎盘组织中呈现高表达,敲低miR-101可显著促进胎盘细胞的侵袭并抑制其凋亡。MMP-1是miR-101的下游直接靶基因,提示miR-101可能通过负性调控MMP-1参与子痫前期的发生发展过程。     

微小RNA 27a在卵巢上皮性癌紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系

目的 研究微小RNA 27a(miR-27a)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系.方法 采用实时PCR技术检测卵巢癌A2780细胞及其紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol中miR-27a的表达水平.利用脂质体lipofectamine 2000将成熟miR-27a的模拟物、阻遏物及阴性对照(NC)转染A2780和A2780/Taxol细胞,实时PCR技术检测转染细胞中MDRI基因mRNA的表达;蛋白印迹法检测转染细胞中P-糖蛋白(P-gp)和同源结构域相关的蛋白激酶2(HIPK2)蛋白的表达;采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪分别检测紫杉醇作用于转染后细胞的增殖情况及细胞凋亡率.结果 (1)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比表达水平增高2.2倍,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染miR-27a阻遏物后,A2780/Taxol细胞中MDR1 mRNA的表达水平为0.61±0.14,与转染NC细胞(表达水平为1.00)比较下降39%,差异有统计学意义(P<0.05);P-gp印蛋白的表达水平为(26±5)%,HIPK2蛋白的表达水平为(30±6)%,分别与转染NC细胞的P-gp蛋白[(43±7)%]和HIPK2蛋白[(19±4)%]的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性增加,半数抑制浓度(IC50)为0.5 μmol/L,与转染NC细胞(IC50为6.8 μmol/L)比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率明显升高,达(32.5±3.6)%,与转染NC细胞的凋亡率(5.6±2.1)%比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)转染miR-27a模拟物后,A2780细胞中MDR1 mRNA的表达水平为2.21±0.11,与转染NC细胞(表达水平为1.00)比较升高121%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-27a在卵巢癌紫杉醇耐药细胞中高表达,其町能通过调控靶基因HIPK2,间接调节MDB1及P-gp的表达和功能而参与耐药.