RT-PCR测序法检测G6PD缺乏症基因突变

目的 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 （G6PD）缺乏症是最常见的遗传性溶血性红细胞酶缺陷病,绝大多数为编码区单碱基突变,现有的多种基因突变检测方法均存在漏检率。该研究拟探讨RT-PCR测序法检测G6PD缺乏症基因突变的可行性。方法 将2013年8月至2014年7月的195例贫血查因或体检儿童根据G6PD/6GPD比值 （结果 G6PD缺乏组的基因突变检出率为100%,共检出13种错义突变,包括1种新突变。对照组中28例男性均没有检出错义突变;37例女性中13例检出杂合型错义突变,1例国内外未见报道的纯合型同义突变C1191T,14例C1311T多态位点。对照组的女性标本存在较高的G6PD缺乏症 （携带者）漏检率 （35%,13/37）。结论 RT-PCR测序法对G6PD基因突变检出率高,具有较大临床诊断价值。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因启动子甲基化研究

目的 了解葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因启动子区甲基化改变特点,探讨甲基化改变与G6PD缺乏症的关系。方法 将2013年8月至2014年7月期间195例贫血查因或体检儿童分为G6PD缺乏组(130例)和对照组(65例)。荧光定量PCR检测G6PDmRNA表达情况。甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)结合重亚硫酸盐PCR测序法(BSP)等方法分析G6PDmRNA表达偏低的G6PD缺乏症患者的基因启动子甲基化改变情况,另对G6PDmRNA表达正常的44例女性标本(G6PD缺乏组7例和正常对照组37例)的G6PD基因启动子甲基化情况进行分析。结果 22例(16.9%,22/130)G6PD缺乏症患者的G6PDmRNA表达偏低,其中的16例男性均无甲基化、6例女性均存在部分甲基化。44例G6PDmRNA表达正常的G6PD缺乏组及对照组女性中,40例检测到部分甲基化,4例无甲基化(G6PD缺乏组1例,对照组3例)。结论 基因启动子区甲基化与男性G6PD缺乏症没有关联。女性人群G6PD基因存在部分甲基化与无甲基化,提示甲基化改变对女性G6PD缺乏症可能有一定影响。     

一步法多重RT-PCR对儿童急性淋巴细胞白血病常见融合基因的检测及意义

目的 探讨一步法多重RT-PCR 对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)常见4 种融合基因的检测效果。方法 2003 年1 月至2010 年12 月确诊的ALL 患儿76 例,采集所有患儿骨髓标本,提取细胞总RNA,一步法多重RT-PCR 或常规巢式PCR 法对E2A/PBX1、MLL/AF4、BCR/ABL 和TEL/AML1 融合基因进行检测;DNA测序对PCR 结果进行验证。结果 一步法多重RT-PCR 及DNA 测序验证显示76 例ALL 患儿中,TEL/AML1融合基因阳性12 例(产物长度分别为298 bp 9 例,259 bp 3 例), E2A/PBX1 融合基因阳性3 例(产物长度373 bp), BCR/ABL 融合基因阳性1 例(产物长度2124 bp),MLL/AF4 融合基因阳性7 例(产物长度分别为427 bp 1 例,673 bp 6 例),与常规巢式PCR 检出结果一致。结论 一步法多重RT-PCR 可应用于儿童ALL 常见融合基因的检测。     

β地中海贫血高凝状态的发病机制及相关临床研究进展

该文综述了β 地中海贫血（简称β 地贫）患者高凝状态的发病机制,包括血小板活化、红细胞膜改变、血管内皮细胞粘附分子表达增加及铁过载等;详述了β 地贫患者高凝状态及血栓形成的临床依据、脾切除术对高凝状态的影响以及相关临床表现;讨论了β 地贫中间型患者血栓栓塞性事件的防治措施,包括输血以提高血红蛋白水平,避免或延迟脾切除术以及一些处在探索阶段的治疗方式。     

常规基因检测阴性的地中海贫血疑似病例再行进一步基因检测仍有7％的阳性发现

目的 探讨血液学初筛指标阳性且临床常规基因检测阴性的疑似地中海贫血（简称地贫）患者再进一步行常规和罕见基因突变检测,丰富对地贫的病因学认识。方法 以深圳市儿童医院地贫血液学初筛［Hb、RBC平均容积(MCV)、RBC平均Hb量(MCH)、Hb电泳）］试验阳性,且常规基因（3种缺失型地贫、3种非缺失型α地贫、17种β地贫点突变）检测阴性的疑似地贫的连续病例为研究对象,提取全血基因组DNA,以Sanger基因测序、Gap-PCR和荧光定量PCR的方法,检测常规基因和罕见基因突变情况。结果 2011年1~9月地贫血液学初筛阳性且常规基因检测阴性285例患者进入本文分析,其中＜16岁279例。进一步基因检测阳性21例（7.4％）：①常规基因检测阳性5例（1.8％）,CD27-28（+C）、CD41-42（-TCTT）各2例,IVS-2-654（C>T）1例;②罕见基因检测阳性16例（5.6%）,其中Sanger基因测序检出：异常Hb病3例（Hb Port Phillip、Hb Ernz、Hb J-Bangkok各1例）,Hb Ernz类型为亚洲人群中首次检出;非缺失型β地贫-90（C>T）2例;Gap-PCR和荧光实时PCR检出：缺失型α地贫5例（-α/αα 2例、--/αα 3例）,缺失型β地贫（-/β）3例,α地贫合并β地贫（--/αα合并-/β）1例,α-三联体（ααα/αα）2例。③99/264例进一步基因检测阴性患者行血液学检查,60例（60.6%）铁蛋白低于正常值,其中44例Hb和（或）MCV和（或）MCH低于正常值下限;3例提示有贫血,但铁蛋白值显著增加。结论 地贫血液学初筛指标阳性,常规基因检测阴性群体仍有7％左右的珠蛋白异常基因检出率,有必要再行进一步基因检测。