MK-801拮抗水杨酸钠致螺旋神经节细胞损伤的实验研究

目的探讨非特异性阻断NMDA受体拮抗水杨酸钠对离体培养螺旋神经节细胞兴奋性损伤的作用。方法将培养的耳蜗螺旋神经节细胞随机分为3组,分别为正常对照组:培养液中仅加入1mM谷氨酸;水杨酸钠组:1mM谷氨酸+5mM水杨酸钠;MK-801组:50μM MK-801+1mM谷氨酸+5mM水杨酸钠。培养24h后加药物干预3h,收集细胞采用实时荧光定量PCR及免疫荧光技术检测BDNF exonⅣ,BDNF exonⅥ转录及Caspase-3mRNA转录和蛋白表达的改变,研究应用MK-801非特异性阻断NMDA受体拮抗水杨酸钠对离体培养螺旋神经节细胞兴奋性损伤的作用。结果水杨酸钠组较谷氨酸组及MK-801组螺旋神经节细胞中BDNF exonⅣ,BDNF exonⅥ和Caspase-3 mRNA的转录及Cas-pase-3蛋白的表达水平显著增高(P值均<0.05);BDNF exonⅣ的转录在MK-801组较谷氨酸组明显降低(P<0.05);BDNF exonⅥ的转录在MK-801组较谷氨酸组未发生具有统计学意义的改变;Caspase-3的转录及蛋白的表达在MK-801组较谷氨酸组显著提高(P<0.05)。结论非特异性阻断NMDA受体能拮抗水杨酸钠引起的离体培养螺旋神经节细胞中BDNFexonⅣ,BDNFexonⅥ及Caspase-3上调。     

探讨NR2B受体参与拮抗水杨酸钠引起离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3mRNA上调的实验研究

目的：探讨NR2B受体参与拮抗水杨酸钠引起离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3mRNA上调的作用。方法：将培养的耳蜗螺旋神经节细胞随机分为3组，分别为谷氨酸组：培养液中仅加入1mm谷氨酸，水杨酸钠组：培养液中加入1mm谷氨酸和5mm水杨酸钠，艾芬地尔组：培养液中加入10μm艾芬地尔、1mm谷氨酸和5mm水杨酸钠。上述三组细胞需培养24h后，再加药物干预3h。收集细胞并采用实时荧光定量PCR技术检测Caspase-3mRNA的转录情况，以研究应用艾芬地尔特异性阻断NR2B受体对水杨酸钠引起离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3基因上调过程的影响情况。结果：艾芬地尔组螺旋神经节细胞中的Caspase-3 mRNA转录水平显著高于谷氨酸组螺旋神经节细胞和水杨酸钠组螺旋神经节细胞（P值均＜0.01），而水杨酸钠组螺旋神经节细胞中的Caspase-3mRNA转录水平又显著高于较谷氨酸组螺旋神经节细胞(P<0.01)。结论：NR2B受体能够拮抗水杨酸钠引起的离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3mRNA的上调。     

水杨酸钠对顺铂所致耳毒性的保护作用

目的探讨水杨酸钠（SS）是否对顺铂（CDDP）所致的豚鼠耳毒性具有保护作用。方法将48只豚鼠随机分为4组：A组（对照组）、B组（SS组）、C组（CDDP组）、D组（SS＋CDDP组）,每组12只。对每组豚鼠右耳测用药前、后听性脑干反应（ABR）阈值;每组随机取6只耳蜗,通过免疫组化测定各组耳蜗螺旋神经节细胞（SGC）中Caspase-3的表达情况。结果 A组与B组用药后ABR阈值、SGC的Caspase-3表达量比较差异均无显著统计学意义（P〉0.05）;C、D组用药后ABR阈值、SGC的Caspase-3表达量明显高于A、B组（P〈0.05）;D组用药后ABR阈值、SGC的Caspase-3表达量明显低于C组（P〈0.05）。结论水杨酸钠对顺铂所致的耳毒性具有一定的保护作用。     

美金刚拮抗阿米卡星对豚鼠螺旋神经节细胞毒性的实验研究

目的通过圆窗龛局部给药,探讨美金刚对阿米卡星致豚鼠螺旋神经节细胞毒性的拮抗作用。方法将听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测结果小于40dBSPL的花色豚鼠共60只,随机分为4组,每组15只。Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:单纯阿米卡星给药组(肌肉注射阿米卡星);Ⅲ组:人工外淋巴液(artificial perilymph,APL)+阿米卡星给药组(左耳圆窗龛注人APL60μl后,肌肉注射阿米卡星);IV组:美金刚+阿米卡星给药组(左耳圆窗龛注入溶于APL的美金刚5mg/ml,60μl后,肌肉注射阿米卡星)。阿米卡星注射量为400mg/kg/d,连续注射5天,停药14天后,每组动物行ABR阈值检测,将动物处死,取出每组动物左耳蜗。每组随机取6只通过免疫组织化学染色观察耳蜗螺旋神经节caspase3表达情况。剩下6只行原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)法检测螺旋神经节细胞凋亡率。结果给药前,各组动物ABR阈值检测结果均小于40dBSPL。给药后,各组动物左耳ABR阈值结果为:Ⅰ组:37.08±3.34dB SPL,Ⅱ组:90.42±5.42dBSPL,Ⅲ组:91.17±5.37dB SPL,IV组:78.75±6.78dB SPL。免疫组织化学染色显示,Ⅱ组、Ⅲ组动物耳蜗螺旋神经节caspase3表达较Ⅰ组升高(P<0.01)。IV组动物耳蜗螺旋节caspase3表达较Ⅱ组、Ⅲ组降低(P<0.05),较Ⅰ组升高(P<0.01)。TUNEL法检测螺旋神经节细胞凋亡率:Ⅱ组、Ⅲ组动物耳蜗螺旋神经节细胞凋亡率较Ⅰ组明显升高(P<0.001)。IV组动物耳蜗螺旋神经节凋亡率较Ⅱ组、Ⅲ组降低(P<0.01),较Ⅰ组升高(P<0.001)。结论 (1)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,豚鼠ABR阈值低于单纯肌肉注射阿米卡星ABR阈值。(2)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,螺旋神经节caspase3表达较单纯肌肉注射阿米卡星减少。(3)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,螺旋神经节凋亡较单纯肌肉注射阿米卡星减少。美金刚经圆窗龛给药对阿米卡星螺旋神经节细胞毒性有一定拮抗作用。     

水杨酸钠对豚鼠听反应阈值、螺旋神经节形态及GABA、GLU表达的影响

目的探讨水杨酸钠对豚鼠听反应阈值、螺旋神经节形态及γ氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(GLU)表达的影响。方法将40只成年豚鼠随机均分为两组,A组予生理盐水腹腔注射,B组予水杨酸钠300 mg/(kg.d)腹腔注射;给药15 d后每组随机选取10只豚鼠,通过美国TDT系统测量两组听性脑干反应(ABR)阈值,扫描电镜观察两组豚鼠螺旋神经节形态学改变,采用免疫组织化学ABC法检测两组豚鼠耳蜗螺旋神经节GABA、GLU的表达。剩余动物停止给药,继续喂养30 d后,完成以上检测。结果 B组给药15 d后,豚鼠ABR阈值升高,螺旋神经节排列紊乱,胞体欠光滑,神经纤维易离断,螺旋神经节GABA、GLU的表达升高。B组停药30 d后,豚鼠ABR阈值仍停留在高阈值水平,螺旋神经节形态学上述改变仍存在,螺旋神经节GABA、GLU的表达较给药15 d后有所升高(P均<0.05)。A组以上观察指标无明显变化。结论水杨酸钠可提高豚鼠听反应阈值,部分改变螺旋神经节形态,增高GABA、GLU的表达。     

MK-801拮抗水杨酸钠对豚鼠耳毒性的实验研究

目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体阻滞剂地卓西平(MK-801)拮抗水杨酸钠(SS)对豚鼠耳毒性的实验研究。方法:将48只成年豚鼠随机分成4组,每组12只:A组为空白对照组;B组为水杨酸钠组,腹腔注射水杨酸钠;C组为水杨酸钠与人工外淋巴液(APL)组,APL滴于明胶海绵置于左耳圆窗龛,同时腹腔注射水杨酸钠;D组为水杨酸钠与MK-801组,MK-801滴于明胶海绵置于左耳圆窗龛,同时腹腔注射水杨酸钠。给药10天后,免疫组织化学染色法检测4组豚鼠耳蜗螺旋神经节(SGN)内凋亡调控因子caspase-3蛋白表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:A组SGN内caspase-3表达量少,B、C2组表达量明显高于A组(p<0.01),而D组与B、C相比,caspase-3表达量较低(p<0.01),但仍高于A组(P<0.01)。TUNEL检测结果显示B、C、D3组SGN凋亡率均明显高于A组(p<0.01),而D组SGN凋亡率低于B、C2组(P<0.01)。结论:腹腔持续注射大量水杨酸钠可引起豚鼠螺旋神经节细胞caspase-3表达量和细胞凋亡率增高;MK-801经耳蜗圆窗龛局部给药可在一定程度上拮抗水杨酸钠引起的的耳毒性。