水杨酸钠诱导大鼠螺旋神经节细胞发生程序性坏死的研究

目的 探讨受体相互作用蛋白激酶-1(receptor-interacting protein kinase1,RIPK1)/受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)/混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain...     

美金刚拮抗阿米卡星对豚鼠螺旋神经节细胞毒性的实验研究

目的通过圆窗龛局部给药,探讨美金刚对阿米卡星致豚鼠螺旋神经节细胞毒性的拮抗作用。方法将听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测结果小于40dBSPL的花色豚鼠共60只,随机分为4组,每组15只。Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:单纯阿米卡星给药组(肌肉注射阿米卡星);Ⅲ组:人工外淋巴液(artificial perilymph,APL)+阿米卡星给药组(左耳圆窗龛注人APL60μl后,肌肉注射阿米卡星);IV组:美金刚+阿米卡星给药组(左耳圆窗龛注入溶于APL的美金刚5mg/ml,60μl后,肌肉注射阿米卡星)。阿米卡星注射量为400mg/kg/d,连续注射5天,停药14天后,每组动物行ABR阈值检测,将动物处死,取出每组动物左耳蜗。每组随机取6只通过免疫组织化学染色观察耳蜗螺旋神经节caspase3表达情况。剩下6只行原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)法检测螺旋神经节细胞凋亡率。结果给药前,各组动物ABR阈值检测结果均小于40dBSPL。给药后,各组动物左耳ABR阈值结果为:Ⅰ组:37.08±3.34dB SPL,Ⅱ组:90.42±5.42dBSPL,Ⅲ组:91.17±5.37dB SPL,IV组:78.75±6.78dB SPL。免疫组织化学染色显示,Ⅱ组、Ⅲ组动物耳蜗螺旋神经节caspase3表达较Ⅰ组升高(P<0.01)。IV组动物耳蜗螺旋节caspase3表达较Ⅱ组、Ⅲ组降低(P<0.05),较Ⅰ组升高(P<0.01)。TUNEL法检测螺旋神经节细胞凋亡率:Ⅱ组、Ⅲ组动物耳蜗螺旋神经节细胞凋亡率较Ⅰ组明显升高(P<0.001)。IV组动物耳蜗螺旋神经节凋亡率较Ⅱ组、Ⅲ组降低(P<0.01),较Ⅰ组升高(P<0.001)。结论 (1)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,豚鼠ABR阈值低于单纯肌肉注射阿米卡星ABR阈值。(2)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,螺旋神经节caspase3表达较单纯肌肉注射阿米卡星减少。(3)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,螺旋神经节凋亡较单纯肌肉注射阿米卡星减少。美金刚经圆窗龛给药对阿米卡星螺旋神经节细胞毒性有一定拮抗作用。     

水杨酸钠对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞核转录因子-κB蛋白表达的影响

目的：观察水杨酸钠对豚鼠螺旋神经节细胞核转录因子-κB（NF—κB）蛋白表达的影响。方法：将48只健康且耳廓反射正常的花色豚鼠随机分为4组（每组12只），采用免疫组织化学方法测定豚鼠内耳NF-κB蛋白表达。结果：水杨酸钠组螺旋神经节细胞NF-κB蛋白表达明显高于对照组（P＜0．01）、水杨酸钠加尼莫地平组（P＜0．01）及水杨酸钠加氯丙嗪组（P＜0．05）。结论：水杨般钠能促进豚鼠螺旋神经节细胞NF—κB蛋白表达；尼莫地平、氯丙嗪能使水杨酸钠引起的豚鼠螺旋神经节细胞NF-κB蛋白表达作用减弱。     

耳蜗螺旋神经节细胞的电生理实验研究现状

耳蜗螺旋神经节细胞(spiral gaaglion cell，SGC)，可将毛细胞的信号传向听觉中枢，在听觉信息的传导中起着极其重要的作用。目前，应用全细胞记录膜片钳技术，证实了SGC细胞膜上可表达多种离子通道，如电压门控离子通道，ATP控制的离子通道，神经递质受体介导的离子通道等，而各种病理状态下的SGC均伴有某些特定离子通道的电变化。对这些电变化的研究，将为我们在细胞和分子水平上诊断和治疗许多由内耳疾病所导致的耳聋和听力障碍提供可能。     

碱性成纤维细胞生长因子对耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠 …

OBJECTIVE: To understand the effects of basic fibroblast growth factor (bFGF) on survival and neurogenesis of the cultured spiral ganglion cell (SGC) of mouse after exposed to glutamate, and the effects of hFGF and glutamate on free intracellular calcium ion concentration. METHODS: After exposed to 2 x 10(-2) mol/L glutamate for 2 hours, the medium of SGC was replaced with the media containing 25, 50, 100 micrograms/L bFGF. Medium without bFGF was used as control. RESULTS: Twenty-four hours later, more cells in the control group showed signs of cell death than in bFGF groups. After 14 days, specimens were fixed in 4% paraformaldehyde and stained with toluidine blue. It was shown that the SGC in medium with bFGF exhibited more survival and longer neurites, and the effect was dose dependent (P < 0.01). Application of glutamate to the medium induced an increase to the the free intracellular calcium ion concentration in SGC, but bFGF had no such effect. CONCLUSION: Glutamate excitotoxicity was associated with free intracellular calcium ion concentration elevation in SGC, and bFGF could protect SGC against glutamate neurotoxicity.     

内皮素1在豚鼠耳蜗螺旋神经节的分析

内皮素1是1988年日本学者Yanagisawa从猪主动脉内皮细胞培养液中分离纯化的一种活性肽，研究发现内皮素1不仅是收缩能力最强的血管收缩物质，而且具有多种生物学活性，对气道张力形成，细胞增殖与凋亡，离子转运，基因调控等均发挥多种生物学影响，近来发现内皮素1对神经系统的生理活动亦具有调控作用。     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的研究

目的了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的特性。方法采用耳蜗螺旋神经节细胞与耳蜗基底膜整体培养和膜片钳全细胞记录方法。结果采用出生后0至5d的C57BL/10J小鼠(n=30)，耳蜗螺旋神经节细胞与基底膜一道取出，培养8～48h后，基底膜内侧和周围散落的螺旋神经节细胞贴壁良好，便于进行生理学记录。螺旋神经节细胞根据在电流钳记录下有无动作电位来鉴别，健康的细胞在刺激电流的起始端和结束端均可记录到动作电位。细胞平均静息电位(     

硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

为观察硫酸庆大霉素对培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞（SGC）的细胞生存数和细胞突起长度的影响，在单离培养的出生1～5d的NIH小鼠SGC培养液中，加入不同浓度的硫酸庆大霉素（25，50，100mg／L）。培养14d后，标本用4％多聚甲醛固定，甲苯胺蓝染色，在光镜下计数SGC生存数，目镜测微尺下测量细胞突起长度。结果显示，实验组与对照组间、不同浓度实验组间的细胞生存数及细胞突起长度无明显差异（P＞0．05）。提示硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗SGC的生存和生长无明显影响，氨基糖甙类抗生素对SGC的影响可能是继发性的。     

水杨酸钠可逆性抑制耳蜗螺旋神经节神经元GABAa受体电流

目的探讨水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)GABAa受体的作用。方法采用全细胞膜片钳记录技术,观察离体培养大鼠SGN的GABAa受体激活电流的特性及水杨酸钠对其作用特点。结果在SGN上可记录到GABAa受体激动剂GABA诱发的内向电流,该电流呈浓度依赖性且可被荷包牡丹碱所阻断;水杨酸钠作用在SGN上未诱出电流,100μM、500μM的GABA与不同浓度的水杨酸钠(500μM、1000μM、5000μM)分别联合作用时,GABA诱发的电流可被不同程度地抑制,且该抑制作用呈可逆性。结论大鼠SGN上可记录到GABAa受体电流,且水杨酸钠以浓度依赖的方式可逆性抑制GABAa受体电流,抑制作用与GABA浓度有关。     

Temporal Considerations for Stimulating Spiral Ganglion Neurons with Cochlear Implants

A wealth of knowledge about different types of neural responses to electrical stimulation has been developed over the past 100 years. However, the exact forms of neural response properties can vary across different types of neurons. In this review, we survey four stimulus-response phenomena that in recent years are thought to be relevant for cochlear implant stimulation of spiral ganglion neurons (SGNs): refractoriness, facilitation, accommodation, and spike rate adaptation. Of these four, refractoriness is the most widely known, and many perceptual and physiological studies interpret their data in terms of refractoriness without incorporating facilitation, accommodation, or spike rate adaptation. In reality, several or all of these behaviors are likely involved in shaping neural responses, particularly at higher stimulation rates. A better understanding of the individual and combined effects of these phenomena could assist in developing improved cochlear implant stimulation strategies. We review the published physiological data for electrical stimulation of SGNs that explores these four different phenomena, as well as some of the recent studies that might reveal the biophysical bases of these stimulus-response phenomena.     

小鼠螺旋神经节神经元髓鞘的发育

目的研究小鼠螺旋神经节神经元髓鞘的发育,探讨螺旋神经节神经元的发育成熟过程。方法应用透射电镜观察３２只１～６０天龄小鼠螺旋神经节神经元髓鞘的发育。结果新生小鼠螺旋神经节神经元为形态相同的幼稚细胞,由卫星细胞及其伸出的单层突起包绕,无致密髓鞘形成;出生后７天,Ｉ型神经元出现,Ｉ型神经元局部致密髓鞘开始形成;出生后１０～１４天,Ｉ型神经元多层致密髓鞘出现;出生后３０天,可见一种细胞形态和Ｉ型神经元相似而有明显致密髓鞘的神经元;出生后６０天,螺旋神经节神经元髓鞘基本发育成熟。螺旋神经节神经元的发育成熟由底回向顶回逐步发展。结论出生后７～１４天是螺旋神经节神经元发育和成熟的重要阶段。     

氨基糖苷类抗生素对耳蜗螺旋神经节的损害作用

氨基糖苷类药物(Am An)是一类经典的治疗革兰阴性菌感染的抗生素,但具有耳毒性和肾毒性。以往的研究认为Am An的耳毒性仅仅针对内耳毛细胞并可引起继发的延迟性螺旋神经节细胞(SGNs)死亡。但是随着关于Am An耳毒性和对耳蜗其他细胞的研究进展,人们逐渐意识到耳蜗内支持细胞的损害也是引起SGNs延迟死亡的重要原因之一。我们发现,不同的Am An对内耳的损害方式不同,以硫酸链霉素为代表的少数Am An可以不受血-迷路屏障阻碍直接进入内耳并首先损害内耳的周边神经元;而以往认为只能间接损害SGNs的其他那些难以跨越血-迷路屏障的Am An,比如卡那霉素,对出生后三天大鼠处于发育阶段的SGNs也具有直接的损害作用。因此我们提出一个根据不同内耳损害方式来区分Am An的分类建议,并希望本文介绍的新内容能够为更深入理解不同种类Am An的不同耳毒性机制以及听觉系统各个重要组织成分之间的相互作用关系提供新的参考信息。     

水杨酸钠作用后大鼠耳蜗K-Cl协同转运体家族mRNA表达研究

目的 研究水杨酸钠作用后大鼠耳蜗K-Cl协同转运体家族(K - Cl- cotransporter ,KCC)成员KCC1～4mRNA的表达情况,探讨KCC在水杨酸盐耳毒性中的作用及意义.方法 选用30只正常大鼠,随机分成五组,每组6只:第一组为预实验组,未给予任何处理,采用逆转录PCR技术检测大鼠耳蜗中KCC1～4mRNA表达情况;第二、三、四、五组分别为对照组(不用药)、慢性组(肌肉注射水杨酸钠175 mg/kg,2次/天,连用14天后处死观察)、急性组(一次肌肉注射水杨酸钠400 mg/kg后处死观察)、恢复组(水杨酸钠用量及用法同慢性组,停药14天后处死观察),运用荧光定量PCR技术比较各组大鼠耳蜗内KCC1～4mRNA表达情况. 结果 KCC1～4mRNA在正常成年大鼠耳蜗中均有表达;在对照组及水杨酸钠作用后大鼠耳蜗KCC1～4mRNA表达均有变化,急性组KCC1mRNA、慢性组和恢复组KCC2mRNA、恢复组KCC4mRNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),急性组KCC2mRNA、急性组、慢性组和恢复组KCC3mRNA以及急性组、慢性组KCC4mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 KCC1～4mRNA在正常大鼠耳蜗中均有表达,提示其可能共同参与耳蜗内淋巴液Cl-浓度的维持;在水杨酸钠作用后KCC1～4mRNA表达的不同变化,破坏了耳蜗内淋巴液Cl-浓度平衡,影响外毛细胞能动性.     

庆大霉素对小鼠螺旋神经节神经元电生理特性的影响

目的 探讨庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节神经元细胞电生理特性的影响及其意义。方法 应用全细胞电压钳技术研究庆大霉素对急性酶分离小鼠螺旋神经节神经元细胞膜上的钾、钠离子通道电流的峰值的影响．与细胞外液中庆大霉素浓度的关系，以及庆大霉素洗脱后电流的恢复情况。结果 庆大霉素能抑制电压依赖性钾通道，但不能抑制电压依赖性钠通道，其钾通道抑制作用与细胞外液中庆大霉素的浓度呈剂量依赖性，庆大霉素洗脱后电流恢复不完全。结论 庆大霉素通过抑制螺旋神经节神经元细胞的钾离子通道而产生耳毒性。     

水杨酸钠作用后大鼠耳蜗热休克蛋白27表达的研究

目的　研究水杨酸钠作用后大鼠耳蜗热休克蛋白 2 7(heatshockprotein2 7,HSP2 7)的表达特点 ,探讨HSP2 7在水杨酸钠耳毒性中的作用及意义。方法　用免疫组化SP法结合图像分析技术检测水杨酸钠注射后大鼠耳蜗HSP2 7的表达。结果　HSP2 7在正常及水杨酸钠作用后大鼠耳蜗各回均有不同程度的染色 ,主要阳性部位是Corti器、螺旋神经节、螺旋韧带和血管纹。但水杨酸钠作用后HSP2 7在耳蜗各阳性部位的表达均明显增强 ,其中以Corti器的表达更明显 ,P值均小于 0 .0 1。结论　HSP2 7在大鼠耳蜗组织表达有选择性 ,水杨酸钠能够明显诱导HSP2 7在大鼠耳蜗中的表达 ,HSP2 7可能对耳蜗形态结构损害后的修复起作用 ,且与耳鸣的产生发展可能有关。     

EGCG对阿米卡星诱导的大鼠螺旋神经元凋亡的保护作用

目的 研究硫酸阿米卡星(Amikacin sulfate)诱导SD大鼠螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)损伤的机制及表没食子儿茶素表没食子酸酯(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对硫酸阿米卡星耳毒性的保护作用.方法 60只SD大鼠(雌雄各半)随机均分为三组,对照组(NS组)每日皮下注射生理盐水4.5ml/kg,中毒组(A组)每日皮下注射Arnikacin 450 mg/kg,保护组(AE组)每日皮下注射Amikacin 450 mg/kg,同时腹腔注射EGCG 50 mg/kg,以上三组均连续用药14天.每组用药前和用药后第7、14、21、35天随机抽取4只行ABR检测和组织学观察,比较三组间ABR的波潜伏期(peak latency,PL)和波间期(interpeak latency,IPL)、HE染色切片中的螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)计数、TUNEL染色切片后的SGNs凋亡阳性细胞数.结果 ①用药前三组间ABR的PL和IPL无显著性差异,中毒组使用阿米卡星后第14和21天ABR的波潜伏期和波间期较保护组及对照组明显延长(P＜0.05);②使用阿米卡星后,SGNs细胞数随时间的延长逐渐减少,保护组和中毒组有显著差异(P＜0.05);而TUNEL检测片中,中毒组和保护组SGNs的凋亡阳性细胞数均随时间的延长而增多,中毒组明显多于EGCG保护组(P＜0.05).结论 ①阿米卡星能诱导大鼠耳蜗螺旋神经元的凋亡;②EGCG能减低阿米卡星诱导的大鼠耳蜗螺旋神经元的凋亡,对听功能、耳蜗螺旋神经元有很好的保护作用.     

Ouabain Induces Apoptotic Cell Death in Type I Spiral Ganglion Neurons, but not Type II Neurons

Application of ouabain to the intact round-window (RW) membrane of the gerbil cochlea induces apoptosis in most spiral ganglion neurons (SGNs), leaving a few neurons intact (Schmiedt et al. 2002). Here, physiological measures and immunostaining were used to examine the process of SGN degeneration at 3, 6, 12, and 24 h, 4 days, and 1 and 5 months after ouabain treatment. The few remaining neurons surviving up to 5 months after ouabain treatment were immunoreactive for peripherin, a type II neuron marker. Peripherin-positive cell counts indicate that about 7% of the SGNs in the gerbil cochlea are type II neurons, and these neurons survive intact after ouabain treatment. Ouabain exposure had little effect on the outer hair cell and lateral wall systems, even after a 5 month loss of auditory-nerve function. The cellular locations of cytochrome c, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), and activated caspase 3 were examined in control and ouabain-treated cochleas. A redistribution of cytochrome c in peripherin-negative (type I) neurons was observed at 3 h after ouabain exposure. Degraded PARP and activated caspase 3 were also detected in peripherin-negative SGNs at 6 and 24 h after treatment, respectively. These results suggest that the redistribution of cytochrome c is an early event during apoptosis in type I SGNs and that activation of PARP and caspase 3 are associated with apoptosis in these cells. Calcineurin and NF-B are two important signaling pathways that may modulate cell survival in the central nervous system. Here, we found that calcineurin and NF-B selectively labeled type II neurons. It is speculated that the high levels of calcineurin and NF-B in type II SGNs, as compared with type I SGNs, may play protective roles in enhancing the survival of type II neurons exposed to ouabain.